【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养，具体涉及一种毛囊干细胞无血清培养基和培养方法。
技术介绍
1、由于现代生活节奏快、压力大等原因，越来越多的人受到病理性脱发困扰。研究认为，很多因素如衰老、遗传(如雄激素性脱发)、激素紊乱(如甲状腺疾病)、自身免疫(如系统性红斑狼疮)、营养障碍和药物等长期影响毛发生长周期和降低毛囊内细胞的活性，导致毛囊受损或产生缺陷，是引起脱发的直接原因。其中雄激素性脱发是占比最大的脱发类型，且越来越低龄化的，从而催生出一个高增长且潜力无限的防脱市场。
2、目前治疗雄脱的药物有限，市场上只有非那雄胺和米诺地尔两种治疗药物获得美国fda批准。口服药非那雄胺带来的性欲下降、性功能障碍、情绪障碍和可能的出生缺陷等副作用是患者谨慎选择使用的主要原因。而外用药米诺地尔的缺点则是只对部分患者有效，且起效周期长，至少持续用药两个月以上才能开始看到是否有效，需要试用6到12个月才能知道是否适合自己。如果有效则需要继续使用来保持结果，当患者停止时，脱发会再次出现。
3、当前比较流行的脱发治疗手段是毛囊移植技术，即将患者本人非脱发区域的毛囊单位移植体移植到脱发区域。尽管毛发移植术已经比较成熟，但存在成活率不高等劣势，最大的局限就是供区不足。对于大面积脱发，尤其是6级以上脱发的患者不适合进行该手术。
4、近年来随着再生医学和毛发组织工程领域的快速发展，干细胞治疗脱发成为目前最具前景的治疗方法。现阶段干细胞治疗脱发可以分为三类：干细胞移植、干细胞条件培养基和干细胞外泌体的使用。现有研究表明，在动物模型上移植各种
5、毛囊是一种复杂的微小器官，毛囊的形成和发生是毛囊上皮成分与真皮成分间相互作用的结果，毛囊的生长再生受到自身的干细胞调控。存在于毛囊当中的干细胞主要有：毛囊干细胞(hair follicle stem cells，hfscs)，毛乳头细胞(dermal papilla cells，dpcs)和黑色素干细胞(melanocyte stemcells，mcscs)三种细胞，其中毛乳头细胞和毛囊干细胞在毛囊形态发生及毛发周期中起重要作用。毛囊干细胞是定植于毛囊外根鞘隆突区(bulge区)的一群成体干细胞，属于上皮成分，具有慢周期性、自我更新、未分化和体外增殖能力强等特点。hfscs不仅表达mscs的表面标记物，而且还展示出向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、造血细胞、平滑肌细胞和神经元细胞等细胞分化的能力，加上其本身具有易于获取自体干细胞来源的特性，使得hfscs在干细胞为基础的再生医学中具有巨大的潜力。
6、现有的hfscs体外培养大都使用胎牛血清(fetal bovine serum,fbs)或人血小板裂解液(human platelet lysate hpl)。fbs成分复杂且含有异种蛋白质，容易携带病毒或被支原体感染等。hpl作为血清替代物最有效的成分，营养丰富，含大量多种细胞增殖所需的生长因子与蛋白，但使用过程中仍不能避免人源蛋白的引入，所培养的细胞或收集的条件培养基在临床或医美领域应用时存在异体免疫排斥反应的可能。因此，无人源或动物源、无血清及其衍生物添加的无血清培养体系，能够完全避免上述现有hfscs培养体系的缺点。
7、hfscs属于成体干细胞，其体外扩增能力有限，使用无血清培养基体外培养hfscs，连续传代后细胞空泡化现象十分明显，胞质空泡随着传代次数越来越多，细胞迅速老化，扩增能力显著下降；随着空泡越来越大，最终细胞破裂死亡。因此，抑制hfscs在无血清培养体系中连续传代所出现的空泡化，是提高hfscs活力，减缓衰老，提高扩增效率的关键所在。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种毛囊干细胞无血清培养基和培养方法。本专利技术提供的毛囊干细胞无血清培养基能够减缓毛囊干细胞在连续传代过程中的衰老和/或维持所述毛囊干细胞增殖活力与传代能力，有效提高毛囊干细胞体外扩增和/或传代能力，防止所述毛囊干细胞传代培养空泡化。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术的第一个目的是提供一种毛囊干细胞无血清培养基，所述毛囊干细胞无血清培养基包括：体积比为0.1-2％的mem非必需氨基酸溶液、体积比为0.1-2％的mem维生素溶液、体积比为0.1-2％的l-谷氨酰胺溶液、1～8mg/l l-谷胱甘肽、0.1～1μg/l亚硒酸钠、0.5～5g/l重组人血白蛋白、1～20mg/l重组人胰岛素、1～10mg/l重组人转铁蛋白、10～50μg/l重组人表皮生长因子、10～50μg/l重组人碱性成纤维细胞生长因子、1～20μg/l重组人血小板衍生生长因子-ab、1～50μg/l重组人上皮调节蛋白、12.5～500mg/l重组人过氧化氢酶、5～200mg/l l-抗坏血酸、5～200ug/l(+)-α-生育酚乙酸酯、0.05～5mg/l茴香霉素、0.1～10mg/l皮质脂酮、25～500mg/l左旋肉碱、0.05～5mg/l d-半乳糖、0.1～10mg/l乙醇胺、25～500ug/l亚油酸、25～500ug/l亚麻酸、0.05～5μg/l孕酮、50～500mg/l腐胺以及余量基础培养基；
4、所述mem非必需氨基酸溶液、mem维生素溶液和l-谷氨酰胺溶液的终浓度均为100×。
5、优选的，所述毛囊干细胞无血清培养基包含体积比为1％的mem非必需氨基酸溶液、体积比为1％的mem维生素溶液、体积比为1％的l-谷氨酰胺溶液、4mg/l l-谷胱甘肽、0.5μg/l亚硒酸钠、2g/l重组人血白蛋白、10mg/l重组人胰岛素、5mg/l重组人转铁蛋白、20μg/l重组人表皮生长因子、20μg/l重组人碱性成纤维细胞生长因子、10μg/l重组人血小板衍生生长因子-ab、10μg/l重组人上皮调节蛋白、125mg/l重组人过氧化氢酶、50mg/l l-抗坏血酸、50ug/l(+)-α-生育酚乙酸酯、0.5mg/l茴香霉素、1mg/l皮质脂酮、100mg/l左旋肉碱、0.5mg/ld-半乳糖、2mg/l乙醇胺、100ug/l亚油酸、100ug/l亚麻酸、0.5μg/l孕酮、200mg/l腐胺以及余量基础培养基。
6、优本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种毛囊干细胞无血清培养基，其特征在于，所述毛囊干细胞无血清培养基包括：体积比为0.1-2％的MEM非必需氨基酸溶液、体积比为0.1-2％的MEM维生素溶液、体积比为0.1-2％的L-谷氨酰胺溶液、1～8mg/L L-谷胱甘肽、0.1～1μg/L亚硒酸钠、0.5～5g/L重组人血白蛋白、1～20mg/L重组人胰岛素、1～10mg/L重组人转铁蛋白、10～50μg/L重组人表皮生长因子、10～50μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1～20μg/L重组人血小板衍生生长因子-AB、1～50μg/L重组人上皮调节蛋白、12.5～500mg/L重组人过氧化氢酶、5～200mg/LL-抗坏血酸、5～200ug/L(+)-α-生育酚乙酸酯、0.05～5mg/L茴香霉素、0.1～10mg/L皮质脂酮、25～500mg/L左旋肉碱、0.05～5mg/L D-半乳糖、0.1～10mg/L乙醇胺、25～500ug/L亚油酸、25～500ug/L亚麻酸、0.05～5μg/L孕酮、50～500mg/L腐胺以及余量基础培养基；
2.根据权利要求1所述的毛囊干细胞无血清培养基，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的毛囊干细胞无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为无血清培养基；所述无血清培养基为IMDM或高糖DMEM基础培养基。
4.一种如权利要求1或2所述的毛囊干细胞无血清培养基在干细胞培养中的应用；其特征在于，所述干细胞为毛囊干细胞。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述毛囊干细胞无血清培养基减缓毛囊干细胞在连续传代过程中的衰老和/或维持所述毛囊干细胞增殖活力与传代能力。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述毛囊干细胞无血清培养基防止所述毛囊干细胞传代培养空泡化。
7.一种如权利要求1或2所述毛囊干细胞无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：按权利要求1所述毛囊干细胞无血清培养基各组分溶解特性溶解，混合均匀配制成1000×溶液，滤膜过滤除菌，-20～-80℃以下保存备用。
8.一种毛囊干细胞培养方法，其特征在于，所述培养方法包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种毛囊干细胞无血清培养基，其特征在于，所述毛囊干细胞无血清培养基包括：体积比为0.1-2％的mem非必需氨基酸溶液、体积比为0.1-2％的mem维生素溶液、体积比为0.1-2％的l-谷氨酰胺溶液、1～8mg/l l-谷胱甘肽、0.1～1μg/l亚硒酸钠、0.5～5g/l重组人血白蛋白、1～20mg/l重组人胰岛素、1～10mg/l重组人转铁蛋白、10～50μg/l重组人表皮生长因子、10～50μg/l重组人碱性成纤维细胞生长因子、1～20μg/l重组人血小板衍生生长因子-ab、1～50μg/l重组人上皮调节蛋白、12.5～500mg/l重组人过氧化氢酶、5～200mg/ll-抗坏血酸、5～200ug/l(+)-α-生育酚乙酸酯、0.05～5mg/l茴香霉素、0.1～10mg/l皮质脂酮、25～500mg/l左旋肉碱、0.05～5mg/l d-半乳糖、0.1～10mg/l乙醇胺、25～500ug/l亚油酸、25～500ug/l亚麻酸、0.05～5μg/l孕酮、50～500mg/l腐胺以及余量基础培养基；
2.根据权利要求1所述的毛囊干细胞无血清培养基，其特征在于，所述毛囊干细胞无血清培养基包含体积比为1％的mem非必需氨基酸溶液、体积比为1％的mem维生素溶液、体积比为1％的l-谷氨酰胺溶液、4mg/l l-谷胱甘肽、0.5μg/l亚硒酸钠、2g/l重组人血白蛋白、10mg/l重组人胰岛素、5mg/l重组人转铁蛋白、20μg/l重组人表皮生长因子、20μg/l重组人...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，姜交华，戚康艺，李学家，陈东煌，陈启意，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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