【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于carfilzomib检测，具体涉及一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法、试剂盒及应用。
技术介绍
1、carfilzomib(卡非佐米)是一种环氧酮蛋白酶体抑制剂，可选择性，不可逆性的与结构性蛋白酶体及免疫蛋白酶体结合，避免了因抑制非恶性细胞中组成型蛋白酶体而产生的毒副作用，用于临床治疗多发性骨髓瘤并可减少毒副作用。carfilzomib主要通过肽酶和环氧化物水解酶代谢。carfilzomib个体差异大，且其auc和cmax随carfilzomib用量增加而不成比例增大。因此，研究carfilzomib临床药代动力学，进而根据监测浓度调整临床carfilzomib剂量，对提高临床carfilzomib治疗有效率，减少副作用具有重要意义。
2、然而目前，虽然存在一些carfilzomib的检测方法，比如液相色谱法，但是其所针对的是合成过程中carfilzomib的检测，其检测限较高，耗时长，当将其应用于药代动力学中极低含量的carfilzomib检测时，一方面准确度较差，血浆中的常规药物成分会干扰检测结果，另一方面由于检测时间耗时长，而容易导致而导致carfilzomib与其他物质发生反应，影响carfilzomib的准确测定，因此，常规应用于carfilzomib合成过程中的检测方法并不适用于药代动力学研究中血浆carfilzomib的检测，因此，建立一种特异、灵敏、准确的检测血浆carfilzomib的hplc-ms/ms方法就显得尤为重要。
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中的的缺陷，提供了一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法、试剂盒及应用，其前处理简单，样品用量小，分析时间短，方法的灵敏度、特异性高。
2、为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案如下：
3、一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，采用hplc-ms/ms法，以amiodarone为内标，对血浆中carfilzomib的含量进行检测；内标液为：1000ng/ml的amiodarone甲醇标准溶液；
4、hplc-ms/ms检测的液相色谱条件为：色谱柱为ultimate xb-c18，规格4.6mm×50mm，粒径5μm；流动相：流动相a为0.1％体积浓度的甲酸甲醇溶液，流动相b为2mmol/l乙酸铵-0.1％体积浓度的甲酸水溶液；采用梯度洗脱，具体梯度洗脱条件如下表：
5、 时间 流动相a 流动相b 0.01min 50％ 50％ 0.5min 50％ 50％ 0.6min 85％ 15％ 2.0min 85％ 15％ 2.1min 50％ 50％ 3.0min 50％ 50％
6、柱温：60℃；流速：0.8ml/min；进样体积：1μl；
7、hplc-ms/ms检测的质谱检测条件为：电喷雾离子源，离子喷射电压：5500v，离子源温度：450℃，gs1：60psi，gs2：55psi，curtain gas：30psi，采用的监测模式为多重反应检测模式mrm。
8、作为进一步的技术方案，所述mrm的质谱条件如下表；
9、
10、作为进一步的技术方案，还包括血浆样品的前处理；
11、所述血浆样品的前处理，包括：按血浆、内标液和样本处理液的体积比为1:3:1，向待测血浆中加入内标液和样本处理液，振荡混匀，离心，上清液备用。
12、作为进一步的技术方案，还包括绘制标准曲线；
13、所述绘制标准曲线，包括：将不同浓度梯度的carfilzomib标准溶液，分别加入内标液和样本处理液，然后进样检测，并以carfilzomib标准溶液浓度为横坐标，以carfilzomib标准溶液的实测峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制校准曲线，即可。
14、作为进一步的技术方案，所述样本处理液为：2mmol/l乙酸铵-0.1％体积浓度的甲酸水溶液。
15、作为进一步的技术方案，不同浓度梯度carfilzomib标准溶液的配制方法为：以甲醇配制标准品储备液，然后用甲醇稀释成7个浓度梯度，7个浓度梯度分别为0ng/ml、5000ng/ml、10000ng/ml、15000ng/ml、25000ng/ml、50000ng/ml、75000ng/ml。
16、作为进一步的技术方案，还包括质控品，所述质控品用于检测方法的验证试验，所述检测方法的验证试验包括精密度试验、回收率试验和稳定性试验。
17、作为进一步的技术方案，所述质控品包含有单个水平的低、中、高浓度carfilzomib质控溶液；
18、低浓度水平质控溶液采用的是7500ng/ml的carfilzomib标准溶液；
19、中浓度水平质控溶液采用的是15000ng/ml的carfilzomib标准溶液；
20、高浓度水平质控溶液采用的是60000ng/ml的carfilzomib标准溶液。
21、一种所述检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法所用的试剂盒，包括质控品、校准品、内标液、样本处理液和流动相，其中，所述校准品包括0ng/ml、5000ng/ml、10000ng/ml、15000ng/ml、25000ng/ml、50000ng/ml、75000ng/ml的carfilzomib标准溶液。
22、一种所述试剂盒在血浆carfilzomib检测中的应用。
23、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
24、本专利技术以amiodarone为内标，并通过对hplc-ms/ms检测条件的优化，极大的降低了血浆中amiodarone的检测限本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS法，以Amiodarone为内标，对血浆中Carfilzomib的含量进行检测；内标液为：1000ng/mL的Amiodarone甲醇标准溶液；
2.根据权利要求1所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，还包括血浆样品的前处理；
4.根据权利要求3所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，还包括绘制标准曲线；
5.根据权利要求4所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述样本处理液为：2mmol/L乙酸铵-0.1％体积浓度的甲酸水溶液。
6.根据权利要求4所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，不同浓度梯度Carfilzomib标准
7.根据权利要求1所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，还包括质控品，所述质控品用于检测方法的验证试验，所述检测方法的验证试验包括精密度试验、回收率试验和稳定性试验。
8.根据权利要求7所述的一种检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述质控品包含有单个水平的低、中、高浓度Carfilzomib质控溶液；
9.一种如权利要求1～8任一项所述检测血浆中Carfilzomib含量的HPLC-MS/MS方法所用的试剂盒，其特征在于，包括质控品、校准品、内标液、样本处理液和流动相，其中，所述校准品包括0ng/mL、5000ng/mL、10000ng/mL、15000ng/mL、25000ng/mL、50000ng/mL、75000ng/mL的Carfilzomib标准溶液。
10.一种如权利要求9所述试剂盒在血浆Carfilzomib检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，采用hplc-ms/ms法，以amiodarone为内标，对血浆中carfilzomib的含量进行检测；内标液为：1000ng/ml的amiodarone甲醇标准溶液；
2.根据权利要求1所述的一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，还包括血浆样品的前处理；
4.根据权利要求3所述的一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，还包括绘制标准曲线；
5.根据权利要求4所述的一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，所述样本处理液为：2mmol/l乙酸铵-0.1％体积浓度的甲酸水溶液。
6.根据权利要求4所述的一种检测血浆中carfilzomib含量的hplc-ms/ms方法，其特征在于，不同浓度梯度carfilzomib标准溶液的配制方法为：以甲醇配制标准品储备液，然后用甲醇稀释成7个浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘红星，王磊，赵颖，陈佳琦，
申请(专利权)人：北京陆道培生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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