【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及til及其在制备杀伤肿瘤干细胞的药物中的应用。
技术介绍
1、目前肿瘤的治疗方法有手术治疗、放射治疗和化学治疗等。但当前的肿瘤治疗方法常常不能根治肿瘤。主要原因在于构成肿瘤的细胞中含有肿瘤干细胞。肿瘤干细胞具有干细胞的生物学特性，即自我更新、多潜能分化、和高耐受性(例如对化疗药物的高耐药性及对放射治疗的高耐辐射性)，部分肿瘤干细胞还驱动新肿瘤的形成。因此肿瘤干细胞对于肿瘤的生长、肿瘤产生耐受性、肿瘤复发和肿瘤转移等起到至关重要的作用。
2、现有技术中的方法虽然有以肿瘤干细胞为靶标进行治疗的方法，但是仍然存在肿瘤在放疗和化疗后耐药性、复发率和转移率高的问题，尚缺乏有效的方法。
3、申请号为cn201711427531.9的中国专利中公开了：grp78基因在提高肿瘤干细胞化疗敏感性药物中的应用，以及以grp78基因为作用靶点抑制剂的筛选方法。抑制剂的作用靶点为grp78基因，所述grp78基因与肿瘤干细胞耐药特性相关联，抑制剂抑制肿瘤干细胞中grp78基因的表达，从而使肿瘤干细胞中化疗药物含量升高，提高肿瘤干细胞化疗敏感性。有助于提高肿瘤干细胞对化疗药物的敏感性，增强化疗药物疗效，提高肿瘤患者的生存期和化疗应答率，在肿瘤干细胞化疗敏感性药物中具有潜在的、良好的应用前景。但其是通过间接作用提高肿瘤干细胞药物敏感性，并非对肿瘤干细胞的直接杀伤作用。
4、申请号为cn201610064664.3的中国专利中采用具有定向靶向的纳米脂质体负载肿瘤干细胞抗原制备抗原特异性t
5、til(tumor infiltrating lymphocytes，肿瘤浸润淋巴细胞)能够浸润到实体瘤组织，并对肿瘤细胞有杀伤作用，其具有趋化性好，对实体瘤的渗透性好的特点。til可以多靶点靶向肿瘤组织，肿瘤特异性更强，且til是人体本身存在的t细胞，没有免疫原性，毒性小，无副作用。但其对于肿瘤干细胞的作用尚未公开，其对于肿瘤干细胞的杀伤作用也尚未有文献公开。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了til及其在制备杀伤肿瘤干细胞的药物中的应用。
2、术语：
3、本专利技术所述的“til”即肿瘤浸润性淋巴细胞，是指原本获得时是白细胞但其离开受试者的血流且迁移至肿瘤中的细胞群体。til包括但不限于cd8+细胞毒性t细胞(淋巴细胞)、th1和th17 cd4+t细胞、自然杀伤细胞、树突细胞和m1巨噬细胞。til包括原代til和继代til。“原代til”是如本文概述的获自患者组织样品的细胞(有时称为“新鲜获得”或“新鲜分离”)，而“继代til”是任何经本文所述的扩增或增生的til细胞，包括但不限于本体til(bulk til)和经扩增的til(“rep til”或“rep后til”)。til细胞可包括遗传修饰的til。
4、本专利技术所述的“pbmc”即外周血单核细胞，是指具有圆形细胞核的外周血细胞，包括淋巴细胞(t细胞、b细胞、nk细胞)和单核细胞。当用作抗原呈递细胞(pbmc是抗原呈递细胞)时，外周血单核细胞是经照射的异体外周血单核细胞。
5、本专利技术所述的“抗人cd3单克隆抗体”是指针对成熟t细胞的t细胞抗原受体中的抗人cd3单克隆受体的抗体或其变体，例如单克隆抗体，并且包括人、人源化、嵌合或鼠抗体。
6、本专利技术所述的“il-2”即白细胞介素2，是趋化因子家族的一种细胞因子。多细胞来源，其中主要由活化t细胞产生，具有多向性作用，主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化；il-2对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的t细胞增殖。
7、本专利技术所述的“肿瘤干细胞”是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞，对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。肿瘤干细胞具有启动和维持癌繁殖的能力，符合最终形成转移所必需的条件。与普通肿瘤细胞不同的是，肿瘤干细胞在播散性瘤细胞中的比例比原发灶多，能够推断肿瘤干细胞在癌细胞转移中起到更重要的作用。
8、本专利技术中所述的“mf”即manic fringe，为β-1,3-n-乙酰葡糖胺基转移酶，mf蛋白即mf的全长氨基酸序列。
9、本专利技术中，所述的“截短体”指从一段序列上截取到的序列，具体到本专利技术为mf的全长氨基酸序列截取的序列，更具体地，可以是蛋白序列，也可以是多肽序列。
10、本专利技术中，所述的“突变序列”指序列中的单元发生一个或多个替换，具体到本专利技术中，指mf的全长序列中存在一个或多个氨基酸突变。更具体的，所述的突变序列与mf的全长序列保持60％以上的一致性、65％以上的一致性、70％以上的一致性、75％以上的一致性、80％以上的一致性、85％以上的一致性、90％以上的一致性、92％以上的一致性、95％以上的一致性、97％以上的一致性、98％以上的一致性或99％以上的一致性。
11、本专利技术中，所述的“修饰序列”指蛋白修饰序列，即经过修饰的蛋白序列，所述的修饰类型有多种，包括常见的无机和有机小分子修饰，如磷酸化、糖基化、脂酰化等，也有用小肽进行修饰的，例如泛素化(ubiquitination)、苏木化(sumoylation)、nedd化(neddylation)等。
12、本专利技术中，所述的“施用”指在方法中某一步骤与该成分相关，并不仅限于添加此成分，还包括通过其他手段使该成分得以施用的方法，如刺激表达等，特别是针对蛋白的施用。
13、本专利技术中，所述的“mf相关基因”指与mf表达相关的基因，并不限于表达mf全蛋白的基因序列，也包括表达mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列的基因序列，能够达到添加培养体系中mf蛋白或mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列的目的的基因均属于本专利技术所述的mf相关基因。
14、本专利技术中，所述的“刺激mf蛋白高表达”表示使培养体系中添加mf蛋白的方法，其形式可以是多种多样的，可以是一种，也可以是多种形式联合，可以是现有已公开的方法，也可以是现有技术中尚未公开的凡能添加培养体系中mf蛋白的方法，只要达到体系中mf蛋白或mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列中的一种或多种添加，从而提高til杀伤能力的方法，均在本专利技术保护的范围内。
15、本专利技术中，所述的“癌组织”一般指恶性肿瘤组织。
16、本专利技术中，所述的“癌旁组织”距病灶2cm的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.TIL在制备杀伤肿瘤干细胞的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的TIL通过在培养过程中添加MF蛋白进行培养；所述的添加MF蛋白为直接添加MF蛋白或刺激MF蛋白高表达。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的TIL培养过程中添加MF蛋白或MF蛋白截短体、MF蛋白突变序列、MF蛋白修饰序列中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的MF蛋白或MF蛋白截短体、MF蛋白突变序列、MF蛋白修饰序列添加量为0.01％-0.1％w/v。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的MF蛋白或MF蛋白截短体、MF蛋白突变序列、MF蛋白修饰序列添加量为0.05％-0.1％w/v。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的刺激MF蛋白高表达通过MF相关基因、蛋白或者刺激因子实现；所述的MF相关基因表达MF蛋白或MF蛋白截短体、MF蛋白突变序列、MF蛋白修饰序列中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的刺激MF蛋白高表达为构建过表达
8.一种TIL的培养方法，其特征在于，在培养过程中添加MF蛋白；所述的添加MF蛋白为直接添加MF蛋白或使MF蛋白高表达。
9.一种TIL群，其特征在于，通过权利要求8所述的培养方法培养得到。
10.一种杀伤肿瘤干细胞的方法，其特征在于，包括施用权利要求8所述的培养方法培养的TIL。
...【技术特征摘要】
1.til在制备杀伤肿瘤干细胞的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的til通过在培养过程中添加mf蛋白进行培养；所述的添加mf蛋白为直接添加mf蛋白或刺激mf蛋白高表达。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的til培养过程中添加mf蛋白或mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的mf蛋白或mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列添加量为0.01％-0.1％w/v。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的mf蛋白或mf蛋白截短体、mf蛋白突变序列、mf蛋白修饰序列添加量为0.05％-0.1％...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴延恒，顾文艺，
申请(专利权)人：广州智瓴生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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