【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学技术，具体说是一种斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记、检测方法、特异性引物和试剂盒。
技术介绍
1、斑石鲷隶属于鲈形目，石鲷科，石鲷属，主要分布于西太平洋温热带海域，雄鱼（2n=47）染色体较雌鱼（2n=48）少一条，并且雄鱼染色体中存在一条体型异常巨大的染色体，为典型的x1x1x2x2/x1x2y性别决定类型。近期研究发现斑石鲷异形染色体y与同源染色体x1x2之间存在显著的染色体结构变异。在养殖过程中发现斑石鲷鱼类表现出显著的雌雄生长二态性，其中雄鱼生长速度快于雌鱼。因此，研发斑石鲷雌雄遗传性别标记精准开发技术，创制高雄苗种和全雄苗种技术是斑石鲷苗种产业与育种发展的方向。此外，开展斑石鲷苗种遗传性别快速鉴定技术的研发，将有助于储备斑石鲷优良雄性种质。
2、跨膜蛋白88（transmembrane protein 88, tmeme88）是一种双跨膜的蛋白，最初发现于非洲爪蟾蜍胚胎细胞和人心肌细胞细胞膜上，在人类干细胞的蛋白质分化和胚胎发育中起关键作用。近期发现tmeme88蛋白能够明显抑制wnt/β-catenin信号通路的激活。经典研究发现wnt/β-catenin 通路可以调节干细胞的多能性，并且在动物发育过程中决定着细胞的分化命运。研究发现tmeme88蛋白通过c 端val-trp-val基序通过与wnt/β-catenin信号通路中主要蛋白disheveled (dvl) 结合，进而阻断dvl蛋白与lrp5/6 的相互作用影响干细胞基因的转录和表达。近期的研究表明，tmeme88基因位于
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供了一种斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记、检测方法、特异性引物和试剂盒。
2、为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：
3、一种斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记，以斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异作为斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记。
4、所述分子标记为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记的核苷酸序列为seq id no:1（chrx1tmeme88）和seq id no:2（chrytmeme88）所示碱基。
5、所述斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记seq id no:1所示碱基为斑石鲷雌、雄鱼x1染色体共有tmeme88基因非编码区未发生变异的同源片段，为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异个体共有dna特征标记；且，所述seq id no:1所示碱基序列第115位点和116位点之间、第175位点和173位点、第183位点和184位点插入序列片段，即为seq id no:2所示碱基序列，其为斑石鲷tmeme88非编码区变异基因特有的dna标记。
6、一种利用所述分子标记鉴定斑石鲷雌雄的方法，
7、1）pcr扩增：取待测斑石鲷，提取基因组dna；以所得基因组dna为模板，采用斑石鲷tmeme88基因特异性引物对，进行pcr扩增，并将所得pcr扩增产物与所述的斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异的特异性标记进行对比；
8、2） 结果判断：从待测斑石鲷的基因组dna中扩增出278bp（seq id no:1所示碱基）和1472bp（seq id no:2所示碱基）两个dna片段，即为判断该待测斑石鲷为tmeme88基因发生非编码区变异个体，即为斑石鲷雄性（x1x2y）个体；
9、3）待测斑石鲷的基因组dna中仅扩增出278bp（seq id no:1所示碱基）的单一dna片段，即为判断该待测斑石鲷为斑石鲷tmeme88基因未发生非编码区插入变异个体，即为斑石鲷雌性（x1x1x2x2）个体。
10、所述斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异的特异性引物对
11、chtmeme88_f:1 : 5’- gctgcctgcagaaacatgg-3’；
12、chtmeme88_r:2 : 5’- ggacgtgtccttaaagcttcg-3’。
13、一种检测权所述的斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记的遗传性别特异性引物，其特征在于：
14、chtmeme88_f:1 : 5’- gctgcctgcagaaacatgg-3’；
15、chtmeme88_r:2 : 5’- ggacgtgtccttaaagcttcg-3’。
16、一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，所述试剂盒含所述的遗传性别特异性引物。
17、本专利技术所具有的优点：
18、本专利技术通过斑石鲷雄鱼融合染色体y上的tmeme88基因与位于雌鱼同源染色体x上的tmeme88基因相比较发生了大片段的非编码区dna序列插入，进而高效、快速精准鉴定斑石鲷tmeme88基因是否发生非编码区变异，对于揭示斑石鲷雌雄性腺细胞发育及分化调控模式及性腺发育差异，实现雌、雄遗传性别的快速鉴定，提升斑石鲷遗传育种进程和优质苗种规模化生产具有重要的意义和应用价值；
19、本专利技术从斑石鲷全基因组序列中筛选并获得了斑石鲷x和y染色体tmeme88基因同源区段且有大片段dna插入标记序列，进一步建立了斑石鲷tmeme88基因非编码区变异快速检测方法，采用该方法可以快速、准确和高效的鉴定待检测斑石鲷tmeme88基因是否发生非编码区dna序列插入变异。该方法利用一对引物在tmeme88基因非编码区变异个体中扩增出1472bp和278bp两个相差1194bp的条带，在tmeme88基因非编码区非变异个体中仅扩增出278bp的单一条带，并可以通过琼脂糖凝胶电泳分辨，缩短了斑石鲷tmeme88基因非编码区变异准确鉴定的时间，提升了检测效率。在斑石鲷基于tmeme88基因雌、雄性腺细胞发育及分化研究及雌雄性别鉴定、高雄苗种制备和家系选育上具有重要的意义和应用价值。
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1.一种斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记，其特征在于：以斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异作为斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于：所述分子标记为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1（ChrX1tmeme88）和SEQ IDNO:2（ChrY tmeme88）所示碱基。
3.根据权利要求2所述的分子标记，其特征在于：所述斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记SEQ ID NO:1所示碱基为斑石鲷雌、雄鱼X1染色体共有tmeme88基因非编码区未发生变异的同源片段，为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异个体共有DNA特征标记；且，所述SEQ ID NO:1所示碱基序列第115位点和116位点之间、第175位点和173位点、第183位点和184位点插入序列片段，即为SEQ ID NO:2所示碱基序列，其为斑石鲷tmeme88非编码区变异基因特有的DNA标记。
4.一种利用权利要求1所述分子标记鉴定斑石鲷雌雄的方法，其特征在
5.根据权利要求4所述的所述分子标记鉴定斑石鲷雌雄的方法，其特征在于，所述斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异的特异性引物对
6.一种检测权利要求1所述的斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记的遗传性别特异性引物，其特征在于：
7.一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含权利要求6所述的遗传性别特异性引物。
...【技术特征摘要】
1.一种斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记，其特征在于：以斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异作为斑石鲷雌雄遗传性别鉴定分子标记。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于：所述分子标记为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记的核苷酸序列为seq id no:1（chrx1tmeme88）和seq idno:2（chry tmeme88）所示碱基。
3.根据权利要求2所述的分子标记，其特征在于：所述斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异特异性标记seq id no:1所示碱基为斑石鲷雌、雄鱼x1染色体共有tmeme88基因非编码区未发生变异的同源片段，为斑石鲷tmeme88基因非编码区变异与非变异个体共有dna特征标记；...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖永双，吴燕铎，李军，肖志忠，刘静，马玉婷，赵海霞，徐平蕊，张高植，杨子妍，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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