【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及运输蛋白新型变体及利用其的l-芳香族氨基酸的生产方法。
技术介绍
1、氨基酸根据侧链的性质而分为疏水性、亲水性、碱性和酸性氨基酸，将它们中具有苯环的氨基酸称为芳香族氨基酸。在芳香族氨基酸中，有苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，苯丙氨酸和色氨酸是生物体内不能合成的必要氨基酸，属于在全世界每年形成着3000亿美元规模的市场的高附加值产业。
2、芳香族氨基酸的生产可以利用自然状态下获得的野生型菌株或者以提高其氨基酸生产能力的方式改变的变异株。近年来，为了改善芳香族氨基酸的生产效率，以多用于l-氨基酸之类的有用物质的生产的大肠杆菌、棒状杆菌等微生物为对象，适用基因重组技术，从而开发了具有优异的l-芳香族氨基酸生产能力的各种重组菌株或变异株及利用其的l-芳香族氨基酸的生产方法。特别是，进行了如下尝试：以参与l-芳香族氨基酸的生物合成途径的酶、转录因子、运输蛋白等的基因为靶向、或者对调控它们的表达的启动子诱导变异，从而扩大相应氨基酸的生产量。但是，与l-芳香族氨基酸生产直接或间接相关的酶、转录因子、运输蛋白等蛋白质的种类达到数十余种，因此关于根据这样的蛋白质的活性变化的l-芳香族氨基酸生产能力是否增加，事实上仍需要大量的研究。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、韩国授权专利第10-1830002号
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供新型的运输蛋白变体。
2、另外，本专利技术提供编码上述变体的多核苷酸。
3、
4、另外，本专利技术的目的在于提供利用了上述转化体的l-芳香族氨基酸的生产方法。
5、本专利技术的一个方式提供选自以下变体中的变体：铵运输蛋白变体，由seq id no:1的氨基酸序列组成，是seq id no:3的氨基酸序列中的第363号甘氨酸被置换为天冬氨酸而成的；腺嘌呤运输蛋白变体，由seq id no:5的氨基酸序列组成，是seq id no:7的氨基酸序列中的第136号色氨酸被置换为终止密码子而成的；以及fmn/fad运输蛋白变体，由seq idno:9的氨基酸序列组成，是seq id no:11的氨基酸序列中的第272号甘氨酸被置换为谷氨酰胺而成的。
6、本专利技术中所使用的“运输蛋白(transporter)”是负责通过细胞膜而移动离子、化学物质、蛋白质等各种物质的蛋白质的总称，运输蛋白对被运输的物质具有特异性。这样的运输蛋白大致分为通道蛋白质和转运体蛋白质，上述通道蛋白质在膜上形成贯通内部和外部的孔而成为物质的移动通道，上述转运体为通过蛋白质的结构性变形使转运物质的结合部位跨膜而移动的运输体。
7、本专利技术中所使用的“铵运输蛋白”、“腺嘌呤运输蛋白”和“fmn/fad运输蛋白”均相当于转运体蛋白质，分别具有只使铵、腺嘌呤和fmn(黄素单核苷酸(flavinmononucleotide))/fad(黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide))特异性外排的特性。
8、上述运输蛋白可以是编码各运输蛋白的基因或与其具有实质同一性的序列。在这里，“实质同一性”是指在将各个基因序列，即碱基序列或核苷酸序列和任意的其它核苷酸序列以最大程度对应的方式对齐而进行分析时，上述任意的其它核苷酸序列和各个核苷酸序列具有70％以上、80％以上、90％以上或98％以上的序列同源性。
9、本专利技术中的铵运输蛋白是利用amtb基因编码而成的，包含seq idno:3的氨基酸序列。
10、根据本专利技术的一具体例，上述seq id no:3的氨基酸序列可以源于野生型大肠杆菌。
11、本专利技术中的腺嘌呤运输蛋白是利用yico基因编码而成的，包含seq id no:7的氨基酸序列。
12、根据本专利技术的一具体例，上述seq id no:7的氨基酸序列可以源于野生型大肠杆菌。
13、本专利技术中的fmn/fad运输蛋白是利用yeeo基因编码而成的，包含seq id no:11的氨基酸序列。
14、根据本专利技术的一具体例，上述seq id no:11的氨基酸序列可以源于野生型大肠杆菌。
15、本专利技术中所使用的“变体”是指如下的多肽，该多肽的特定基因的氨基酸序列的n-末端、c-末端和/或内部中的一个以上的氨基酸被保守性置换(conservativesubstitution)和/或改变(modification)，从而与上述变体的变异前的氨基酸序列不同，但维持了功能(functions)或特性(properties)。在这里，“保守性置换”是指将一个氨基酸置换为结构和/或化学性质相似的其它氨基酸，对蛋白质或多肽的活性几乎不产生影响，或者可以完全不产生影响。此外，变体包括一个以上的n-末端前导序列或跨膜结构域(transmembrane domain)之类的部分被剔除的变体、或者一部分从成熟蛋白质(matureprotein)的n-和/或c-末端被剔除的变体。与变异前的多肽相比，这样的变体其能力可以增加或不变或减少。在本专利技术中，变体可以与变异型、改变、变异型多肽、变异的蛋白质、变异等混用。
16、本专利技术中的变体是铵运输蛋白变体，是位于seq id no:3的氨基酸序列中的第363号的氨基酸即甘氨酸被置换为天冬氨酸而成的，可以由seq id no:1的氨基酸序列组成。
17、另外，本专利技术中的变体是腺嘌呤运输蛋白变体是位于seq id no:7的氨基酸序列中的第136号的氨基酸即色氨酸被置换为终止密码子而成的，可以由seq id no:5的氨基酸序列组成。
18、另外，本专利技术中的变体是fmn/fad运输蛋白变体，是位于seq id no:11的氨基酸序列中的第272号的氨基酸即甘氨酸被置换为谷氨酰胺而成的，可以由seq id no:9的氨基酸序列组成。
19、本专利技术的另一方式提供编码上述铵运输蛋白变体、腺嘌呤运输蛋白变体或fmn/fad运输蛋白变体的多核苷酸。
20、本专利技术中所使用的“多核苷酸(polynucleotide)”是核苷酸单体(monomer)通过共价键以链状长长地连接而成的核苷酸的聚合物(polymer)，是一定长度以上的dna或rna链，更具体而言，是指编码上述变体的多核苷酸片段。
21、上述多核苷酸可以包含编码seq id no:1、5或9的氨基酸序列的碱基序列。
22、根据本专利技术的一具体例，上述多核苷酸可以包含由seq id no:2、6或10表示的碱基序列。
23、更具体而言，编码上述铵运输蛋白变体的多核苷酸包含由seq id no:2表示的碱基序列，编码上述腺嘌呤运输蛋白变体的多核苷酸包含由seq id no:6表示的碱基序列，编码上述fmn/fad运输蛋白变体的多核苷酸包含由seq id no:10表示的碱基序列。
24、本专利技术的另一方式提供包含编码上述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种FMN/FAD运输蛋白变体，由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成，是SEQ ID NO:11的氨基酸序列中的第272号甘氨酸被置换为谷氨酰胺而成的。
2.一种多核苷酸，编码权利要求1的变体。
3.一种转化体，包含权利要求1的变体或权利要求2的多核苷酸。
4.根据权利要求3所述的转化体，其中，所述转化体为埃希菌(Escherichia)属菌株。
5.根据权利要求3所述的转化体，其中，所述转化体具有L-芳香族氨基酸生产能力。
6.一种L-芳香族氨基酸的生产方法，其包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述L-芳香族氨基酸为选自L-色氨酸、L-苯丙氨酸和L-酪氨酸中的1种以上。
【技术特征摘要】
1.一种fmn/fad运输蛋白变体，由seq id no:9的氨基酸序列组成，是seq id no:11的氨基酸序列中的第272号甘氨酸被置换为谷氨酰胺而成的。
2.一种多核苷酸，编码权利要求1的变体。
3.一种转化体，包含权利要求1的变体或权利要求2的多核苷酸。
4.根据权利要求3所述的转化体，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：金贤英，杨澈敏，申沅株，金容秀，曹永一，
申请(专利权)人：大象株式会社，
类型：发明
国别省市：
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