【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及外泌体的应用及促进毛发生长的方法。
技术介绍
1、外泌体直径约30-120nm，是由细胞分泌的生物纳米级球形脂质双层囊泡，为了将它们与其他类型的细胞外囊泡(ev)区分开来，被命名为外泌体。研究发现外泌体含 有核酸，蛋白质，脂质，细胞因子，转录因子受体和其他生物活性物质。其中，外泌 体蛋白成分主要分为两类，一类是参与囊泡形成和分泌过程的公共成分，包括膜转运 和融合相关蛋白(如rab)，gtp酶)，热休克蛋白(如hsp70，hsp90)，四个跨膜蛋 白超家族(如cd63，cd81)，escrt复合物相关蛋白(如tsg101，alix)，整合素等； 另一类是与其祖细胞密切相关的特定组分，即细胞特异性，例如源自抗原呈递细胞的 cd45和mhc-ii。随着对外泌体的深入研究，其应用越来越普遍。
2、外泌体作为细胞间通讯和物质交换的媒介，可以在生理和病理过程发挥作用。同时，外泌体可以递送多种生物活性物质，通过多个途径和位点，并安全地将它们转移 到靶细胞以参与调节，例如组织修复，肿瘤诊断和治疗以及免疫调节。
3、随着对外泌体的深入研究，其潜在的应用价值不断被挖掘。外泌体的可重复分离和富集将有助于评估其生物学功能。然而，外泌体在大小，内容，功能和来源上是异 质的，使得分离变得困难。出于不同的目的和应用，可选择不同的外泌体分离方法， 其中超速离心法，基于外泌体大小的分离技术，聚合物沉淀，免疫亲和捕获技术更为 常用。
4、超速离心法(uc)是目前使用最广泛的分离技术，也被称为外泌体提取
5、当非均相混合物(悬浮液)经受离心力离心时，悬浮液中的颗粒成分根据它们的密度，大小和形状沉淀。更致密或更大的颗粒首先沉降。离心通常用于分离和纯化颗 粒材料以及分析聚合物材料的流体动力学性质包括核酸和蛋白质等生物聚合物。根据 施加的离心力，悬浮液中的颗粒可以根据其物理性质、溶剂的密度和粘度顺序分离。 超速离心是一种优化的离心过程，可产生高达1000000×g的极高离心力。据估计，超 速离心法占所有外泌体研究中外泌体分离技术的56％。这种方法通常被许多人认为易 于使用，其价格合理(即一台长期使用的超离心机)，并且在样本预处理很少或没有样 本预处理的情况下，花费的时间适中。由于这些原因，基于超速离心的技术已经成为 外泌体研究人员的一个相当流行的选择。超速离心法有两种类型——差速超速离心和 密度梯度超速离心。通过差速超速离心分离外泌体通常包括一系列离心循环，离心力 和持续时间不同，根据其密度和大小与样品中其他组分的差异来分离外泌体。
6、目前，常见治疗脱发的方法毛囊移植植发、口服药物以及外用药物。
7、毛囊移植视个体不同而情况也不相同，移植半年左右才开始进入生长期，往往1年左右的时间才能达到最佳效果。其弊端为：1)需要患者自我毛囊，一般是取后枕部 优势供区的毛囊移植到需要部位；2)移植术后有很大概率毛囊发炎，而且容易复发；
8、3)术后种植区头发易油且有头皮屑，种植区头皮还会有颗粒感。植发是一种“拆东墙 补西墙”的原理。其局限性比较强，只适用于小面积局部脱发，非遗传性脱发人群。
9、口服药物中，西药内服有非那雄胺，类似的西药产品还有、保列治、依立雄胺和 度他雄胺等，不过长期大量服用会对身体产生副作用。如性欲减退、阳痿；乳房触痛 或肿大、过敏反应(包括皮疹、瘙痒、荨麻疹和口唇肿胀)和睾丸疼痛等，停药后复脱 几率大；中药内服有养血生发胶囊、固肾生发丸等，长期服用会对肝脏有一定损伤， 造成内分泌紊乱等症状。
10、外用药物通常使用米诺地尔，副作用是过敏，影响血压。体毛加重，长期使用产 生抗药性，停药后复脱明显，无法起到从根源解决问题的效果，药物治疗存在个体差 异，根据个人身体条件，有的人使用后会有一些效果，有的人则无任何效果，对大部 分人来讲，治疗效果都不够理想，且难逃副作用的困扰。
11、综上，被广泛应用的治疗脱发方法还是有限，无论是宣传甚广的手术治疗还是口服或外用药虽然能在一定程度上起到防止脱发和促进生发的作用，但是不能从根本上 解决脱发问题，而且相继带来的一系列副作用往往使想要治疗脱发的患者望而却步。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供外泌体的应用。
2、本专利技术提供了外泌体在促进毛发再生或制备促进毛发再生的产品中的应用。
3、可选地，根据上述的应用，所述促进毛发再生为促进毛发生长和/或防止毛发 脱落。
4、可选地，根据上述的应用，所述产品为药物、保健品、食品或洗护用品。。
5、可选地，根据上述的应用，所述外泌体来源于间充质干细胞。
6、可选地，根据上述的应用，所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞。
7、可选地，根据上述的应用，所述外泌体的制备方法包括：培养脐带间充质干 细胞，收集培养后的脐带间充质干细胞的培养上清，分离纯化所述培养上清获得 所述外泌体。
8、所述脐带间充质干细胞可采用组织块培养法获得，例如采用培养基培养华通 氏胶组织块，培养后所述组织块边缘爬出的细胞即为脐带间充质干细胞。脐带间充质 干细胞可为冻存的脐带间充质干细胞。冻存的脐带间充质干细胞在培养前需进行复苏， 复苏方法可为实施例1“三、uc-msc细胞复苏培养及培养液收集”中的步骤1-9。
9、所述培养脐带间充质干细胞可包括采用pbs洗涤有细胞爬出的组织块，先后 加入培养基静置和混匀获得细胞悬液，离心细胞悬液获得细胞沉淀，采用培养基 重悬细胞沉淀后进行培养。培养后的细胞融合度可达80％-85％。
10、所述收集培养后的脐带间充质干细胞的培养上清可包括采用dpbs洗涤培养后 的细胞，采用tryple-胰酶替代物消化洗涤后的细胞，离心消化后的细胞，采用培养 基重悬离心后的细胞获得细胞悬液，培养细胞悬液48h收集上清，再补充培养液培养 24h收集上清，两次收集的上清即为所述培养后的脐带间充质干细胞的培养上清。
11、可选地，根据上述的应用，所述分离纯化所述培养上清获得所述外泌体包括
12、(1)对所述培养上清进行300g，4℃，10min离心收集上清，
13、(2)对步骤(1)收集的上清进行2000g，4℃，10min离心收集上清，
14、(3)对步骤(2)收集的上清进行10000g，4℃，30min离心收集上清，
15、(4)对步骤(3)收集的上清使用0.8um滤器进行过滤获得预处理后的培养 上清，
16、(5)对所述预处理后的培养上清进行100000g，4℃，70min离心获得沉淀，
17、(6)采用dpbs重悬步骤(5)获得的沉淀，
18、(7)对步骤(6)重悬后的沉淀进行100000g，4℃，70min离心获得外泌体 沉淀。
19、本专利技术还提供了促进毛发生长的方法，包括将上述外泌体涂覆在皮肤表面的 期望毛发生本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.外泌体在促进毛发再生或制备促进毛发再生的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述促进毛发再生为促进毛发生长和/或防止毛发脱落。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述产品为药物、保健品、食品或洗护用品。。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述外泌体来源于间充质干细胞。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述外泌体的制备方法包括：培养脐带间充质干细胞，收集培养后的脐带间充质干细胞的培养上清，分离纯化所述培养上清获得所述外泌体。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述分离纯化所述培养上清获得所述外泌体包括
8.促进毛发生长的方法，其特征在于：包括将权利要求1中所述外泌体涂覆在皮肤表面的期望毛发生长的区域。
9.药物，其特征在于：包括权利要求1中所述外泌体。
【技术特征摘要】
1.外泌体在促进毛发再生或制备促进毛发再生的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述促进毛发再生为促进毛发生长和/或防止毛发脱落。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述产品为药物、保健品、食品或洗护用品。。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述外泌体来源于间充质干细胞。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱姿英，赵鹏伟，赖维维，
申请(专利权)人：北京星辉再生科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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