【技术实现步骤摘要】
本技术属于微流控芯片，涉及流式细胞术，具体为一种用于细胞绝对计数的微流控芯片。
技术介绍
1、绝对计数是按实际检测结果计数；相对计数是通过实际检测结果与理论值按百分比做的结果。
2、现今，细胞计数被广泛应用于生物、医学、教学、科学研究等领域，是现代科学实验室中常用的实验方法之一；现有细胞计数方式有显微计数、图像细胞计数、电导率法计数、流式细胞仪计数等，其中流式细胞术因为其能够快速、准确地完成多种细胞的分类计数，已成为检测细胞亚群数量的标准手段，获得广泛使用。
3、流式细胞术首先通过样本预处理对目标细胞进行荧光标记，然后使用聚焦技术使细胞依次通过检测区，并使用激光诱导荧光检测技术检测每一个细胞的散射光和特异性荧光标记，从而获知细胞的结构信息和携带的抗原信息并用于细胞分类计数。
4、利用流式细胞仪测定细胞绝对值的现行方法主要有两种：定量荧光微球法和直接体积法。
5、定量荧光微球法是在细胞样本中加入绝对计数微球作为内参，通过流式细胞仪识别检测流动中的单个细胞和计数微球，并基于两者与抗体结合效率一致原则，根据已知的微球数量来计算细胞浓度。该方法在临床诊断领域得到较广泛的应用，但作为一种间接计数的方法，在体系中引入了微球这一变量，不仅检测成本显著提高，而且在测量中引入新的不确定度来源，例如当微球保存不当、或未充分混匀时会出现细胞团聚现象，影响计数精度，并最后影响细胞计数结果。
6、直接体积法以“微流控芯片”作为流道，使荧光抗体标记的细胞样本以单细胞状态逐个经过芯片中央的检测区并被
7、现有的如专利202110844306.5中提出了一种单细胞计数的方法及其系统，主要由液流系统、微流控芯片、荧光检测装置、数据处理装置以及数据显示装置。将混匀后的细胞样本注入微流控芯片，细胞样本在微流控芯片中流经流道中央处液流宽度和高度显著缩小，荧光检测装置检测通过流道中央处(在流道中央压缩区的中部设置检测窗口)的细胞样本；荧光检测装置采用光电倍增管对荧光显微镜获取的荧光信号进行光电转换，再通过电路采集卡进行数据采集，识别特定的荧光信号，并定量记录细胞样本产生的荧光粒子数量；数据处理装置则根据检测的参数计算得出单细胞荧光信号的检测数据；最后样本从微流控芯片输出口流出，经引流导管进入废液存储池。
8、上述采用微米级的微流控芯片作为样本流道，依托微流控芯片精细的加工工艺，直接通过缩小中央流道宽高的方式，与传统流式细胞仪的液流系统相比，液路更简单，更稳定，能够更精确地的进行单体细胞计数，但是现有的微流控芯片仅设置一个样本流入口，通过注射泵将标记好的已知体积的细胞样本从样本流入口注入微流控芯片，注射泵本身存在进样误差，包含注射泵自身零点的漂变、使用过程的机械磨损、进样口遗留的无效液体等，以及周边环境造成的影响如环境温度、压力、可能存在的故障泄露现象等都会引入偏差，造成细胞计数误差，而且芯片流道内会残留细胞样本溶液造成损耗，因此需要检测完成后，将所有废液泵出芯片后进行收集，并利用流量计检测废液进行误差修正，进而得到细胞样本的浓度，造成实验操作程序繁琐，不便于对待检测的细胞样本体积进行直观测量，且泵出废液时，容易造成实验室环境污染。
技术实现思路
1、本技术的目的在于提供一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，以解决上述
技术介绍
中提出的现有微流控芯片不能对待检测的细胞样本体积进行直观测量的问题。
2、为实现上述目的，本技术提供如下技术方案：
3、一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，包括芯片本体，所述芯片本体上设置反应流道、光学检测流道和废液流道和多个定量进样流道，所述定量进样流道均与反应流道连通，所述定量进样流道设置延时密封装置；所述反应流道与光学检测流道和废液流道依次连通，所述反应流道的两端设置混匀驱动口，所述混匀驱动口与驱动装置连接；所述废液流道上设置一个或者多个计数刻度。
4、进一步地，当废液流道上设置多个计数刻度时，所述计数刻度包括零刻度、第一刻度……至第n刻度，所述零刻度、第一刻度……至第n刻度沿废液流道依次设置，所述零刻度位于废液流道入口处，所述相邻的计数刻度之间距离相等。
5、进一步地，所述废液流道的横截面为矩形或者正方形。
6、进一步地，所述废液流道的横截面为正方形。
7、进一步地，所述废液流道的横截面积为(1*1)mm2～(1.5*1.5)mm2，所述刻度标识之间的距离为2mm。
8、进一步地，所述废液流道的容积为300～500μl。
9、进一步地，所述废液流道的内壁设置底色涂层。
10、与现有技术相比，本技术的有益效果在于：
11、1、本技术采用直接体积法，提供一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，包括芯片本体，芯片本体上设置包括反应流道、光学检测流道和废液流道和多个定量进样流道，定量进样流道均与反应流道连通，定量进样流道设置延时密封装置，多个定量进样流道分别对应需要参与混合或者反应的多种溶液，延时密封装置在微流控芯片内注入定量的溶液后将定量进样流道封闭。
12、反应流道与光学检测流道和废液流道依次连通，反应流道两端设置混匀驱动口，混匀驱动口与驱动装置连接；具体的，混匀驱动口分别为第一混合驱动口和第二混匀驱动口，第一混合驱动口和第二混匀驱动口均与驱动泵连接，驱动泵使得进入反应流道中的液体进行振荡混合，从定量进样流道中进入微流控芯片的多种溶液在反应流道内进行混合和反应，之后进入光学检测流道进行荧光检测，得知样本溶液中各类标记细胞的占比和粒子总数。
13、检测后的液体被废液流道上的驱动泵驱动进入废液流道，废液流道上设置多个计数刻度，通过进入废液流道的反应溶液的体积的测量，得知待检测细胞样本体积，从而计算细胞的绝对计数。
14、因为本技术芯片直接计算反应溶液的体积，相比直接用注射泵将混合好的细胞样本溶液注入微流控芯片，之后进行测量的方式，本技术芯片计算的反应溶液更加直观，而且不需要将反应后的废液从微流控芯片中泵出，避免造成环境污染。
15、2、进一步地，在微流控检测芯片废液流道处添加计数刻度，读取废液流道内的细胞样本液面的最终刻度，直接获取进入废液流道的细胞样本体积，即可便利本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：包括芯片本体(1)，所述芯片本体(1)上设置反应流道、光学检测流道(2)和废液流道(3)和多个定量进样流道，所述定量进样流道均与反应流道连通，所述定量进样流道设置延时密封装置；所述反应流道与光学检测流道(2)和废液流道(3)依次连通，所述反应流道的两端设置混匀驱动口，所述混匀驱动口与驱动装置连接；所述废液流道(3)上设置一个或者多个计数刻度。
2.根据权利要求1所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：当废液流道(3)上设置多个计数刻度时，所述计数刻度包括零刻度、第一刻度……至第n刻度，所述零刻度、第一刻度……至第n刻度沿废液流道依次设置，所述零刻度位于废液流道入口处，相邻的所述计数刻度之间距离相等。
3.根据权利要求2所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：所述废液流道(3)的横截面为矩形或者正方形。
4.根据权利要求3所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：所述废液流道(3)的横截面为正方形。
5.根据权利要求4所述的一种用于细胞绝对计数的微流控
6.根据权利要求5所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：所述废液流道(3)的容积为300～500μL。
7.根据权利要求1所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：所述废液流道(3)的内壁设置底色涂层。
...【技术特征摘要】
1.一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：包括芯片本体(1)，所述芯片本体(1)上设置反应流道、光学检测流道(2)和废液流道(3)和多个定量进样流道，所述定量进样流道均与反应流道连通，所述定量进样流道设置延时密封装置；所述反应流道与光学检测流道(2)和废液流道(3)依次连通，所述反应流道的两端设置混匀驱动口，所述混匀驱动口与驱动装置连接；所述废液流道(3)上设置一个或者多个计数刻度。
2.根据权利要求1所述的一种用于细胞绝对计数的微流控芯片，其特征在于：当废液流道(3)上设置多个计数刻度时，所述计数刻度包括零刻度、第一刻度……至第n刻度，所述零刻度、第一刻度……至第n刻度沿废液流道依次设置，所述零刻度位于废液流道入口处，相邻的所述计数刻度之间距离相等。
【专利技术属性】
技术研发人员：郝梦真，邱元芳，常洪龙，苑曦辰，尹旭，姜乃乾，张媛婷，张学泽，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：新型
国别省市：
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