【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学领域，具体为一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法。
技术介绍
1、生物素又称为维生素h、辅酶r，是水溶性维生素，也属于维生素b族，它是合成维生素c的必要物质，式脂肪和蛋白质代谢不可或缺的物质，它存在于肝、蛋黄、奶、酵母等食物中。
2、链霉亲和素(streptavidin，sa)是由链霉菌(streptomyces avidinii)分泌的一种蛋白质，分子量为65kd。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子。生物素-链霉亲和素的相互作用很强，亲和常数(ka)为1015l/mol，比抗原与抗体间的亲和力(ka＝105～11l/mol)至少高1万倍。并且链霉亲和素对蛋白质和核酸的非特异结合非常低。
3、链霉亲和素磁珠由超顺磁微粒与链霉亲和素共价结合而成。可以用来捕获生物素标记配体，如生物素标记抗原、抗体、核酸分子等，并可在外加磁场下实现磁性分离，被广泛应用于生物研发及应用领域。
4、链霉亲和素磁性纳米微球的应用越来越广，那么如何测定其结合生物素化核酸就需要一种简便高效灵敏的方法来确定，市场上现能查阅检测链霉亲和素磁性纳米微球结合生物素化核酸的方法很少，因此需要设计一种一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，以解决上述背景
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，包括以下步骤：
4、步骤s1，链酶亲和素磁珠的洗涤：准备链酶亲和素磁珠，使用前需要将链酶亲和素磁珠进行洗涤，以去除保护剂，避免对实验结果造成影响；
5、步骤s2，生物素化核酸浓度的测定：链生物素化核酸孵育前需要用nano测定生物素化核酸浓度，并调整到合适的浓度；
6、步骤s3，生物素化核酸与链酶亲和素磁珠孵育：在1.5ml离心管中将链酶亲和素磁珠和过量的已知浓度生物素化核酸孵育，充分混匀后置于室温孵育15min；
7、步骤s4，收集上清：链酶亲和素磁珠在与生物素化核酸孵育完成需要进行清洗，以去除未与链酶亲和素磁珠反应的多余的生物素化核酸；
8、步骤s5，计算链霉亲和素磁珠结合的生物素化核酸含量：清洗后收集到的上清用nano测定生物素化核酸浓度。
9、进一步的，所述生物素化核酸采用88bp大小的核酸片段。
10、进一步的，所述生物素化核酸的浓度通过nano测定值来确定。
11、进一步的，所述链霉亲和素磁珠的浓度为10mg/ml。
12、进一步的，所述链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测试剂包括有0.1mph7.4磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠和去离子水按照比列制备而成。
13、进一步的，所述链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测试剂包括有0.1mph7.4磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠、吐温-20和去离子水按照比列制备而成。
14、进一步的，所述1mg链霉亲和素磁珠结合的生物素化核酸含量的计算公式为：
15、bcap(pmol)＝(c反应前×400-c反应后×800)×(1000/
16、2000)×1000/(88×324.5+244)。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
18、本专利技术的链霉亲和素磁性纳米微球结合生物素化核酸载量检测的方法，能够简单、快速的检测出链霉亲和素结合生物素化核酸的载量，为下游链霉亲和素磁性纳米微球的使用量提供依据，该法方便快捷，操作简便灵敏性高且成本低廉，可作为链亲和素固相载体物的一个参考标准；
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述生物素化核酸采用88bp大小的核酸片段。
3.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述生物素化核酸的浓度通过Nano测定值来确定。
4.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述链霉亲和素磁珠的浓度为10mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测试剂包括有0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠和去离子水按照比列制备而成。
6.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测试剂包括有0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲
7.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述1mg链霉亲和素磁珠结合的生物素化核酸含量的计算公式为：
...【技术特征摘要】
1.一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述生物素化核酸采用88bp大小的核酸片段。
3.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述生物素化核酸的浓度通过nano测定值来确定。
4.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述链霉亲和素磁珠的浓度为10mg/ml。
5.根据权利要求1所述的一种链酶亲和素磁珠结合生物素化核酸能力的检测方法，其特征在于：所述链酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘鸿君，王倩，刘勇，王艳萍，路洋洋，郑涛，
申请(专利权)人：汇智和源生物技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。