【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及opn1lw的突变作为标志物在高度近视中的诊断应用及相关产品。
技术介绍
1、正常色觉是三原色，需要s(短波长)、m(中波长)、l(长波长)的视锥细胞共同参与。视网膜中绝大多数(～94％)的视锥细胞为l视锥细胞或m视锥细胞，视锥细胞对于调节屈光发育至关重要。opn1lw基因编码视锥细胞长波长光色素基因，其变异可能会导致锥体功能障碍，opn1lw基因功能的完全丧失通常会导致红色盲、高度近视、视锥功能障碍等。
2、opn1lw(简称l)和opn1mw(简称m)位于x染色体，通常为首尾串联排列。由于l基因和m基因的结构和核苷酸序列高度相似(96％以上同源)，两个基因之间容易发生非同源重组，因此需要设计特异的引物来识别和检测opn1lw基因。根据发病年龄，可将高度近视分为发生在学龄后的迟发性高度近视(lohm)和发生在学龄前的早发性高度近视(eohm)。大量的遗传学研究表明eohm不同于lohm，eohm的发病年龄在学龄前(＜7岁)，受环境因素(如近距离工作)影响小，主要是由遗传因素决定。因此，eohm是研究高度近视发病机制的理想模型，也是寻找高度近视相关基因的独特资源。eohm与一些遗传性眼病密切相关，常常是一些遗传性眼病的最早期特征，也是儿童最早就诊的主要原因和临床医生发现潜在眼部疾病的线索。为了提高eohm的临床诊断效率，高通量的第二代测序技术应用越来越广泛。第二代测序通常是利用设计的探针将目标基因或全基因组中的外显子区域捕获下来，然后针对目标区域或每个外显子进行深度测序。利用该技术
3、近视的发病机制复杂，至今仍无法阐明，大量研究结果都明确了遗传因素的作用，此外环境因素也会起到调节修饰的作用。在这种背景下，选择从遗传基因学角度进行研究寻找疾病原因，对于该病的防治意义重大。目前已有机构采用基因检测方法评估受检者的高度近视易感性，例如，基于znf644基因中的一个或多个位点来预测受检者对高度近视的易感性，但是经研究证实只有部分的基因突变与遗传性高度近视发病有关。目前虽然可以通过检测某一基因的突变情况预测高度近视的患病风险，但其有效性还需要进一步验证。因此，亟需挖掘更多的高度近视相关基因突变位点，用于高度近视的早期诊断，尽早干预，延缓疾病发展。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种分离的编码opn1lw突变体的核酸，该突变体存在c.843g>a突变，即nm_020061.6:exon5:c.843g>a突变。该突变与早发性高度近视的发病密切相关，通过检测生物样品中该位点是否发生突变，从而有效评估受检者是否易患高度近视。进一步地，提出了一种筛选高度近视易感者的方法，该方法通过检测受检者的生物样品中opn1lw基因是否存在c.843g>a突变，从而能够有效地筛选出易患高度近视的生物个体。
2、本专利技术nm_020061.6:exon5:c.843g>a突变中的nm_020061.6是指在ncbi的refseq数据库中的编号。
3、一方面，本专利技术提供了检测opn1lw基因nm_020061.6:exon5:c.843g>a突变的试剂在制备近视筛查或预防性筛查的试剂盒中的应用。
4、具体地，所述的nm_020061.6:exon5:c.843g>a突变为无义变异，关联疾病为丧失功能(loss of function,lof)性致病。
5、具体地，所述的近视为高度近视，所述的高度近视为600度以上的早发性近视。
6、具体地，所述的试剂包括opn1lw基因nm_020061.6:exon5基因片段的扩增试剂；
7、所述的opn1lw基因nm_020061.6:exon5基因片段为包含c.843g>a突变的片段。
8、进一步具体地，所述的扩增试剂包括扩增opn1lw基因nm_020061.6:exon5片段的引物。
9、更进一步具体地，所述的引物包括第一轮扩增引物和第二轮扩增引物；所述的第二轮扩增引物的底物为第一轮扩增的产物。
10、优选地，所述的第一轮扩增引物的序列如seq id no.1-seq id no.2所示；所述的第二轮扩增引物的序列如seq id no.3-seq id no.4所示。
11、具体地，所述的扩增试剂还包括但不限于：酶、底物和金属离子。
12、具体地，所述的第一轮扩增试剂采用以下反应体系：
13、 试剂 浓度 用量(μl) kod反应酶 5u/μl 1-2μl <![cdata[kod buffer(mg<sup>2+</sup>plus)]]> 10× 5μl seq id no.1 10μm 0.5-2μl seq id no.2 10μm 0.5-2μl 无核酶水 / 补至50μl
14、第二轮扩增试剂采用以下反应体系：
15、 试剂 浓度 用量 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测OPN1LW基因NM_020061.6:exon5:c.843G>A突变的试剂在制备近视筛查或预防性筛查的试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂包括扩增OPN1LW基因NM_020061.6:exon5片段的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的扩增试剂包括扩增OPN1LW基因NM_020061.6:exon5片段的引物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的引物包括第一轮扩增引物和第二轮扩增引物；所述的第二轮扩增引物的底物为第一次扩增的产物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的第一轮扩增引物的序列如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.2所示；所述的第二轮扩增引物的序列如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒中还包括测序试剂用于测定扩增产物序列。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒中还包括DNA提取试剂和/或RNA提取试剂和/
8.根据权利要求1-7任一项所述的应用，其特征在于，所述的近视筛查为筛查已经发展为近视的个体；所述的预防性筛查为筛查后期有概率发展为近视的个体并发出风险预警。
9.一种扩增OPN1LW基因NM_020061.6:exon5:c.843G>A突变的引物，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列中的任一或多。
10.一种近视筛查或预防性筛查试剂盒，其特征在于，包括检测OPN1LW基因NM_020061.6:exon5:c.843G>A突变的扩增引物。
...【技术特征摘要】
1.检测opn1lw基因nm_020061.6:exon5:c.843g>a突变的试剂在制备近视筛查或预防性筛查的试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂包括扩增opn1lw基因nm_020061.6:exon5片段的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的扩增试剂包括扩增opn1lw基因nm_020061.6:exon5片段的引物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的引物包括第一轮扩增引物和第二轮扩增引物；所述的第二轮扩增引物的底物为第一次扩增的产物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的第一轮扩增引物的序列如seq idno.1-seq id no.2所示；所述的第二轮扩增引物的序列如seq id no.3-seq id no.4所示。
【专利技术属性】
技术研发人员：吴文辉，秦川，于晓光，徐瑶瑶，
申请(专利权)人：上海谱希和光基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。