【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及一种基于两亲性树形分子的小干扰rna递送系统及其制备方法和用途。
技术介绍
1、小干扰rna(sirna)药物可特异性“沉默”致病基因，在基因层面发挥治疗作用，突破传统药物靶点的“不可成药性”。sirna药物具有高特异性、药物靶点丰富、疗效持久、设计合成简便以及临床转化成功率高等特点，在恶性肿瘤、免疫系统疾病、罕见病等重大疾病的治疗和预防方面具有十分广阔的应用前景。
2、然而，sirna自身不稳定，容易被核酸酶降解；sirna的强亲水性和丰富的负电荷使其难以穿过细胞膜。sirna自身的特性使其需要安全高效的载体将其输送至靶部位。脂质载体和聚合物载体是当下最新先进的sirna递送技术之一，能有效保护sirna药物不被降解，提高其生物利用度，促进其靶细胞摄取，增强其治疗效果。近年来开发的两亲性树形分子充分结合脂质载体和聚合物载体的递送优势，在sirna输送中极具开发价值。此类，两亲性树形分子由亲水树枝状结构和疏水烷基长链组成，可在水溶液中通过非共价相互作用力(如疏水相互作用、范德华力、氢键相互作用等)自组装形成树形分子组装体，能特异安全高效地将sirna递送至不同类型细胞、难转染细胞(如免疫细胞和干细胞)和不同类型的动物模型中。然而，两亲性树形分子在体内高效输送sirna也面临血液循环稳定性的挑战。机体血液中存在大量的血清蛋白等物质极易吸附在阳离子sirna递送载体表面，破坏复合物的稳定性，极大程度上降低载体的sirna递送效率和体内基因沉默活性。综上所述，根据sirna体内输送需求，合理化设
3、本专利技术的基于氟功能化两亲性树形分子的sirna递送系统能够稳定包载sirna，并且具有优异的抗血清转染能力，在一定程度上解决了阳离子核酸递送系统在血清条件下不稳定从而导致转染效率受限的问题，这对于开发具有自主知识产权的生物功能载体材料具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种基于氟功能化两亲性树形分子的sirna递送系统，能够有效负载并保护sirna，形成稳定的复合物，提高其在生理环境的血清条件下的稳定性，从而提高sirna的递送效率。
2、本专利技术的另一目的是提供一种基于两亲性树形分子的sirna递送系统的制备方法。
3、本专利技术的又一目的是提供基于两亲性树形分子sirna递送系统在肿瘤治疗中的应用。
4、本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
5、一种基于两亲性树形分子的sirna递送系统，该递送系统包括递送成分和治疗成分，递送成分是氟功能化修饰的两亲性树形分子，治疗成分是其负载的具有靶向基因抑制效果的sirna；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子在水溶液中与sirna通过静电相互作用自组装形成表面带正电荷的纳米颗粒；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子为式i所示结构的化合物，或其药学上可接受的盐，
6、
7、通式i氟功能化两亲性树形分子
8、其中，
9、r1为生物相容性良好的c1-10氟代烷基；
10、r2为c、n、o或s；
11、r3为c0-20的亚烷基；
12、r4为氨基或
13、本专利技术中选用的两亲性阳离子树枝状类脂质载体具有良好的生物相容性。该载体所形成的组装体能通过静电相互作用有效负载sirna，提高其在生理条件的稳定性，安全高效将其输送至靶部位，通过“质子海绵效应”促进sirna的释放，发挥基因沉默作用。
14、作为本专利技术的一种优选，r1为-c(cf3)3；
15、r2为o；
16、r3为c15-20的亚烷基；
17、r4为氨基或
18、作为本专利技术的进一步优选，所述两亲性树形分子以下结构的化合物，或其药学上可接受的盐：
19、
20、作为本专利技术的进一步优选，所述的sirna选自化学修饰或不修饰的两条链对称的小核酸干扰分子，或者化学修饰或不修饰的两条链配对不对称的小核酸干扰分子。
21、作为本专利技术的进一步优选，所述的形成sirna/两亲性树形分子的n/p比为1:20～50:1，优选n/p比为2:1～25:1；其中所述的n/p为两亲性树形分子中氨基与sirna中磷酸基团的比例。
22、本专利技术所述的氟功能化两亲性树形分子的sirna递送系统的制备方法，所述的氟功能化两亲性树形分子可通过薄膜分散法、溶剂挥发法或直接水溶法中与sirna自组装形成的带正电荷的纳米颗粒，包括如下步骤：
23、(1)两亲性树形分子溶液的制备：在无菌条件下操作，将两亲性树形分子溶于无菌水中，超声，静置，制备成储备液；
24、(2)sirna/氟功能化两亲性树形分子递送体系的制备：采用以下几种方式得到复合物溶液。①薄膜分散法：先将一定量氟功能化两亲性树形分子溶于有机溶剂中，旋转蒸发形成薄膜，然后加入含sirna的水溶液形成一定的n/p(n/p为树形分子中氨基与核苷酸中磷酸基团的比例)纳米复合物水溶液，静置，用无菌水稀释至一定浓度，制备为所需浓度的复合物溶液。②溶剂挥发法：在无菌条件下操作，将氟功能化两亲性树形分子溶于适量的乙醇或其它有机溶剂中，将其与一定量的sirna的水溶液按一定的n/p搅拌混匀，通过超声或者搅拌使有机溶剂挥发完全，即得复合物溶液；③直接水溶法：在无菌条件下操作，将一定量两亲性树形分子的储备液与sirna药物的水溶液迅速混匀，配置一定n/p的溶液。混匀后，将复合物溶液用无菌水溶液稀释至一定浓度，即得复合物溶液；
25、(3)灌装：在无菌条件下操作，将单剂量的复合物溶液灌装密封或制成冻干粉剂。
26、所述的氟功能化两亲性树形分子与sirna的n/p比为1:20～50:1，进一步优选n/p比为2:1～25:1。n/p为两亲性树形分子中的氨基与sirna核苷酸中磷酸基团的比例。
27、所述的sirna选自人工合成的化学修饰或不修饰的双链对称的小干扰核糖核酸，或者化学修饰或不修饰的两条链配对不对称的小干扰核糖核酸。
28、所述的纳米颗粒粒径分布在5～100nm，纳米颗粒表面zeta电位分布在10～60mv。
29、本专利技术所述的基于两亲性树形分子的sirna递送系统在制备基因治疗药物中的应用；优选在制备癌症的抗肿瘤基因治疗药物中的应用。
30、有益效果：本专利技术根据sirna的特点及其在体内输送的需求，利用两亲性树形分子其表面丰富的伯氨基团有效负载并保护sirna形成均一的纳米尺度复合物；其次，利用氟功能化两亲性树形分子保留了氟功能基团的“亲氟”效应，提升载体以及其构建的sirna递送体系的在生理条件下的稳定性和抗血清转染性能；本专利技术所述的sirna递送系统在不同浓度(0％-50％，尤其是0～1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种负载siRNA的氟功能化修饰的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，该递送系统包括递送成分和治疗成分，递送成分是氟功能化修饰的两亲性树形分子，治疗成分是其负载的具有靶向基因抑制效果的siRNA；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子在水溶液中与siRNA通过静电相互作用自组装形成表面带正电荷的纳米颗粒；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子为式I所示结构的化合物，或其药学上可接受的盐，
2.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子选自以下任意一种：
4.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的siRNA选自化学修饰或不修饰的两条链对称的小核酸干扰分子，或者化学修饰或不修饰的两条链配对不对称的小核酸干扰分子。
5.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的形成siRNA/两亲性树形分子的N/P比为1:20～50:1，优选N/P比为2:1～25:1；其中所述的N/P为两亲性树形分子中氨基
6.权利要求1-5中任一项所述的两亲性树形分子递送系统的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述氟功能化修饰的两亲性树形分子的溶解温度为10～30℃，静置时间为5～30min；步骤(2)中所述的siRNA的溶解温度为10～30℃，静置时间为5～30min；所述的形成siRNA/两亲性树形分子复合物溶液的N/P比为1:20～50:1，进一步优选N/P比为2:1～25:1，静置时间为10～40min。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括(3)灌装：在无菌条件下操作，将单剂量的复合物溶液灌装到安瓿瓶中，密封。
9.权利要求1-5中任一项所述的两亲性树形分子递送系统在制备基因治疗药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于权利要求1-5中任一项所述的两亲性树形分子递送系统在制备抗肿瘤基因治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种负载sirna的氟功能化修饰的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，该递送系统包括递送成分和治疗成分，递送成分是氟功能化修饰的两亲性树形分子，治疗成分是其负载的具有靶向基因抑制效果的sirna；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子在水溶液中与sirna通过静电相互作用自组装形成表面带正电荷的纳米颗粒；所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子为式i所示结构的化合物，或其药学上可接受的盐，
2.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的氟功能化修饰的两亲性树形分子选自以下任意一种：
4.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的sirna选自化学修饰或不修饰的两条链对称的小核酸干扰分子，或者化学修饰或不修饰的两条链配对不对称的小核酸干扰分子。
5.根据权利要求1所述的两亲性树形分子递送系统，其特征在于，所述的形成sirna/两亲性树形分子的n/p比为1:20～50:1，优选n/p比为2:1～...
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