利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝乳酶的方法，它涉及一种微生物发酵生产凝乳酶的方法。本发明专利技术解决了目前微生物发酵生产凝乳酶的成本高，乳酸链球菌素的发酵废液直接排放污染环境的问题。本方法：一、培养基的配制；二、米黑根毛霉种子液的制备；三、将米黑根毛霉种子液接种到三角瓶中；四、于３７～３８℃条件下培养９６ｈ，即得到凝乳酶。本发明专利技术做到了废物利用，减少了乳酸链球菌素发酵废液直接排放对环境造成的污染，降低了发酵生产凝乳酶的成本。应用于微生物发酵领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物发酵生产凝乳酶的方法。
技术介绍
凝乳酶属于酸性蛋白酶，又称天冬氨酸蛋白酶，是生产干酪不可缺少的制剂。凝乳 酶的传统来源是哺乳期期小牛的皱胃，动物凝乳酶及其凝乳活力与蛋白水解能力的高比值 成为制作奶酪的首选酶，但是动物生长缓慢且价格昂贵，容易增加企业成本，并且从动物中 提取酶液程序和工艺较复杂。木瓜、无花果、菠萝、难关、合欢树、银杏等植物中都含有能使 乳凝固的蛋白酶，但植物来源的凝乳酶因有太高的蛋白水解活力或本身有毒，因此很多植 物性凝乳酶没有得到大规模商业化应用。微生物凝乳酶来源广泛，目前发现有40余种微生物可发酵生产凝乳酶，这些微生 物主要是放线菌、细菌和真菌等，由于微生物发酵的方法控制容易，成本低，且安全无毒，而 被广泛使用。目前微生物发酵生产凝乳酶的氮源主要来自大豆组织蛋白和玉米粉，生产成 本较高。乳酸链球菌素的发酵废液中含有丰富的氮源。将乳酸链球菌素的发酵废液直接排 放会对环境造成污染，排入污水处理池也会增加处理的难度。
技术实现思路
本专利技术是为了解决目前微生物发酵生产凝乳酶的成本高，乳酸链球菌素的发酵废 液直接排放污染环境的问题，提供一种利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝 乳酶的方法。本专利技术，按以下 步骤进行一、培养基的配制将NaH2PCV Na2HPO4、葡萄糖、高温淀粉酶、吐温80、玉米粉、 玉米淀粉、乳酸链球菌素发酵废液和大豆组织蛋白溶解于水中配制培养基，其中NaH2PO4 3. 25g/L，Na2HPO4 3. llg/L，葡萄糖2. 14g/L，高温淀粉酶:20g/L,吐温 80 0. 13g/L，玉米 粉30 80g/L，玉米淀粉0 30g/L，乳酸链球菌素发酵废液150 700g/L，大豆组织蛋 白0 20g/L ；用质量浓度为5% 6%的氢氧化钠调pH至6. 7 6. 8，在0. 14MPa压力下 灭菌30min ；二、米黑根毛霉种子液的制备将米黑根毛霉按体积比4%的接种量接种到种 子培养基中，于37 38°C条件下摇床培养20 24h，摇床的转速为260rpm ；三、接种将步 骤一中配制好的培养基装入250ml的三角瓶中，将米黑根毛霉种子液按体积比2. 5%的接 种量接种到三角瓶中；四、培养将三角瓶于37 38°C条件下放在摇床上培养，摇床的转速 为260 280rpm，培养96小时，即得到凝乳酶；步骤一中玉米粉的含氮量为1.075% (质 量)，乳酸链球菌素发酵废液的含氮量为0. 24% (质量)，大豆组织蛋白的含氮量为8% (质 量)；步骤二中制得的米黑根毛霉种子液的霉菌数为2 6X IO6CfVml ；步骤三中培养基的 装入量为三角瓶体积的20%。本专利技术利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源来生产凝乳酶，做到了废物利用， 减少了乳酸链球菌素发酵废液直接排放对环境造成的污染，降低了发酵生产凝乳酶的成 本。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的 任意组合。具体实施方式一本实施方式利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产 凝乳酶的方法，按以下步骤进行一、培养基的配制将NaH2P04、Na2HPCV葡萄糖、高温淀粉 酶、吐温80、玉米粉、玉米淀粉、乳酸链球菌素发酵废液和大豆组织蛋白溶解于水中配制培 养基，其中 NaH2PO4 3. 25g/L，Na2HPO4 3. llg/L，葡萄糖2. 14g/L，高温淀粉酶:20g/L，吐温 80 0. 13g/L，玉米粉30 80g/L，玉米淀粉0 30g/L，乳酸链球菌素发酵废液150 700g/L，大豆组织蛋白0 20g/L ；用质量浓度为5 % 6 %的氢氧化钠调pH至6. 7 6. 8，在0. 14MPa压力下灭菌30min ；二、米黑根毛霉种子液的制备将米黑根毛霉按体积比 4%的接种量接种到种子培养基中，于37 38°C条件下摇床培养20 24h，摇床的转速为 260rpm;三、接种将步骤一中配制好的培养基装入250ml的三角瓶中，将米黑根毛霉种子 液按体积比2. 5%的接种量接种到三角瓶中；四、培养将三角瓶于37 38°C条件下放在 摇床上培养，摇床的转速为260 280rpm，培养96小时，即得到凝乳酶；步骤一中玉米粉的 含氮量为1.075% (质量)，乳酸链球菌素发酵废液的含氮量为0.24% (质量)，大豆组织蛋 白的含氮量为8% (质量)；步骤二中制得的米黑根毛霉种子液的霉菌数为2 6X IO6Cfu/ ml ；步骤三中培养基的装入量为三角瓶体积的20%。本实施方式步骤二中的种子培养基由NaH2P04、Na2HPO4、葡萄糖、高温淀粉酶、吐 温80、玉米粉、大豆组织蛋白和水组成；其中NaH2PO4 3. 25g/L，Na2HPO4 3. llg/L，葡萄糖 2. 14g/L，高温淀粉酶:20g/L,吐温80 0. 13g/L，玉米粉:70g/L，大豆组织蛋白:18g/L ；用 质量浓度为5% 6%的氢氧化钠调pH至6. 7 6. 8，在0. 14MPa压力下灭菌30min。本实施方式步骤二中的米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)保藏于中国普通微生物 菌种保藏管理中心，菌种保藏编号为AS 3.4960。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中加入的玉米 粉浓度为35 70g/L。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中加入的 玉米粉浓度为50 60g/L。其它与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤一中加 入的玉米淀粉浓度为5 25g/L。其它与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤一中加 入的玉米淀粉浓度为10 20g/L。其它与具体实施方式一至四之一相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤一中加 入的玉米淀粉浓度为26. 25g/L。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤一中加 入的乳酸链球菌素发酵废液浓度为200 600g/L。其它与具体实施方式一至六之一相同。具体实施方式八本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是步骤一中加 入的乳酸链球菌素发酵废液浓度为300 500g/L。其它与具体实施方式一至七之一相同。具体实施方式九本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是步骤一中加 入的乳酸链球菌素发酵废液浓度为160g/L。其它与具体实施方式一至八之一相同。具体实施方式十本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是步骤一中加 入的乳酸链球菌素发酵废液浓度为480g/L。其它与具体实施方式一至九之一相同。具体实施方式十一本实施方式与具体实施方式一至十之一不同的是步骤一中 加入的大豆组织蛋白浓度为5 15g/L。其它与具体实施方式一至十之一相同。具体实施方式十二 本实施方式与具体实施方式一至十一之一不同的是步骤一 中加入的大豆组织蛋白浓度为10g/L。其它与具体实施方式一至十一之一相同。具体实施方式十三本实施方式与具体实施方式一至十二之一不同的是步骤一 中加入的大豆组织蛋白浓度为本文档来自技高网...
【技术保护点】
利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝乳酶的方法，按以下步骤进行：一、培养基的配制：将ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、葡萄糖、高温淀粉酶、吐温８０、玉米粉、玉米淀粉、乳酸链球菌素发酵废液和大豆组织蛋白溶解于水中配制培养基，其中ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］：３．２５ｇ／Ｌ，Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］：３．１１ｇ／Ｌ，葡萄糖：２．１４ｇ／Ｌ，高温淀粉酶：２０ｇ／Ｌ，吐温８０：０．１３ｇ／Ｌ，玉米粉：３０～８０ｇ／Ｌ，玉米淀粉：０～３０ｇ／Ｌ，乳酸链球菌素发酵废液：１５０～７００ｇ／Ｌ，大豆组织蛋白：０～２０ｇ／Ｌ；用质量浓度为５％～６％的氢氧化钠调ｐＨ至６．７～６．８，在０．１４ＭＰａ压力下灭菌３０ｍｉｎ；二、米黑根毛霉种子液的制备：将米黑根毛霉按体积比４％的接种量接种到种子培养基中，于３７～３８℃条件下摇床培养２０～２４ｈ，摇床的转速为２６０ｒｐｍ；三、接种：将步骤一中配制好的培养基装入２５０ｍｌ的三角瓶中，将米黑根毛霉种子液按体积比２．５％的接种量接种到三角瓶中；四、培养：将三角瓶于３７～３８℃条件下放在摇床上培养，摇床的转速为２６０～２８０ｒｐｍ，培养９６小时，即得到凝乳酶；步骤一中玉米粉的含氮量为１．０７５％（质量），乳酸链球菌素发酵废液的含氮量为０．２４％（质量），大豆组织蛋白的含氮量为８％（质量）；步骤二中制得的米黑根毛霉种子液的霉菌数为２～６×１０↑［６］ｃｆｕ／ｍｌ；步骤三中培养基的装入量为三角瓶体积的２０％。...
【技术特征摘要】
利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于利用乳酸链球菌素发酵废液作部分氮源发酵生产凝乳酶的方法，按以下步骤进行一、培养基的配制将NaH2PO4、Na2HPO4、葡萄糖、高温淀粉酶、吐温80、玉米粉、玉米淀粉、乳酸链球菌素发酵废液和大豆组织蛋白溶解于水中配制培养基，其中NaH2PO43.25g/L，Na2HPO43.11g/L，葡萄糖2.14g/L，高温淀粉酶20g/L，吐温800.13g/L，玉米粉30～80g/L，玉米淀粉0～30g/L，乳酸链球菌素发酵废液150～700g/L，大豆组织蛋白0～20g/L；用质量浓度为5％～6％的氢氧化钠调pH至6.7～6.8，在0.14MPa压力下灭菌30min；二、米黑根毛霉种子液的制备将米黑根毛霉按体积比4％的接种量接种到种子培养基中，于37～38℃条件下摇床培养20～24h，摇床的转速为260rpm；三、接种将步骤一中配制好的培养基装入250ml的三角瓶中，将米黑根毛霉种子液按体积比2.5％的接种量接种到三角瓶中；四、培养将三角瓶于37～38℃条件下放在摇床上培养，摇床的转速为260～280rpm，培养96小时，即得到凝乳酶；步骤一中玉米粉的含氮量为1.075％(质量)，乳酸链球菌素发酵废液的含氮量为0.24％(质量)，大豆组织蛋白的含氮量为8％(质量)；步骤二中制得的米黑根毛霉种子液的霉菌数为2～6×106cfu/ml；步骤三中培养基的装入量为三角瓶体积的20％。2.根据权利要求1所述的利用乳酸链球菌素...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭坤，王贵元，马之霄，马莉，张钦革，黄亦存，
申请(专利权)人：安泰生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：23[中国|黑龙江]
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