【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测，尤其是涉及一种ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肾脏是人体的重要器官，基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物。急性肾损伤(aki)是一种涉及多学科的临床常见危重病，由多种病因造成肾功能在短期内急性减退，由于患者在肾病早期症状不明显，很容易延误病情，因此，针对aki快速准确的检测对其及时的临床治疗具有十分重要的意义。
2、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)是一种脂质运载蛋白，在中性粒细胞、肾、结肠、肺上皮细胞等细胞和器官中低度表达，是肾脏结构损伤的标志物。肾脏在发生缺血或肾毒性损伤的时候，肾小管上皮细胞ngal表达急剧增强，ngal通过诱导肾小管间质中浸润的中性粒细胞发生凋亡从而保护肾组织免受炎性细胞的损害，并以此诱导肾小管上皮细胞再生。在aki时，血、尿ngal浓度通常会迅速升高，因而ngal可用于aki的早期诊断。
3、肾损伤分子-1(kim-1)是一种新型的i型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白基因超家族。正常情况下，肾脏组织几乎不表达kim-1蛋白，但是在肾脏损伤后数小时内kim-1的表达水平即显著升高。因此，kim-1可用于常见肾损伤疾病的辅助诊断、了解常见肾损伤疾病的病情，从而指导有效的治疗。
4、胱抑素c(cysc)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，循环中的胱抑素c仅经肾小球滤过而被清除，并在近曲小管重吸收，但是
5、但是aki的成因复杂多样，早期诊断不仅需要知道aki的肾损伤程度，还需要能够鉴别aki的分型、病因、预测预后及监控病情发展及治疗的效果，需要联合多种早期aki诊断标志物进行检测，但是目前常规检测方法比较单一，且难以对检测指标实现精确定量检测，因此亟需一种能同时对尿液样本中的ngal、kim-1和cysc进行床旁检测，并且都具有高特异性和高灵敏度的精确定量检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供一种ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸，能够同时对尿液样本中的ngal、kim-1和cysc进行床旁检测，并且均能实现高特异性和高灵敏度的精确定量检测。
2、本专利技术还提供一种使用上述联合检测用免疫层析试纸的ngal-kim-1-cysc联合检测方法。
3、本专利技术还提供一种上述ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸的制备方法。
4、本专利技术还提供一种上述联合检测用免疫层析试纸和制备方法在制备检测试剂盒中的应用。
5、本专利技术的第一方面，提供一种ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸，包括底板，所述底板上依次设置有样本垫、抗体偶合垫、反应膜、吸收纸，所述反应膜从抗体偶合垫一端开始依次包含有ngal检测区、kim-1检测区、cysc检测区和质控区。
6、根据本专利技术的具体实施方式，本专利技术提供的ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸至少具有如下有益效果：能同时对ngal、kim-1和cysc进行高特异性和高灵敏度的床旁检测；本专利技术提供的联合检测用免疫层析试纸的反应膜上从抗体偶合垫一端开始依次包含有ngal检测区、kim-1检测区、cysc检测区和质控区，根据本申请具体实施方式的探索，该检测区的排布使得本专利技术提供的试纸检测性能更优越，能同时对ngal、kim-1和cysc实现精确的定量检测。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述反应膜上的检测区和质控区平行排列。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述反应膜上的ngal检测区包被有ngal抗体，kim-1检测区包被有kim-1抗体，cysc检测区包被有cysc抗体。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述反应膜上的ngal检测区包被有ngal单克隆抗体，kim-1检测区包被有kim-1单克隆抗体，cysc检测区包被有cysc单克隆抗体。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述ngal单克隆抗体为购自重庆探生公司，克隆号为1f2，产品名称为fab-k001-1f2的抗体；所述kim-1单克隆抗体为购自biorbyt公司，克隆号为orb482762，产品名称为kim1 antibody的抗体；所述cysc单克隆抗体为购自海肽生物公司，克隆号为cyst11，产品名称为4cc1的抗体。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体偶合垫上含有偶联了荧光微球的ngal抗体、kim-1抗体和cysc抗体。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体偶合垫上含有偶联了荧光微球的ngal单克隆抗体、kim-1单克隆抗体和cysc单克隆抗体。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述ngal单克隆抗体为购自重庆探生公司，克隆号为1g2，产品名称为fab-k001-1g2的抗体；kim-1单克隆抗体为购自meridian公司，克隆号为k01384m，产品名称为mab to kim-1的抗体；cysc单克隆抗体为购自海肽生物公司，克隆号为cyst10，产品名称为4cc1的抗体。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述反应膜上和抗体偶合垫上的ngal、kim-1和cysc的抗体分别为不同的抗体。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述反应膜上和抗体偶合垫上的ngal、kim-1和cysc的抗体分别为结合不同的抗原结构域的抗体。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述样本垫经过封闭处理。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭处理的封闭液按质量分数计包括：0.5％-5％ bsa、0.25％-3％酪蛋白、0.25％-3％吐温20、0.5％-3％硼酸-peg、1％-5％海藻糖。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭处理的封闭液按质量分数计包括：1％-3％bsa、0.5％-2％酪蛋白、0.5％-2％吐温20、0.5％-2％硼酸-peg、1.5％-3％海藻糖。
19、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭处理的封闭液按质量分数计包括：2％bsa、1％酪蛋白、1％吐温20、1％硼酸-peg、2％海藻糖。
20、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭处理的封闭液按质量分数计由2％ bsa、1％酪蛋白、1％吐温20、1％硼酸-peg和2％海藻糖组成。
21、在本专利技术的一些实施方式中，所述硼酸-peg含有质量分数为10％的硼酸和质量分数为2％的peg20000。
22、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭处理的封闭液的溶剂为超纯水。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种NGAL-KIM-1-CysC联合检测用免疫层析试纸，包括底板，以及依次设置在所述底板上的样本垫、抗体偶合垫、反应膜、吸收纸，其特征在于，所述反应膜从抗体偶合垫一端开始依次包含有NGAL检测区、KIM-1检测区、CysC检测区和质控区。
2.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述反应膜上的NGAL检测区包被有NGAL抗体，KIM-1检测区包被有KIM-1抗体，CysC检测区包被有CysC抗体。
3.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述抗体偶合垫上含有偶联了荧光微球的NGAL抗体、KIM-1抗体和CysC抗体。
4.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述样本垫经过封闭处理。
5.根据权利要求4所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述封闭处理的封闭液按质量分数计包括：0.5％-5％BSA、0.25％-3％酪蛋白、0.25％-3％吐温20、0.5％-3％硼酸-PEG、1％-5％海藻糖。
6.一种如权利要求1～5任一项所述的联合检测用免疫层析试纸的
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述反应膜的材料选自硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜中的至少一种；
8.一种NGAL-KIM-1-CysC联合检测方法，其特征在于，所述联合检测方法使用权利要求1～5任一项所述的联合检测用免疫层析试纸。
9.根据权利要求8所述的NGAL-KIM-1-CysC联合检测方法，其特征在于，所述联合检测方法包括以下步骤：
10.如权利要求1～5任一项所述的联合检测用免疫层析试纸或权利要求6～7任一项所述的制备方法在制备检测试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种ngal-kim-1-cysc联合检测用免疫层析试纸，包括底板，以及依次设置在所述底板上的样本垫、抗体偶合垫、反应膜、吸收纸，其特征在于，所述反应膜从抗体偶合垫一端开始依次包含有ngal检测区、kim-1检测区、cysc检测区和质控区。
2.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述反应膜上的ngal检测区包被有ngal抗体，kim-1检测区包被有kim-1抗体，cysc检测区包被有cysc抗体。
3.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述抗体偶合垫上含有偶联了荧光微球的ngal抗体、kim-1抗体和cysc抗体。
4.根据权利要求1所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述样本垫经过封闭处理。
5.根据权利要求4所述的联合检测用免疫层析试纸，其特征在于，所述封闭处理的...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓朝义，庄建云，张雯娜，
申请(专利权)人：湖南知新上智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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