【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种含半胱氨酸的抗体、药物偶联物及其应用。
技术介绍
1、传统的随机偶联的抗体-药物偶联物(adc)是由小分子抗肿瘤药物和抗体中的天然氨基酸连接偶联而成，药物和抗体偶联的位置和数目无法控制，产物结构不均一、批次可重复性差、治疗指数低等。近年来，基于thiomab、非天然氨基酸、转移酶等进行的定点偶联技术有效克服了上述缺点，这些技术可以有效控制药物结合的位置，获得药抗比均一的偶联物，使得位点专一的抗体-药物偶联物成为adc研究新趋势。
2、tdc与传统adc药物相比有着不可取代的优点。传统adc药物中随机还原抗体的二硫键，并由共价键的连接将药物模块附着至抗体一般会产生不均一的分子混合物，此混合物通常含有0-8个药物模块附着的抗体，且药物模块附着于抗体上的不同位点。此混合物含有不同的药物/抗体摩尔比和连接位点不同，且每种具有不同的药代动力学、抗癌功效和安全性。现有的分析和制备方法不足以分离和表征由随机偶联反应产生的不均一混合物中adc分子。抗体是较大的、复杂的生物分子，常常带有许多官能团。它们与接头试剂和药物-接头中间体的反应性取决于诸如ph、浓度、盐浓度和溶剂等因素，多步骤高度可重复性的偶联过程很难在adc的生产过程中被控制。所以，位点专一性单一药抗比的tdc药物就能解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是现有的可与药物形成偶联物的抗体结构较为单一等缺陷，因此，本专利技术提供了一种含半胱氨酸的抗体、药物偶联物及其应用。该抗体亲和力高
2、本专利技术提供了一种抗体，其包括重链和轻链，其重链恒定区为人源γ1链(替换前)，其轻链恒定区为人源κ链(替换前)，其特征在于，其a位点和/或b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸；其中，
3、(1)所述的a位点为所述的抗体的重链恒定区的第114、115、132、134、143、151、158、160、161、172、190、191、204、235、322、338、380和396位点中的一个或多个；
4、(2)所述的b位点为所述的抗体的轻链恒定区的第109、145、152、153、169和191位点中的一个或多个；
5、当所述的a位点为所述的抗体的重链恒定区的第114或235位点时，所述的抗体的重链恒定区(替换前)为如序列表seq id no:5所示氨基酸序列的人源γ1链；
6、所述位点根据kabat编号系统编号。
7、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
8、在所述的抗体中，所述的抗体由所述的重链和所述的轻链组成。
9、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
10、所述的a位点或b位点的氨基酸残基可替换为半胱氨酸。
11、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
12、在所述的抗体中，所述的抗体的重链的数目为两条。
13、在所述的抗体中，所述的a位点成对出现在两条重链中。例如，“所述的a位点为所述的抗体的重链恒定区的第115位点”是指两条重链中的第115位点的氨基酸残基均为半胱氨酸。
14、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
15、所述的(1)中的“多个”例如2个、3个、4个、5个或6个，又例如2个或3个，还例如2个。
16、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
17、当所述的a位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时，所述的a位点可为所述的抗体的重链恒定区的第114、115、132、134、143、151、158、160、172、190、191、204、235、322、338、380和396位点中的一个或多个。
18、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
19、当所述的a位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时，所述的a位点可为所述的抗体的重链恒定区的第114、158、160、204、235、322、338和396位点中的一个或多个。
20、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
21、当所述的a位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时，所述的a位点可为所述的抗体的重链恒定区的第114、158、160和235位点中的一个或多个。
22、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
23、在所述的替换前，所述的a位点的氨基酸残基为丙氨酸或谷氨酰胺。
24、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
25、当所述的a位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时(包括但不限于“a位点和b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸”的情形，全文同此)，所述的a位点的数量为一个。
26、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
27、在所述的抗体中，所述的抗体的轻链的数目为两条。
28、在所述的抗体中，所述的b位点成对出现在两条轻链中。例如，“所述的b位点为所述的抗体的轻链恒定区的第145位点”是指两条轻链中的第145位点的氨基酸残基均为半胱氨酸。
29、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
30、所述的(2)中的“多个”例如2个、3个、4个、5个或6个，又例如2个或3个，还例如2个。
31、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
32、当所述的b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时，所述的b位点可为所述的抗体的轻链恒定区的第109、145、153和191位点中的一个或多个。
33、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
34、当所述的b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时，所述的b位点可为所述的抗体的轻链恒定区的第191位点。
35、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
36、在所述的替换前，所述的b位点的氨基酸残基为缬氨酸。
37、在某一方案中，所述的抗体中的某些参数可如下所述(本方案未描述的参数如上任一方案所述)：
38、当所述的b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸时(包括但不限于“a位点和b位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸”的情形，全文同此)，所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其包括重链和轻链，其重链恒定区为人源γ1链，其轻链恒定区为野生型人源κ链，其特征在于，所述的抗体的重链恒定区的第114位氨基酸残基替换为半胱氨酸；
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的重链的数目为两条；
3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，采用所述的抗体制得的抗体药物定点偶联物的DAR为1.8～2.0，所述的DAR通过HPLC-HIC或LC-MS测定；
4.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，在所述的替换前，所述的人源κ链为如序列表SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的人源κ链。
5.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，在所述的替换前，所述的抗体的重链为如序列表SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链；
6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的重链恒定区的第114位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸；在所述的替换前，所述的抗体的重链为如序列表SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链，所述的抗体的轻链为如序列表SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的轻链。
7.一种核酸
8.一种重组表达载体，其包含如权利要求7所述的核酸。
9.一种重组表达转化体，其包含如权利要求8所述的重组表达载体。
10.一种细胞或细胞系，其包含如权利要求8所述的重组表达载体。
11.一种如权利要求1～6中任一项所述的抗体的制备方法，其包括如下步骤：培养如权利要求9所述的重组表达转化体，或如权利要求10所述的细胞或细胞系，获得抗体即可。
12.一种如权利要求1～6中任一项所述的抗体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为鳞状/腺瘤性肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、浸润性子宫内膜腺癌、卵巢癌、鳞状膀胱癌、绒毛膜癌、支气管癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌或精囊癌。
13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为浸润性乳腺癌、浸润性胰腺癌或鳞状宫颈癌。
14.一种药物组合物，其包括如权利要求1～6中任一项所述的抗体和药用辅料。
15.一种如权利要求1～6中任一项所述的抗体在制备检测试剂中的应用，所述检测试剂用于检测过表达人TPBG的细胞，其包括如下的步骤：将如权利要求1～6中任一项所述的抗体与待测样品混合即可。
16.一种如权利要求1～6中任一项所述的抗体在制备抗体药物偶联物中的应用。
17.一种抗体药物偶联物Ab-(L-D)n；
18.如权利要求17所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述的连接子为马来酰亚胺基己酰、马来酰亚胺基己酰-L-缬氨酸-L-瓜氨酸对氨基苄醇或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯；
19.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其特征在于，其为下述任一抗体药物偶联物：
20.一种如权利要求17～19中任一项所述的抗体药物偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为鳞状/腺瘤性肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、浸润性子宫内膜腺癌、卵巢癌、鳞状膀胱癌、绒毛膜癌、支气管癌、乳腺癌、子宫颈癌、胰腺癌或精囊癌。
21.如权利要求20所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为浸润性乳腺癌、浸润性胰腺癌或鳞状宫颈癌。
22.一种药物组合物，其包括如权利要求17～19中任一项所述的抗体药物偶联物和药用辅料。
...【技术特征摘要】
1.一种抗体，其包括重链和轻链，其重链恒定区为人源γ1链，其轻链恒定区为野生型人源κ链，其特征在于，所述的抗体的重链恒定区的第114位氨基酸残基替换为半胱氨酸；
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的重链的数目为两条；
3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，采用所述的抗体制得的抗体药物定点偶联物的dar为1.8～2.0，所述的dar通过hplc-hic或lc-ms测定；
4.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，在所述的替换前，所述的人源κ链为如序列表seq id no:6所示氨基酸序列的人源κ链。
5.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，在所述的替换前，所述的抗体的重链为如序列表seq id no:1所示氨基酸序列的重链；
6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的重链恒定区的第114位点的氨基酸残基替换为半胱氨酸；在所述的替换前，所述的抗体的重链为如序列表seq id no:1所示氨基酸序列的重链，所述的抗体的轻链为如序列表seq id no:2所示氨基酸序列的轻链。
7.一种核酸，其编码如权利要求1～6中任一项所述的抗体。
8.一种重组表达载体，其包含如权利要求7所述的核酸。
9.一种重组表达转化体，其包含如权利要求8所述的重组表达载体。
10.一种细胞或细胞系，其包含如权利要求8所述的重组表达载体。
11.一种如权利要求1～6中任一项所述的抗体的制备方法，其包括如下步骤：培养如权利要求9所述的重组表达转化体，或如权利要求10所述的细胞或细胞系，获得抗体即可。
12.一种如权利要求1～6中任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢珍慧，刘礼乐，张莹，刘敬贤，盛其然，陈先涛，
申请(专利权)人：凯惠科技发展上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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