【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和医学领域，具体地说，是胆固醇或胆固醇代谢酶作为新型特异性生物标志物在鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能中的应用和应用方法。
技术介绍
1、树突状细胞是连接天然免疫和适应性免疫的关键桥梁，在激活机体抗病原体免疫应答及维持自身免疫耐受过程中发挥关键性调控作用。树突状细胞的功能调控决定了免疫应答的整体平衡。树突状细胞广泛分布于非淋巴组织及淋巴组织，树突状细胞的体内迁移对于其成熟活化及功能调控至关重要。然而，越来越多的研究表明树突状细胞迁移的紊乱可能导致树突状细胞在炎症部位的过度聚集及活化，导致组织过度炎症，甚至引发自身免疫性疾病的发生。树突状细胞相关趋化因子及趋化因子受体已成为自身免疫性疾病的潜在诊断标识和治疗靶点。
2、dc迁移受到趋化因子、细胞因子及其他炎症介质的共同调控。分布于外周的未成熟dc通过其表面模式识别受体感知危险信号，摄取病原体后成熟活化，上调趋化因子受体ccr7表达。由淋巴结基质细胞所分泌的ccl19/ccl21作用于dc表达的ccr7，促进dc向次级淋巴器官的t细胞区迁移，启动并调控t细胞介导的适应性免疫应答。ccl19/ccl21被证明与多种自身免疫性疾病如多发性硬化(multiple sclerosis，ms)、类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，ra)及炎症性肠病(inflammatory bowel diseases，ibd)等的发生发展密切相关。ccl19/ccl21或其受体ccr7的基因缺失小鼠中实验性自身免疫性脑脊髓炎、抗原诱导的关节炎发
3、过去的研究已证实趋化因子ccl19和ccl21在诱导树突状细胞从外周向淋巴结迁移，若要确定由树突状细胞的趋化状态或鉴别趋化性树突状细胞，则需要联合检查数个标志物，如联合检测到mhchicd11cintcd40hiccr7+，然而尚无特异性生物标志物可以鉴别趋化性树突状细胞。
4、为方便临床和科研应用，本领域中迫切需要研究和开发出针对鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的特异性表达生物标志物。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的生物标志物：一组胆固醇或胆固醇代谢酶。本专利技术的另一目的在于提供检测胆固醇或胆固醇代谢酶的试剂在制备鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒中的应用。本专利技术的第三个目的在于提供一种鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的方法和试剂盒。
2、本专利技术发现一组胆固醇代谢酶(acat2、cyp51、dhcr24、fdft1、fdps、hmgcs1、hmgcr、hsd17b7、idi1、lss、msmo1及mvk)在树突状细胞受趋化因子ccl19和ccl21刺激后表达上调、在趋化性树突状细胞中比非趋化性树突状细胞表达更高、在树突状细胞由外周组织向淋巴结迁移后表达上调。胆固醇在树突状细胞受趋化因子ccl19和ccl21刺激后表达上调。因而，胆固醇或所述的胆固醇代谢酶能够鉴别趋化性树突状细胞以及树突状细胞的趋化状态和功能。这在临床和科研中对趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的鉴定和判断以及相关疾病的诊断中有广泛的应用前景，可用于例如对象中免疫功能判断、免疫治疗方案选择(例如针对临床感染、炎症、自身免疫性疾病以及肿瘤等免疫相关性疾病的治疗方案选择)和/或预后评估(例如免疫功能的预后评估)。在此基础上，完成了本专利技术。
3、本专利技术的第一方面，提供检测胆固醇或胆固醇代谢酶水平的试剂在制备鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒中的应用，所述的胆固醇代谢酶选自acat2、cyp51、dhcr24、fdft1、fdps、hmgcs1、hmgcr、hsd17b7、idi1、lss、msmo1或mvk中的一种或两种以上。
4、进一步地，所述树突状细胞来源于哺乳动物；优选小鼠、人、大鼠、犬、猴、猩猩、猪、马、牛或羊，更优选小鼠。
5、进一步地，所述趋化状态选自：细胞表面cd11c、ccr7的表达；所述功能选自：树突状细胞在趋化因子ccl19和ccl21刺激后发生迁移(体外)、在病原体或炎症刺激下由外周组织向次级淋巴结迁移(体内)。所述胆固醇或胆固醇代谢酶的表达量与树突状细胞趋化状态正相关。当所述胆固醇或胆固醇代谢酶表达量升高时，代表树突状细胞成功发生趋化或成为趋化性树突状细胞。
6、进一步地，所述胆固醇或胆固醇代谢酶的水平用于免疫功能判断、免疫治疗方案选择和/或预后评估。
7、进一步地，若待鉴别细胞为树突状细胞，该所测细胞中所述胆固醇或胆固醇代谢酶的水平较处理前升高，则表明该所测细胞发生趋化或往趋化性树突状细胞方向转化；若采用候选试剂或体系处理树突状细胞后，所测细胞中的所述胆固醇或胆固醇代谢酶水平与处理前相比升高，则表明所述候选试剂或体系能诱导树突状细胞发生趋化或往趋化性树突状细胞方向转化。
8、进一步地，所述鉴别通过选自下组中的一种或两种以上方法进行：流式细胞术、rna-seq、单细胞rna-seq。
9、进一步地，所述试剂为选自下组中的一种或两种以上：针对所述代谢物化学结构的代谢组学检测，针对所述氨基酸或mrna序列的抗体、或其他以此序列为指示的检测方法。
10、进一步地，所述试剂盒还包含：其它鉴别趋化性树突状细胞的试剂，例如cd11c、ccr7检测试剂。
11、本专利技术的第二方面，提供一种用于鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒，其包含：
12、i)检测胆固醇或胆固醇代谢酶水平的试剂，所述的胆固醇代谢酶选自acat2、cyp51、dhcr24、fdft1、fdps、hmgcs1、hmgcr、hsd17b7、idi1、lss、msmo1或mvk中的一种或两种以上。
13、ii)容纳所述试剂的容器。
14、进一步地，所述鉴别通过选自下组中的一种或两种以上方法进行：流式细胞术、免疫印迹、二代测序rna-seq、代谢组学。
15、进一步地，所述试剂为选自下组中的一种或两种以上：针对所述针对氨基酸序列的抗体、mrna序列的引物、或其他以此序列为指示的检测方法。
16、进一步地，所述试剂盒还包含：其它鉴别趋化性树突状细胞的试剂，例如cd11c、ccr7检测试剂。
17、本专利技术的第三方面，提供一种鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能方法、或鉴别能诱导产生趋化性树突状细胞的试剂或体系的方法，所述方法包括检测待鉴别细胞中胆固醇或胆固醇代谢酶的水平的步骤，所述的胆固醇代谢酶选自acat2、cyp51、dhcr24、fdft1、fdps、hmgcs1、hmgcr、hsd17b7、idi1、lss、msmo1或mvk中的一种或两种以上。
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1.检测胆固醇或胆固醇代谢酶水平的试剂在制备鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒中的应用，其特征在于，所述的胆固醇代谢酶选自Acat2、Cyp51、Dhcr24、Fdft1、Fdps、Hmgcs1、Hmgcr、Hsd17b7、Idi1、Lss、Msmo1或Mvk中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述树突状细胞来源于哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述趋化状态选自：细胞表面CD11c、CCR7的表达；所述功能选自：树突状细胞在趋化因子CCL19和CCL21刺激后发生迁移(体外)、在病原体或炎症刺激下由外周组织向次级淋巴结迁移(体内)。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，若待鉴别细胞为树突状细胞，该所测细胞中所述胆固醇或胆固醇代谢酶的水平较处理前升高，则表明该所测细胞发生趋化或往趋化性树突状细胞方向转化；若采用候选试剂或体系处理树突状细胞后，所测细胞中的所述胆固醇或胆固醇代谢酶水平与处理前相比升高，则表明所述候选试剂或体系能诱导树突状细胞发生趋化或往趋化性树突状细胞方向转化。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为选自下组中的一种或两种以上：针对所述代谢物化学结构的代谢组学检测，针对所述氨基酸或mRNA序列的抗体、或其他以此序列为指示的检测方法。
6.一种用于鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒，其特征在于，包含：
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为选自下组中的一种或两种以上：针对所述针对氨基酸序列的抗体、mRNA序列的引物、或其他以此序列为指示的检测方法。
8.一种鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能方法、或鉴别能诱导产生趋化性树突状细胞的试剂或体系的方法，其特征在于，所述方法包括检测待鉴别细胞中胆固醇或胆固醇代谢酶的水平的步骤，所述的胆固醇代谢酶选自Acat2、Cyp51、Dhcr24、Fdft1、Fdps、Hmgcs1、Hmgcr、Hsd17b7、Idi1、Lss、Msmo1或Mvk中的一种或两种以上。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
...【技术特征摘要】
1.检测胆固醇或胆固醇代谢酶水平的试剂在制备鉴别趋化性树突状细胞和/或其趋化状态和功能的试剂盒中的应用，其特征在于，所述的胆固醇代谢酶选自acat2、cyp51、dhcr24、fdft1、fdps、hmgcs1、hmgcr、hsd17b7、idi1、lss、msmo1或mvk中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述树突状细胞来源于哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述趋化状态选自：细胞表面cd11c、ccr7的表达；所述功能选自：树突状细胞在趋化因子ccl19和ccl21刺激后发生迁移(体外)、在病原体或炎症刺激下由外周组织向次级淋巴结迁移(体内)。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，若待鉴别细胞为树突状细胞，该所测细胞中所述胆固醇或胆固醇代谢酶的水平较处理前升高，则表明该所测细胞发生趋化或往趋化性树突状细胞方向转化；若采用候选试剂或体系处理树突状细胞后，所测细胞中的所述胆固醇或胆固醇代谢酶水平与处理前相比升高，则表明所述候选试剂或体系能诱导树突状细胞发...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘娟，曹雪涛，张晓敏，陈亚丽，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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