【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物和水果保鲜，特别涉及一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种、枯草芽孢杆菌沙漠亚种发酵液、枯草芽孢杆菌沙漠亚种发酵液酶解产物及其制备方法和在鲜切水果保鲜中的应用。
技术介绍
1、鲜切水果食用方便快捷，可在短时间内满足消费者的营养需求。随着生活节奏的加快，鲜切水果在国内逐渐受到广泛关注，尤其是年轻消费者的青睐。鲜切水果通常在冷藏货架上售卖，其放置过程中表面的氧化、低温冻伤会降低鲜切水果的美观度、新鲜度，整体品质不如整果。
2、目前常用的鲜切水果保鲜剂多为化学试剂，如亚硫酸盐、柠檬酸、抗坏血酸等，常用的低温保鲜剂有多聚磷酸盐类、糖类、醇类及其复配物等。采用化学添加剂处理鲜切水果，不仅会影响鲜切水果的味道，其残留物还可能影响人体健康；亚硫酸盐、多聚磷酸盐的摄入会加重高血压及慢性肾病患者症状，糖醇类造成产品过甜和能量值过高，并且高浓度的糖醇类及多聚磷酸盐类抗冻剂会破坏食品原本的组织结构，造成营养成分流失，同样造成冷藏食品的品质下降。因此，更为健康的鲜切水果保鲜剂的开发势在必行。
3、植物源多肽因其天然、健康、原料易得的特点受到国内外研究者普遍关注。多肽的功能也越来越清晰，大豆肽具有抗菌、抗高血压、中和脂多糖、促血管生成等生理活性；豌豆肽具有抗菌、抗氧化、抗疲劳、增强肌肉质量和力量等生理活性。动物源多肽可作为食品补充剂、功能性食品成分，鱼皮肽具有较强的dpph清除活性、dpp-iv抑制活性、ace抑制活性和抗氧化活性等生物活性，可作为功能性食品生物活性肽、抗冻剂和抗氧化剂，同时在人体的体重和高血糖管理中的有一定
4、因此，如若将枯草芽孢杆菌沙漠亚种、枯草芽孢杆菌沙漠亚种发酵液(主要成分为胞外蛋白酶)、以及发酵液酶解产物(植物源/动物源多肽)开发为鲜切水果保鲜剂，则在鲜切水果加工行业具有广泛的应用前景，并且相比于传统的化学添加剂，发酵液酶解产物(植物源/动物源多肽)还能提高鲜切水果的营养价值、经济价值等，值得推广应用。
技术实现思路
1、本专利技术旨在解决上述问题，我们从胶州湾沿海滩涂筛选出一株高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8，通过基因组测序和蛋白质组分析，发现其发酵液中的胞外蛋白酶为丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。通过菌株的发酵条件优化提高蛋白酶的产量，进一步通过蛋白酶的酶解条件优化提高了对动植物蛋白的酶解效率，建立了大豆、豌豆、鱼皮、猪皮酶解产物的制备工艺，并探索了制备的酶解产物在鲜切水果保鲜中的应用。
2、本专利技术具体提供了一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8、枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液、枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物及其制备方法和在鲜切水果保鲜中的应用。
3、第一方面，本专利技术提供了从胶州湾沿海滩涂筛选出一株高产蛋白酶的菌株，经鉴定为枯草芽孢杆菌沙漠亚种，命名为枯草芽孢杆菌沙漠亚种bacillus inaquosorum e1-8，其保藏号为cctcc no:m 20232071，下文简称e1-8。该菌于2023年10月30日，被保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m 20232071，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，请求保藏单位为：青岛农业大学。
4、第二方面，本专利技术提供了一种用于如上述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8的发酵方法，发酵培养基包括以下成分：碳源0.5％～5％，氮源0.5％～5％；ph为6～8；发酵温度为28℃～37℃；180r/min振荡培养。
5、进一步的，所述发酵培养基的碳源为甘薯、米糠、绿豆、麸皮、酵母粉、黄原胶、蔗糖、山梨糖醇中的任意一种；氮源为豆粕、花生饼粉、鱼粉、酪素、明胶、大豆蛋白、豌豆蛋白、蛋白胨、脱脂乳中的任意一种。最佳优选的，所述发酵培养基包括以下组分：3.5％甘薯为碳源、0.5％豆粕为氮源，发酵温度为37℃，ph为7.0；180r/min振荡培养。相比于初始培养基，优化后的培养基成本降低。上述最适发酵培养基在最适发酵培养条件下的蛋白酶活性最高可达321.48u/ml。
6、第三方面，本专利技术还提供了一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液，由第一方面所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8和第二方面所述的发酵方法制备所得。
7、进一步的，所述发酵液主要包含丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶两种胞外蛋白酶。
8、第四方面，本专利技术还提供了一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物，由第三方面所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解植物源和/或动物源的蛋白底物所得。
9、进一步的，枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物的制备方法包括如下步骤：
10、s1：准备植物源和/或动物源蛋白底物，切碎和预处理；
11、s2：加入如权利要求4所述枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液进行水解，设置水解参数；
12、s3：热失活90℃，15min；
13、s4：离心12000rpm，30min，得到离心上清液；
14、s5：真空冷冻干燥，得到枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物。
15、所述枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物优选为蛋白肽冻干粉。
16、进一步优化参数，所述步骤s3中水解参数，植物源的水解参数为：ph11.0～12.0，60℃，50～60min，发酵液800u/g；动物源的水解参数为：ph9.0～11.0，50℃～60℃，50min，发酵液600～1000u/g。
17、优选最佳参数：所述步骤s3中水解参数：
18、植物源大豆蛋白：ph 12.0，60℃，60min，800u/g(发酵液/大豆蛋白)；植物源豌豆蛋白：ph 11.0，60℃，50min，800u/g(发酵液/豌豆蛋白)。动物源鱼皮：ph 9.0，50℃，50min，1000u/g(发酵液/鱼皮)；动物源猪皮：ph 11.0，60℃，50min，600u/g(发酵液/猪皮)。
19、第五方面，如第四方面所述的一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液酶解产物在鲜切水果保鲜中的应用。
20、进一步的，所述鲜切水果保鲜应用包括防止鲜切水果褐变。
21、进一步优选的，所述鲜切水果包括苹果和香蕉。
22、本专利技术具有如下有益效果：
23、1、本专利技术首次分离鉴定出高产胞外蛋白酶的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株e8-1，并优化枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株e8-1的发酵方法及参数；在上述最适发酵条件下蛋白酶活最高可达321.48u/ml；
24、2、本专利技术的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株e8-1发酵生成的胞外蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8，其特征在于，其分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus inaquosorum E1-8，保藏编号为CCTCC NO:M 20232071。
2.一种用于如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8的发酵方法，其特征在于，发酵培养基包括以下成分：碳源0.5％～5％，氮源0.5％～5％；pH为6～8；发酵温度为28℃～37℃；180r/min振荡培养。
3.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的碳源为甘薯、米糠、绿豆、麸皮、酵母粉、黄原胶、蔗糖、山梨糖醇中的任意一种；氮源为豆粕、花生饼粉、鱼粉、酪素、明胶、大豆蛋白、豌豆蛋白、蛋白胨、脱脂乳中的任意一种。
4.一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8发酵液，其特征在于，由权利要求1所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8和权利要求2所述的发酵方法制备所得。
5.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，所述发酵液主要包含丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶两种胞外蛋白酶。
6.一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8发酵液酶解产物，其特征在于，由权利要
7.根据权利要求6所述的发酵液酶解产物，其特征在于，枯草芽孢杆菌沙漠亚种E1-8发酵液酶解产物的制备方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的一种发酵液酶解产物，其特征在于，所述步骤S3中水解参数，植物源的水解参数为：pH 11.0～12.0，60℃，50～60min，发酵液800U/g；动物源的水解参数为：pH 9.0～11.0，50℃～60℃，50min，发酵液600～1000U/g。
9.如权利要求6-8任一项所述的发酵液酶解产物在鲜切水果保鲜中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述鲜切水果保鲜应用包括防止鲜切水果褐变。
...【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8，其特征在于，其分类命名为枯草芽孢杆菌bacillus inaquosorum e1-8，保藏编号为cctcc no:m 20232071。
2.一种用于如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8的发酵方法，其特征在于，发酵培养基包括以下成分：碳源0.5％～5％，氮源0.5％～5％；ph为6～8；发酵温度为28℃～37℃；180r/min振荡培养。
3.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的碳源为甘薯、米糠、绿豆、麸皮、酵母粉、黄原胶、蔗糖、山梨糖醇中的任意一种；氮源为豆粕、花生饼粉、鱼粉、酪素、明胶、大豆蛋白、豌豆蛋白、蛋白胨、脱脂乳中的任意一种。
4.一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8发酵液，其特征在于，由权利要求1所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种e1-8和权利要求2所述的发酵方法制备所得。
5.根据权利要求4所...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨洁，刘志芸，林华伟，刘广超，孙庆杰，李杨，朱晓龙，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：
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