【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种mic蛋白及ulbp蛋白二价纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、主要组织相容性复合体i 类分子链相关基因(major histocompatibilitycomplex class i chain-related gene, mic) 定位于人类第6 条染色体短臂上(6p21.3)，是跨越mhc-i类区域2mb 长度的非经典hla-i 类基因家族。mic 基因家族包括mica，micb，micc，micd，mice，micf 和micg 7 个成员，其中只有mica、micb为功能基因，具有编码、转录和表达功能，余者5个由于点突变和缺失突变为假基因。包括5个内含子和6 个外显子，外显子1 编码l 前导肽，外显子2-4 分别编码细胞外α1、α2 和α3 3个球状结构域，外显子5 编码跨膜区(tm)，外显子6 编码胞质尾部结构。
2、mica 基因编码的产物是一条含有383 个氨基酸、相对分子质量为43kda 的高度糖基化的蛋白质分子。mica/b 高度多态性，mica 有超过100种多态性，而micb 也超过33种可识别等位基因（hla.alleles.org/classo.html 2019）。 micb 含 3 个可变的胞外域，1 个跨膜区域和 1个羧基尾端。胞外区域也包括α1、α2 和α3 3个结构域。虽然 mica/b的基因长度有一定差距，但在二者起始密码子上游一段长度约 1500 bp 的区段中，彼此约有90%的同源性，并且 mica/b 在近端均含有1个热休克蛋白元件（王健，2
3、在人类中，nkg2d配体除了mica和micb外，还有人类巨细胞病毒糖蛋白 ul-16 结合蛋白( ul-16 binding protein，ulbp) ，又名raet1蛋白，包括六个不同的ulbps蛋白（ulbp1~6），该配体蛋白也位于人类6号染色体上。ulbp 分为表达于组织细胞膜上的 m-ulbp(membrane ulbp)和血液中游离的s-ulbp（soluble ulbp）。有研究发现，肿瘤患者血清中的游离形式的s-ulbp 蛋白增多一方面是由于基质金属蛋白酶或磷脂酶 c 的溶蛋白性裂解作用所致，另一方面是通过溶酶体依赖的方式释放到胞外导致，而游离 ulbp 蛋白能够结合到自然杀伤细胞表面的 nkg2d 受体上，通过影响自然杀伤细胞受体的功能而影响其杀伤作用。所以，sulbp同样对nkg2d的免疫监视起到了抑制作用。据此，有研究者设计将抗mic蛋白纳米抗体和抗ulbp蛋白纳米抗体连接起来，做成融合蛋白，偶联至固相载体上做成免疫吸附剂，同时吸附mica、micb和ulbp分子，可能成为一种新的抗肿瘤治疗方法。
4、1993年hamers 报道了在骆驼科动物体内发现了一种天然缺失轻链的抗体即重链抗体，其抗原结合位点仅由重链的可变区（variable domain of heavy chain of hcabs，vhhs）构成，所以也称为vhh 抗体，是目前可以得到的具有完整功能的最小抗体分子片段。vhh包括4段框架区(fr1～fr4)和3段互补决定区(cdr1～cdr3)。vhh 抗体相对分子质量约15k da，仅为常规抗体的 1/10，其分子高度 4.8nm，直径在 2.2nm，故又称为纳米抗体（nanobody）纳米抗体不仅有分子量小、物理稳定性高、容易表达等特性优点，而且不易聚集沉淀，还保留了与抗原结合的能力。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种抗mic蛋白的纳米抗体、mic蛋白及ulbp蛋白二价纳米抗体及其应用。
2、本专利技术所采取的技术方案是：
3、本专利技术的第一个方面，提供：
4、一种抗mic蛋白的纳米抗体，其cdr1～cdr3的氨基酸序列如下：
5、cdr1：sfdaw（seq id no.：1）、cdr2：slsdyynksvyadsvkg（seq id no.：2）、cdr3：gpdyfderay（seq id no.：3）；或
6、cdr1：awsry（seq id no.：4）、cdr2：gttwddtlkvyadsvkg（seq id no.：5）、cdr3：wygrtfdayn（seq id no.：6）；或
7、cdr1：gmyam（seq id no.：7）、cdr2：gnkyrtnpsvyadsvkg（seq id no.：8）、cdr3：gydgrtfeay（seq id no.：9）；或
8、cdr1：wmsam（seq id no.：10）、cdr2：gmkyrttpsvsadswky（seq id no.：11）、cdr3：dydmgqtweay（seq id no.：12）。
9、在一个抗mic蛋白纳米抗体的具体实例中，所述抗mic蛋白纳米抗体的fr1～fr4的氨基酸序列如下：
10、fr1：dvqlqesggglvqpggslrlscvgsgfsft（seq id no.：13）；
11、fr2：wyrqapgkerelva（seq id no.：14）；
12、fr3：rftiskdnnkntvylqmnnlkpedtavyycrr（seq id no.：15）；
13、fr4：wgqgtqvtvss（seq id no.：16）。
14、本专利技术的第二个方面，提供：
15、一种抗ulbp蛋白的纳米抗体，其cdr1～cdr3的氨基酸序列如下：
16、cdr1：lvsgmgg（seq id no.：17）、cdr2：eihwdwddkrynapslk（s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗MIC蛋白的纳米抗体，其特征在于：其CDR1～CDR3的氨基酸序列如下：
2.根据权利要求1所述的抗MIC蛋白的纳米抗体，其特征在于：其FR1～FR4的氨基酸序列如下：
3.一种抗MIC蛋白和ULBP蛋白的二价纳米抗体，由抗MIC蛋白纳米抗体和抗ULBP蛋白纳米抗体通过连接肽偶联得到，其特征在于：所述抗MIC蛋白纳米抗体如权利要求1或2所述。
4.根据权利要求3所述的二价纳米抗体，其特征在于：所述抗ULBP蛋白纳米抗体的CDR1～CDR3的氨基酸序列如下：
5.根据权利要求4所述的二价纳米抗体，其特征在于：所述抗ULBP蛋白纳米抗体的FR1～FR4的氨基酸序列如下：
6.根据权利要求3～5任一项所述的二价纳米抗体，其特征在于：所述连接肽的氨基酸序列为：(GlySer)n、(Gly2Ser)n、(Gly3Ser)n或(Gly4Ser)n，n=1～5。
7.一种基因，其编码权利要求1或2所述的抗MIC蛋白的纳米抗体或编码权利要求3～6任一项所述的二价纳米抗体。
8.一种免疫吸附剂，包括固相载
9.一种血液净化器械，其特征在于：其包括权利要求8所述的免疫吸附剂。
...【技术特征摘要】
1.一种抗mic蛋白的纳米抗体，其特征在于：其cdr1～cdr3的氨基酸序列如下：
2.根据权利要求1所述的抗mic蛋白的纳米抗体，其特征在于：其fr1～fr4的氨基酸序列如下：
3.一种抗mic蛋白和ulbp蛋白的二价纳米抗体，由抗mic蛋白纳米抗体和抗ulbp蛋白纳米抗体通过连接肽偶联得到，其特征在于：所述抗mic蛋白纳米抗体如权利要求1或2所述。
4.根据权利要求3所述的二价纳米抗体，其特征在于：所述抗ulbp蛋白纳米抗体的cdr1～cdr3的氨基酸序列如下：
5.根据权利要求4所述的二价纳米抗体，其特征在于：所述抗ulbp蛋白纳米抗体的fr...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈校园，李家萍，张海珍，杨睿祯，陈思锐，杨正根，
申请(专利权)人：广州康盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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