【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细小病毒检测的生物检测，特别涉及能同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体。
技术介绍
1、细小病毒是一种小的，适应性较强的，无包膜的单链dna病毒，基因组为4-6kb，其两个开放阅读框分别编码非结构蛋白和衣壳蛋白。猪细小病毒的衣壳是一个球型的外壳，由60个衣壳蛋白组成，vp2是主要的衣壳蛋白。最早的猪细小病毒ppv1是于1965年德国发现的，近二十年又陆续发现了ppv2-pp8等多个亚型。
2、猪细小病毒病是一种传染性极强的病毒病，主要以感染胎儿和胚胎为主，造成死胎、畸形胎和木乃伊胎等现象，给养殖业造成巨大威胁和损失。此外，由于生物制品的生产过程中往往会用到猪来源的相关原材料，猪细小病毒也是生物制品安全的潜在风险。基于此，猪细小病毒的检测是养殖业及生物制品生产的重要环节之一。
3、各国的监管部门也对此做出了相应的监管机制，中国药典生物制品通则《生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制》中指出，如果在生产者建细胞库之前，细胞基质在建立或传代历史中使用了胰酶，则所建立的mcb或wcb和(或)超过生产限定水平的细胞，至少应检测一次与胰酶来源动物相关的外源性病毒，包括猪细小病毒或牛细小病毒。美国药典<1050>和<1237>也指出在生物制品生产过程中对相应的病毒进行检测，可以使用感染细胞法，血吸附和免疫荧光法对猪源性病毒进行相关的检测。美国联邦法规9cfr也指出需要对生物制品中的猪细小病毒进行免疫荧光法检测。
4、目前，分子方法检测是猪细小病毒的检测的常用手段，例
技术实现思路
1、本专利技术制备了一种能同时识别多种猪细小病毒的多克隆抗体，能够对目前发现的所有猪细小病毒亚型进行检测；理论上还可以结合western技术实现对猪细小病毒衣壳蛋白表达方面的研究，还可以结合elisa技术实现对猪细小病毒的高灵敏度检测。因此，本专利技术提供的多克隆抗体能够极大的推动猪细小病毒方面的研究及检测的进展。
2、本专利技术的第一个方面，提供了一种用于制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的抗原蛋白，包括如seq id no.1所示的对应ppv1的氨基酸序列；如seq id no.2所示的对应ppv2的氨基酸序列；如seq id no.3所示的对应ppv3的氨基酸序列；如seq id no.4所示的对应ppv4的氨基酸序列；如seq id no.5所示的对应ppv5的氨基酸序列；如seq idno.6所示的对应ppv6的氨基酸序列；如seq id no.7所示的对应ppv7的氨基酸序列；如seqid no.8所示的对应ppv8的氨基酸序列；相邻的两个氨基酸序列之间还连接有linker序列。
3、进一步地，所述linker序列的氨基酸序列为天然氨基酸序列或人工合成序列。
4、需要说明的是，理论上，上述ppv1-8的序列顺序不影响动物免疫的效果，因此不影响多克隆抗体的获得。因此，本专利技术提供的上述ppv1-8的序列既可以按顺序组合，也可以根据实际需要对8个序列的组合顺序进行适当调整。不论顺序如何调整，都属于本专利技术的保护范围。
5、需要说明的是，本专利技术所选用的linker序列，可参考文献：
6、https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc4514284/。
7、可选地，本专利技术所选用的linker序列只要是包含gs两种氨基酸的组合序列理论上都可行。
8、进一步地，所述linker序列的氨基酸序列如seq id no.11或seq id no.12所示。
9、进一步地，编码seq id no.1所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.13所示；编码seq id no.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.14所示编码seq idno.3所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.15所示；编码seq id no.4所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.16所示；编码seq id no.5所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.17所示；编码seq id no.6所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq idno.18所示；编码seq id no.7所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.19所示；编码seq id no.8所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.20所示。
10、更进一步地，所述抗原蛋白的氨基酸序列如seq id no.9。
11、更进一步地，编码seq id no.9所示的所述抗原蛋白的核苷酸序列如seq idno.10所示。
12、本专利技术的第二个方面，提供了一种上述的抗原蛋白在制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体中的应用。
13、本专利技术的第三个方面，提供了一种用于制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的产品，产品中含有上述任意一种抗原蛋白。
14、本专利技术的第四个方面，提供了一种同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体，所述多克隆抗体是用上述任意一种抗原蛋白作为免疫原，免疫动物后得到。
15、本专利技术的第五个方面，提供了一种同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
16、合成抗原蛋白，所述抗原蛋白的序列由seq id no.1-8所示的氨基酸序列连接而成，并且相邻的两个氨基酸序列之间还连接有linker序列；
17、将所述抗原蛋白注射入免疫动物体内进行动物免疫，获取含有多克隆抗体的血清；
18、对所述血清进行亲和纯化，得到所述多克隆抗体。
19、进一步地，动物免疫的方法为：将核苷酸序列如seq id no.9所示的所述抗原蛋白注射入免疫动物体内进行免疫；初次免疫时所述抗原蛋白与弗氏完全佐剂等体积混匀乳化，第二至四次免疫时所述抗原蛋白与弗氏不完全佐剂等体积混匀乳化；最后再进行一次加强免疫。
20、可选地，初次免疫的剂量为300μg/只，第二至四次免疫的剂量为150μg/只，最后的加强免疫150μg/只；总免疫剂量900μg/只。
21、可选地，五次免疫的时间分别为接种的第0天，第3天，第21天，第28天和第35天。
22、更进一步地，所述免疫动物为新西兰大白兔。
23、本专利技术的第六个方面，提供了一种上述多克隆抗体，或采用上述制备方法制备的多克隆抗体，在制备检测猪细小病毒的产品中的应用。
24、需要说明的是，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的抗原蛋白，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1所示的对应PPV1的氨基酸序列；如SEQ ID NO.2所示的对应PPV2的氨基酸序列；如SEQ ID NO.3所示的对应PPV3的氨基酸序列；如SEQ ID NO.4所示的对应PPV4的氨基酸序列；如SEQ ID NO.5所示的对应PPV5的氨基酸序列；如SEQ ID NO.6所示的对应PPV6的氨基酸序列；如SEQ ID NO.7所示的对应PPV7的氨基酸序列；如SEQ ID NO.8所示的对应PPV8的氨基酸序列；相邻的两个氨基酸序列之间还连接有linker序列。
2.根据权利要求1所述的抗原蛋白，其特征在于，所述linker序列的氨基酸序列如SEQID NO.11或SEQ ID NO.12所示。
3.根据权利要求1所述的抗原蛋白，其特征在于，编码SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示编码SEQ ID NO.3所示的氨基酸序
4.根据权利要求3所述的抗原蛋白，其特征在于，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.9所示。
5.根据权利要求4所述的抗原蛋白，其特征在于，编码SEQ ID NO.9所示的所述抗原蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
6.一种权利要求1-5任一项所述的抗原蛋白在制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体中的应用。
7.一种用于制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的产品，其特征在于，所述产品中含有权利要求1-5任一项所述的抗原蛋白。
8.一种同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体，其特征在于，所述多克隆抗体是用如权利要求1-5任一项所述的抗原蛋白作为免疫原，免疫动物后得到。
9.一种权利要求8所述的多克隆抗体的应用，其特征在于，用于制备检测多种猪细小病毒的产品，或者用于检测猪血清效价，或者用于制备检测猪血清效价的产品，或者用于不以疾病诊断和治疗为目的检测猪细小病毒。
10.一种检测产品，其特征在于，所述检测产品中包括权利要求8所述的多克隆抗体；所述检测产品用于不以疾病诊断和治疗为目的检测多种猪细小病毒的，或者用于检测猪血清效价。
...【技术特征摘要】
1.一种用于制备同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体的抗原蛋白，其特征在于，包括如seq id no.1所示的对应ppv1的氨基酸序列；如seq id no.2所示的对应ppv2的氨基酸序列；如seq id no.3所示的对应ppv3的氨基酸序列；如seq id no.4所示的对应ppv4的氨基酸序列；如seq id no.5所示的对应ppv5的氨基酸序列；如seq id no.6所示的对应ppv6的氨基酸序列；如seq id no.7所示的对应ppv7的氨基酸序列；如seq id no.8所示的对应ppv8的氨基酸序列；相邻的两个氨基酸序列之间还连接有linker序列。
2.根据权利要求1所述的抗原蛋白，其特征在于，所述linker序列的氨基酸序列如seqid no.11或seq id no.12所示。
3.根据权利要求1所述的抗原蛋白，其特征在于，编码seq id no.1所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.13所示；编码seq id no.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.14所示编码seq id no.3所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.15所示；编码seq id no.4所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.16所示；编码seq idno.5所示的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.17所示；编码seq id no.6所示的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：臧照星，刘愈杰，陈连栋，曹影丽，王明珍，徐国东，
申请(专利权)人：武汉珈创生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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