【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及一种蛋白s试剂和蛋白s活性检测试剂盒。
技术介绍
1、蛋白s(protein s,ps)是20世纪70年代新发现的维生素k依赖的血浆糖蛋白，主要由肝脏，血管内皮，单核细胞和巨核细胞产生。ps作为抗凝血酶活化蛋白c(apc)的辅因子，参与活性促凝物质fva和fviiia的蛋白水解过程。蛋白c本身是无活性的酶原，当其被内皮细胞表面的凝血酶和血栓调节蛋白复合物激活后，成为活化蛋白c(apc)，这个过程使pc的活性增加20000倍。ps是apc发挥抗凝作用时的重要辅助因子，在ps存在时，apc与ps形成apc/ps复合体，其通过选择性地降解fva和fviiia，使二者失活，丧失其促凝作用。因此apc抗凝血系统仅在凝血酶原被活化形成凝血酶后才能发挥作用。这使得apc系统的抗凝活性与凝血系统的活性表现为成比例地调节。蛋白s在人血浆中有两种存在形式：一种是有活性的蛋白s，通常为游离型，占40％；另一种是无活性的结合型，约占其总量的60％。ps的本质是单链蛋白质，由676个氨基酸组成，含有g-羧基谷氨酸结构域、凝血酶敏感区、四个表位生长因子样结构域以及和性激素结合球蛋白同源的羧基末端区。在正常情况下，约60％的ps与补体系统的调节成分c4b结合蛋白相结合形成复合物，其余40％作为apc的辅因子发挥作用。ps具有依赖于apc的抗凝血活性，此外，ps还能够通过直接抑制凝血酶原酶和液化酶的活性而发挥独立于apc的抗凝血功能。综上所述ps作为抗凝血蛋白，其自身的缺陷使机体发生静脉血栓栓塞的几率明显增加。
2、遗传
3、蛋白s缺乏症的诊断完全依赖于蛋白s的检测。临床上常用的实验室方法为蛋白s活性检测和蛋白s抗原检测，后者又包括游离蛋白s抗原和总蛋白s抗原。目前，市场上以蛋白s活性检测试剂为主，采用的方法为凝固法，然而，这类试剂普遍价格较高去，且重复性和稳定性也不够理想。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种蛋白s试剂和蛋白s活性检测试剂盒。将该蛋白s试剂及试剂盒用于检测血浆中s蛋白的活性，具有准确度高、稳定性高，重复性好、线性范围较宽，且试剂价格低廉的优点。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、蛋白s试剂，包括磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白c、冻干保护剂和防腐剂；
4、所述磷脂为兔脑磷脂；
5、所述冻干保护剂选自聚乙二醇6000、甘氨酸、蔗糖中的至少一种。
6、一些实施方案中，所述蛋白s试剂，由水和如下浓度的组分组成：
7、兔脑磷脂0.04～0.08g/l、三(羟甲基)氨基甲烷3.029～6.057g/l、组织因子0.06～0.08g/l、活化蛋白c0.01～0.05g/l、聚乙二醇600010～20g/l、甘氨酸10～50g/l、蔗糖10～15g/l和防腐剂2～3g/l。
8、本专利技术所述的蛋白s试剂及试剂盒用于体外定量检测人血浆中蛋白s的活性。用于蛋白s缺乏症的辅助诊断。蛋白s水平降低从而导致静脉血栓风险增加,主要为下肢深静脉血栓形成及肺栓塞,部分报道提示其也会增加动脉栓塞如脑梗死及心肌梗死等风险。血栓性疾病,如dvt、dic、暴发性紫癜等；心脑血管疾病，如心梗塞,脑梗塞等；而许多常见疾病,如肝病、肾病、心脑血管疾病等,都会影响血液中ps的活性,因此测定血浆中ps对上述疾病的预防诊断、观察病情及判断预后都有重要价值。
9、检验原理：将稀释后的样本加入到含有组织因子、磷脂、氯化钙、活化的蛋白c和乏蛋白s血浆的混合试剂中，测得血浆凝固时间来确定蛋白s的活性。蛋白s(ps)作为抗凝血酶活化蛋白c的辅因子，参与活性促凝物质fva和fviiia的蛋白水解过程。ps是apc发挥抗凝作用时的重要辅助因子，在蛋白s存在时，apc与ps形成apc/ps复合体，其通过选择性地降解fva和fviiia，使二者失活，丧失其促凝作用。
10、一些实施方案中，所述蛋白s试剂中，冻干保护剂由聚乙二醇6000、甘氨酸和蔗糖组成。本专利技术使用该冻干保护剂制备蛋白s试剂，明显提高了试剂的稳定性，且试剂表面光滑。
11、本专利技术中，所述磷脂为兔脑磷脂，相比于植物磷脂(大豆磷脂)和合成磷脂，兔脑磷脂更接近人体内所需磷脂(动物磷脂)，与其他试剂组分合理搭配，最终使得检测更加准确。
12、本专利技术中，所述蛋白s试剂中，缓冲液为三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，相较于其它缓冲液，三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液具有更强的缓冲能力。
13、本专利技术中，所述蛋白s试剂中，所使用的组织因子为重组人组织因子，充分还原人体反应体系。
14、本专利技术所述蛋白s试剂中，对防腐剂的种类没有特殊限制，所述防腐剂包括但不限于苯甲酸钠。在本专利技术的具体实施例中，所述防腐剂为苯甲酸钠。
15、一些具体实施例中，本专利技术蛋白s试剂具体为：
16、兔脑磷脂0.08g/l、三(羟甲基)氨基甲烷6.057g/l、组织因子0.08g/l、活化蛋白c0.05g/l、聚乙二醇600020g/l、甘氨酸30g/l、蔗糖15g/l、苯甲酸钠3g/l，ph为8.0(即a13所示的蛋白s试剂)。
17、本专利技术还提供了用于血浆中蛋白s活性检测的试剂盒，包括本专利技术所述的蛋白s试剂、氯化钙试剂、蛋白s乏血浆试剂和稀释液。
18、一些实施方案中，所述蛋白s乏血浆试剂为包含苯甲酸钠和甘露醇的蛋白s活性小于1％的血浆，ph为7.5～8。进一步的，所述蛋白s乏血浆试剂为包含苯甲酸钠2～3g/l和甘露醇1～3.5g/l的蛋白s含量小于1％的血浆。一些具体实施例中，所述蛋白s乏血浆试剂选自如下之一：
19、蛋白s乏血浆试剂配方c1：苯甲酸钠3g/l和甘露醇1g/l，ph为8.0。
20、蛋白s乏血浆试剂配方c2：苯甲酸钠3g/l和甘露醇3.5g/l，ph为8.0。
21、一些实施方案中，所述稀释液包括水、氯化钠和苯甲酸钠，ph为7.5～8。进一步的，所述稀释液包括水、氯化钠5～9g/l和苯甲酸钠2～5g/l。具体的，所述苯甲酸钠的浓度具体可为2g/l、3g/l、4g/l、5g/l；一些具体实施例中，所述稀释液选自如下之一：
22、稀释液配方d1：氯化钠5g/l、苯甲酸钠3g/l，ph为8.0。
23、稀释液配方d2：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.蛋白S试剂，其特征在于，包括磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白C、冻干保护剂和防腐剂；
2.根据权利要求1所述的蛋白S试剂，其特征在于，由水和如下浓度的组分组成：
3.根据权利要求2所述的蛋白S试剂，其特征在于，所述组织因子为重组人组织因子；所述活化蛋白C为人源纯化的活化蛋白C；所述防腐剂为苯甲酸钠。
4.根据权利要求1～3任一项所述的蛋白S试剂，其特征在于，由水和如下组分组成：
5.根据权利要求1～4任一项所述的蛋白S试剂，其特征在于，其pH为7.0～8.5。
6.一种用于血浆中蛋白S活性检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的蛋白S试剂、氯化钙试剂、蛋白S乏血浆试剂和稀释液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，
9.权利要求1～5任一项所述的蛋白S试剂和权利要求6～8任一项所述的试剂盒在血浆中蛋白S活性检测中的应用。
10.一种检测血浆中S蛋白活性的方法，其特征在于，利用权利要求1～
...【技术特征摘要】
1.蛋白s试剂，其特征在于，包括磷脂、三(羟甲基)氨基甲烷、组织因子、活化蛋白c、冻干保护剂和防腐剂；
2.根据权利要求1所述的蛋白s试剂，其特征在于，由水和如下浓度的组分组成：
3.根据权利要求2所述的蛋白s试剂，其特征在于，所述组织因子为重组人组织因子；所述活化蛋白c为人源纯化的活化蛋白c；所述防腐剂为苯甲酸钠。
4.根据权利要求1～3任一项所述的蛋白s试剂，其特征在于，由水和如下组分组成：
5.根据权利要求1～4任一项所述的蛋白s试剂，其特征在于，其ph为7.0～8.5。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔莎莎，吴小云，丛海燕，赵玉燕，陆露，
申请(专利权)人：创凝生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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