【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种高迁移率族蛋白b1重组单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、高迁移率族蛋白b1(high mobility group box-1protein，hmgb1)是存在于真核细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白，其功能包括促进细胞核中的dna损伤修复、感应核酸及诱导胞质中的先天免疫反应和自噬、细胞外环境中的结合蛋白伴侣和刺激免疫受体。此外，hmgb1是一种广泛的细胞应激传感器，平衡细胞死亡和存活反应，这对细胞稳态和组织维持至关重要。hmgb1也是免疫细胞分泌的重要介质，参与一系列病理状况，包括感染性疾病、缺血再灌注损伤、自身免疫、心血管和神经变性疾病、代谢紊乱和癌症。hmgb1作为人类疾病的生物标志物和药物靶点，具有极大的应用潜力。
技术实现思路
1、基于此，有必要提供一种针对hmgb1的高迁移率族蛋白b1重组单克隆抗体(简称“重组hmgb1蛋白抗体”)及其制备方法和应用。
2、本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供一种重组hmgb1蛋白抗体，所述重组hmgb1蛋白抗体为针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c5、c8或c9；
4、所述针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c5的重链cdr1的氨基酸序列为：gytftet，重链cdr2的氨基酸序列为：arygiyygsslyysmdy，重链cdr3的氨基酸序列为：iypnnggp，轻链cdr1的氨基酸序列为：qslvhsngnty，轻链cdr2的氨基酸序列为：nrfc
5、所述针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c8的重链cdr1的氨基酸序列为：nywmh，重链cdr2的氨基酸序列为：eikpgngrtnynekfst，重链cdr3的氨基酸序列为：dydnpayf，轻链cdr1的氨基酸序列为：esvhnfgvsfmn，轻链cdr2的氨基酸序列为：snqgs，轻链cdr3的氨基酸序列为：qqskevpwtynsd；
6、所述针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c9的重链cdr1的氨基酸序列为：ftysdaw，重链cdr2的氨基酸序列为：wvrqspekglewiae，重链cdr3的氨基酸序列为：phyyghfdv，轻链cdr1的氨基酸序列为：qiivhsngntyle，轻链cdr2的氨基酸序列为：kvenrfs，轻链cdr3的氨基酸序列为：gcdftlkiskveaed。
7、本专利技术还可以提供编码上述重组hmgb1蛋白抗体的基因。
8、本专利技术还可以提供包含编码上述的重组hmgb1蛋白抗体的基因的表达载体或者宿主。
9、本专利技术还提供上述重组hmgb1蛋白抗体的制备方法，包括如下步骤：获得含编码重组hmgb1蛋白抗体的基因的载体；转染hek293f细胞表达，离心，收集上清液；对所述上清液进行纯化，即得。
10、在其中一些实施例中，获得含重组hmgb1蛋白抗体重链、轻链的可变区基因的载体的方法步骤包括：获取大肠杆菌表达的重组hmgb1蛋白；将所述重组hmgb1蛋白作为免疫原，免疫兔，筛选血清的效价和滴度较高的兔摘取脾脏，制成单细胞悬液；采用磁珠分选法，获得能产生igg且特异性识别hmgb1蛋白的细胞株；筛选获得高产重组hmgb1蛋白抗体的单b淋巴细胞株；抽提单b淋巴细胞株的总rna，巢式逆转录pcr出cdna，用重叠延伸pcr技术扩增出重组hmgb1蛋白抗体重链和轻链的可变区基因，转化至载体内，即得。
11、在其中一些实施例中，优选地，所述磁珠分选法为：采用磁珠无柱式分选法进行两步筛选，通过偶联羊抗兔igg抗体和偶联hmgb1蛋白的磁珠捕获能产生igg且特异性识别hmgb1的细胞株。更优选地，所述磁珠选自马来酰亚胺-羧基混合磁珠。
12、在其中一些实施例中，优选地，所述重组hmgb1蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
13、本专利技术还提供上述重组hmgb1蛋白抗体在制备检测hmgb1蛋白的试剂或者试剂盒中的应用。
14、本专利技术还可以提供一种针对hmgb1蛋白的检测试剂盒，包含上述针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c5、c8和/或c9。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
16、本专利技术提供针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c5、c8、c9，可以用于hmgb1蛋白的检测，作为区分健康人群和肺炎患者的诊断参考。
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1.一种重组HMGB1蛋白抗体，其特征在于，所述重组HMGB1蛋白抗体为针对HMGB1蛋白的兔单克隆抗体C5、C8或C9；
2.编码权利要求1所述的重组HMGB1蛋白抗体的基因。
3.一种包含编码权利要求2所述的重组HMGB1蛋白抗体的基因的表达载体或者宿主。
4.权利要求1所述重组HMGB1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求1所述重组HMGB1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，获得含重组HMGB1蛋白抗体重链、轻链的可变区基因的载体的方法步骤包括：
6.根据权利要求5所述重组HMGB1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述磁珠分选法为：
7.根据权利要求6所述重组HMGB1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述磁珠选自马来酰亚胺-羧基混合磁珠。
8.根据权利要求5至7任一项所述重组HMGB1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述重组HMGB1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
9.权利要求1所述的重组HMGB1蛋白抗体在制备检测HMGB1蛋白的试剂或
10.一种针对HMGB1蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的针对HMGB1蛋白的兔单克隆抗体C5、C8和/或C9。
...【技术特征摘要】
1.一种重组hmgb1蛋白抗体，其特征在于，所述重组hmgb1蛋白抗体为针对hmgb1蛋白的兔单克隆抗体c5、c8或c9；
2.编码权利要求1所述的重组hmgb1蛋白抗体的基因。
3.一种包含编码权利要求2所述的重组hmgb1蛋白抗体的基因的表达载体或者宿主。
4.权利要求1所述重组hmgb1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求1所述重组hmgb1蛋白抗体的制备方法，其特征在于，获得含重组hmgb1蛋白抗体重链、轻链的可变区基因的载体的方法步骤包括：
6.根据权利要求5所述重组hmgb...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑雪松，孙建伟，李娜，孔泽凯，陈全勇，张强刚，胡学钻，闫彩霞，陈莹，黄超超，黄祥宏，
申请(专利权)人：武汉贝茵莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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