【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物的应用，特别涉及一种采用病原菌胁迫内生菌分离新抗菌化合物的方法和应用。
技术介绍
1、植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活在植物体内细胞中或在其生活史的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害的一类真菌。植物内生真菌长期与宿主共生，产生一系列次级代谢产物，以保护宿主免受多种胁迫。逆境可能诱导内生真菌产生特殊的次级代谢产物。自然界中，真菌常受到多种胁迫因素的挑战，作为一种生理反应，可能会为了逆境生存而激活适应性代谢重编程。因此，胁迫可能激活植物内生真菌的某些沉默基因，诱导独特的生物代谢途径，从而产生特殊的次级代谢产物。通过病原真菌胁迫内生真菌以寻找具有潜在抗菌活性的天然产物，为发现新型抗菌化合物提供了新方法。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种新抗菌化合物及其制备方法与应用。
2、新抗菌化合物，该化合物命名为(6e,8e)-13-acetoxy-3-hydroxy-8,10,12,14-tetramethylhexadeca-6,8-dienoic acid，具体结构式如下化合物(1)
3、
4、前述的新抗菌化合物或其药用盐在制备抗菌药物中的应用和药学上可接受的载体。
5、所述的新抗菌化合物或其药用盐作为葡萄座腔菌(botryosphaeria dothidea)、灰葡萄孢(botrytis cinerea)、辣椒刺盘孢(colletotrichum capsici)、尖
6、新抗菌化合物的制备方法，将病原菌尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)胁迫内生真菌epicoccum latusicollum同时接种于培养基发酵培养获得培养液，通过抽滤或高速离心将培养液分离成发酵液和菌丝体；弃去菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂富集，采用高效液相制备分离，获得新抗菌化合物。
7、前述的新抗菌化合物的制备方法是，所述培养基为马铃薯葡萄糖肉汤培养基(pdb)，其培养培养参数为18～28℃，160～220r/min培养5～30d，高速离心的转速为10,000～12,000r/min。
8、前述的新抗菌化合物的制备方法是，所述病原菌尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum)和内生真菌(epicoccum latusicollum)发酵前先活化培养，然后4℃低温保存5～30d或直接接种于发酵培养基。
9、前述的新抗菌化合物的制备方法是，所述尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)和内生真菌(epicoccum latusicollum)的接种量为1:1～1:5；所述活化培养为：将尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)和内生真菌(epicoccum latusicollum)接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(pda)中，28±1℃，培养3～7d。
10、前述的新抗菌化合物的制备方法是，所述大孔吸附树脂富集中采用大孔吸附树脂装填50×500mm的层析柱，用无水乙醇洗涤树脂，然后纯水洗脱平衡；将收集的上清液上样，随后用纯水洗涤至流出液近无色；再用80％甲醇/水(v/v)洗脱至流出液近无色，收集该部分洗脱液，50℃下用旋转蒸发仪减压浓缩至恒重，得到粗品。
11、前述的新抗菌化合物的制备方法是，所述高效液相制备分离采用10～50ml含50％乙腈/0.1％乙酸的水溶液溶解粗品，0.45μm滤膜过滤，经高效液相制备分离；所述高效液相制备分离中的流动相为乙腈-0.1％乙酸水溶液，梯度洗脱50～90min，流速50～100ml/min，检测波长为210nm和254nm，高效液相色谱法(hplc)检测并收集分离液，依次合并目标物，旋转蒸发浓缩至小体积，反复纯化，获得化合物纯品
12、与现有技术比较，本专利技术从病原菌尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)胁迫内生真菌(epicoccum latusicollum)发酵产物中制备分离得到化合物(1)，该化合物(1)具有显著的广谱抗菌活性，可以用于制备抗菌药物，为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用植物内生真菌的天然活性物质提供了科学依据和新的思路。
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1.一种新抗菌化合物，其特征在于：该化合物命名为(6E,8E)-13-acetoxy-3-hydroxy-8,10,12,14-tetramethylhexadeca-6,8-dienoic acid，具体结构式如下化合物(1)
2.根据权利要求1所述的新抗菌化合物或其药用盐在制备抗菌药物中的应用和药学上可接受的载体。
3.如权利要求1所述的新抗菌化合物，其特征在于：所述的新抗菌化合物或其药用盐作为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、辣椒刺盘孢(Colletotrichum capsici)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、香蕉炭疽盘长孢菌(Gloeosporium musarum)、可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)、稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)病原真菌的抗真菌药物；所述的新抗菌化合物或其药用盐作为枯草芽孢
4.如权利要求1或2所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：将病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)胁迫内生真菌(Epicoccum latusicollum)同时接种于培养基发酵培养获得培养液，通过抽滤或高速离心将培养液分离成发酵液和菌丝体；弃去菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂富集，采用高效液相制备分离，获得新抗菌化合物。
5.根据权利要求4所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述培养基为马铃薯葡萄糖肉汤培养基(PDB)，其培养培养参数为18～28℃，160～220r/min培养5～30d，高速离心的转速为10,000～12,000r/min。
6.如权利要求3-5任意一项所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和内生真菌(Epicoccum latusicollum)发酵前先活化培养，然后4℃低温保存5～30d或直接接种于发酵培养基。
7.如权利要求6所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和内生真菌(Epicoccum latusicollum)的接种量为1:1～1:5；所述活化培养为：将尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和内生真菌(Epicoccum latusicollum)接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)中，28±1℃，培养3～7d。
8.根据权利要求7所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂富集中采用大孔吸附树脂装填50×500mm的层析柱，用无水乙醇洗涤树脂，然后纯水洗脱平衡；将收集的上清液上样，随后用纯水洗涤至流出液近无色；再用80％甲醇/水(v/v)洗脱至流出液近无色，收集该部分洗脱液，50℃下用旋转蒸发仪减压浓缩至恒重，得到粗品。
9.根据权利要求8所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述高效液相制备分离采用10～50mL含50％乙腈/0.1％乙酸的水溶液溶解粗品，0.45μm滤膜过滤，经高效液相制备分离；所述高效液相制备分离中的流动相为乙腈-0.1％乙酸水溶液，梯度洗脱50～90min，流速50～100mL/min，检测波长为210nm和254nm，高效液相色谱法(HPLC)检测并收集分离液，依次合并目标物，旋转蒸发浓缩至小体积，反复纯化，获得化合物纯品。
...【技术特征摘要】
1.一种新抗菌化合物，其特征在于：该化合物命名为(6e,8e)-13-acetoxy-3-hydroxy-8,10,12,14-tetramethylhexadeca-6,8-dienoic acid，具体结构式如下化合物(1)
2.根据权利要求1所述的新抗菌化合物或其药用盐在制备抗菌药物中的应用和药学上可接受的载体。
3.如权利要求1所述的新抗菌化合物，其特征在于：所述的新抗菌化合物或其药用盐作为葡萄座腔菌(botryosphaeria dothidea)、灰葡萄孢(botrytis cinerea)、辣椒刺盘孢(colletotrichum capsici)、尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)、香蕉炭疽盘长孢菌(gloeosporium musarum)、可可毛色二孢菌(lasiodiplodia theobromae)、稻黑孢霉(nigrospora oryzae)、立枯丝核菌(rhizoctonia solani)和核盘菌(sclerotiniasclerotiorum)病原真菌的抗真菌药物；所述的新抗菌化合物或其药用盐作为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)病原细菌的抗细菌药物。
4.如权利要求1或2所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：将病原菌尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)胁迫内生真菌(epicoccum latusicollum)同时接种于培养基发酵培养获得培养液，通过抽滤或高速离心将培养液分离成发酵液和菌丝体；弃去菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂富集，采用高效液相制备分离，获得新抗菌化合物。
5.根据权利要求4所述的新抗菌化合物的制备方法，其特征在于：所述培养基为马铃薯葡萄糖肉汤培养基(pdb)，...
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