【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及微生物细胞、分子生物学、发酵、蛋白质生产、蛋白质回收、蛋白质制剂等领域。本公开的某些实施例涉及编码具有核酸酶活性的新型蛋白质的多核苷酸、表达一种或多种异源核酸酶蛋白质的重组微生物细胞、产生目的蛋白的微生物宿主细胞、从其衍生的基本上不含污染dna的蛋白质制剂等。序列表的引用命名为“nb41859-us-psp_sequencelisting.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2021年8月18日，并且大小为36kb，将其通过引用以其全文特此并入。
技术介绍
1、微生物细胞(菌株)是特别有用的蛋白质生产宿主，因为它们可以容易地在相对简单的培养基中大规模生长。因此，微生物(宿主)细胞(例如，细菌细胞、酵母细胞、丝状真菌细胞等)经常用于重组生产工业相关蛋白质(例如，淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、植酸酶、乳糖酶等)和用于动物饲料、食品酶、洗衣、纺织品加工、谷物加工、医疗器械清洗、生物技术工业、制药工业等的蛋白质生物制品(例如，抗体、细胞因子、受体等)。
2、如本领域技术人员所理解的，用于生产蛋白质的微生物细胞的大规模发酵可能导致污染dna(例如，基因组dna、重组dna)释放到发酵肉汤中，这些dna聚合物可能导致肉汤粘度问题、可能干扰随后的蛋白质回收步骤、可能污染一种或多种最终蛋白质产物等。同样，对于旨在用于动物饲料和/或用作人类食品添加剂的蛋白质/酶制剂中允许的重组dna(rdna)的量，也有越来越多的监管限制。最近，欧洲食品安全局(efsa)提出了10ng rdna的限值(efsa，2018)。p>
3、例如，pct公开号wo 1999/050389总体上描述了具有编码经修饰的核酸酶的dna构建体的微生物菌株，这些经修饰的核酸酶以有效增强聚合物回收的量分泌到周质或生长培养基中，特别是用于高细胞密度发酵过程。pct公开号wo 2008/065200描述了在磷酸盐调节启动子(psts)控制下表达芽孢杆菌属物种(bacillus sp.)核酸酶基因(nucb)的芽孢杆菌菌株的构建。如该公开中一般性所述，由psts启动子表达nucb基因的重组菌株可以在发酵结束时被激活，并在需要清除发酵肉汤中过量dna时表达核酸酶(nucb)。pct公开号wo2011/010094描述了一种在逆转录和扩增反应中去除核酸污染的方法。美国专利公开号us2012/013549描述了一种用于通过在革兰氏阳性细菌中表达核酸酶并将核酸酶分泌到培养基中而从革兰氏阴性细菌(粘质沙雷菌(serratia marcescens))生产核酸酶的方法。pct公开号wo 2013/043860描述了用于降低培养丝状真菌细胞的发酵肉汤中dna含量的某些方法。pct公开号wo 2019/081721描述了被认为在某些洗涤剂配制品等中特别有用的变体核酸酶。
4、基于前述内容，在本领域中对于核酸酶蛋白(酶)、其组合物、其用途和/或其方法仍存在持续且未满足的需求。如下文所述，除其他事项外，本公开提供了新型核酸酶蛋白(酶)、核酸酶组合物及其蛋白质制剂、编码此类核酸酶蛋白的重组多核苷酸(dna)、表达和产生一种或多种核酸酶蛋白(任选地共表达一种或多种目的蛋白)的重组宿主细胞等。更特别地，如下所阐述和描述，本公开的核酸酶蛋白(酶)特别可用于减轻dna污染，例如像，存在于发酵了微生物宿主细胞的发酵肉汤中的污染dna、存在于回收的目的蛋白中的污染dna、存在于蛋白质制剂中的污染dna等。
技术实现思路
1、如本领域通常已知的，微生物细胞发酵肉汤中污染dna(例如，基因组dna、重组dna)的存在和/或在其任何下游蛋白质回收过程中的存在可能导致不期望的蛋白质产物质量。如下文所述，除其他事项外，本公开的某些实施例涉及编码具有核酸酶活性的新型蛋白质的新型基因的鉴定、分离和表征，产生基本上不含dna的各种蛋白质产物(例如，目的蛋白)的重组微生物细胞，用于构建此类重组(经遗传修饰的)微生物宿主细胞的组合物和方法，产生和回收基本上不含dna的各种蛋白质产物的组合物和方法，用于使蛋白质制剂基本上不含dna的组合物和方法等。更特别地，本文所述的新型核酸酶蛋白特别适用于降解可能存在于微生物发酵肉汤、蛋白质制剂、分离的目的蛋白等(如蛋白质生物制品、动物饲料蛋白、人类食品酶等)中的污染dna。
2、因此，本公开的某些实施例涉及与seq id no:1、seq id no:3、seq id no:5、seqid no:7、seq id no:9、seq id no:11或seq id no:15的核苷酸序列具有至少80％同一性的分离的核酸(多核苷酸)。在其他实施例中，本公开的分离的核酸与seq id no:1、seq idno:3、seq id no:5、seq id no:7、seq id no:9或seq id no:11的核苷酸序列具有至少80％的同一性，并且编码分别与seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10或seq id no:12的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质。在相关的实施例中，编码的蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性。在其他实施例中，包含dna酶活性的编码蛋白质基本上是蛋白酶抗性的。
3、因此，本公开的其他实施例涉及包含编码蛋白质的多核苷酸序列的质粒、载体或表达盒，该蛋白质与seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10seq id no:12、seq id no:16或seq id no:17的蛋白质具有至少85％的同一性。
4、在其他实施例中，本公开提供了与seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seqid no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:16或seq id no:17的蛋白质具有至少85％同一性的分离的蛋白质。在特定的实施例中，与seq id no:2、seq id no:4、seq idno:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:16或seq id no:17的蛋白质具有至少85％同一性的分离的蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性。在其他实施例中，与seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:16或seq id no:17的蛋白质具有至少85％同一性的分离的蛋白质包含hnh核酸酶超家族结构域。在其他实施例中，分离的蛋白质包含dna酶活性，并且基本上是蛋白酶抗性的。因此，本公开的某些其他实施例涉及包含一种或多种包含dna酶活性的蛋白质的蛋白质制剂。
5、在另一个实施例中，本公开涉及多核苷酸(例如，表达盒)，其包含可操作地连接到下游(3′)核酸序列的上游(5′)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸，所述分离的核酸与选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15组成的组的核苷酸序列具有至少80％的同一性。
2.一种分离的核酸，所述分离的核酸编码与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17组成的组的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质。
3.如权利要求2所述的核酸，其中所述编码的蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性。
4.一种载体，所述载体包含如权利要求1所述的核酸。
5.一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞包含一种或多种引入的如权利要求4所述的载体。
6.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDN
7.如权利要求6所述的蛋白质，所述蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性。
8.如权利要求6所述的蛋白质，所述蛋白质包含HNH核酸酶超家族结构域。
9.一种蛋白质制剂，所述蛋白质制剂包含一种或多种如权利要求6所述的蛋白质。
10.一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞表达一种或多种与SEQ ID NO:2、SEQID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16或SEQID NO:17的蛋白质序列具有至少85％同一性的蛋白质；或一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞共表达目的蛋白(POI)以及一种或多种与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质。
11.如权利要求10所述的重组细胞，所述重组细胞选自革兰氏阴性细菌细胞、革兰氏阳性细菌细胞、丝状真菌细胞、或酵母细胞。
12.一种发酵肉汤，所述发酵肉汤通过发酵表达一种或多种与SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:17的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质的微生物细胞来获得；或一种发酵肉汤，所述发酵肉汤通过发酵共表达(i)一种或多种目的蛋白和(ii)一种或多种与SEQ ID NO:2、SEQID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16或SEQID NO:17的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质的微生物细胞来获得。
13.如权利要求12所述的肉汤，其中从所述肉汤中分离的所述一种或多种目的蛋白基本上不含污染DNA。
14.一种用于产生基本上不含污染DNA的目的蛋白(POI)的方法，所述方法包括：
15.一种用于产生基本上不含污染DNA的目的蛋白(POI)的方法，所述方法包括：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的核酸，所述分离的核酸与选自由seq id no:1、seq id no:3、seq id no:5、seq id no:7、seq id no:9、seq id no:11、seq id no:13、seq id no:14和seq id no:15组成的组的核苷酸序列具有至少80％的同一性。
2.一种分离的核酸，所述分离的核酸编码与选自由seq id no:2、seq id no:4、seq idno:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:16和seq id no:17组成的组的蛋白质具有至少85％同一性的蛋白质。
3.如权利要求2所述的核酸，其中所述编码的蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性。
4.一种载体，所述载体包含如权利要求1所述的核酸。
5.一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞包含一种或多种引入的如权利要求4所述的载体。
6.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质与选自由seq id no:2、seq id no:4、seq idno:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:16和seq id no:17组成的组的蛋白质具有至少85％的同一性。
7.如权利要求6所述的蛋白质，所述蛋白质包含脱氧核糖核酸酶(dna酶)活性。
8.如权利要求6所述的蛋白质，所述蛋白质包含hnh核酸酶超家族结构域。
9.一种蛋白质制剂，所述蛋白质制剂包含一种或多种如权利要求6所述的蛋白质。
10.一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞表达一种或多种与seq id no:2、seqid no:4、seq id no:6...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·邦吉奥尔尼，R·J·普莱特二世，M·雷博利，A·范齐蒙耐德，A·K·艾弗森，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：
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