【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，特别涉及一种高活性沙氏门菌裂解酶、基因表达及应用。
技术介绍
1、沙门氏菌(salmonella pullorum)属于肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，是沙门氏菌病的病原体。沙门氏菌属中有人类致病菌、兽类致病菌以及人兽致病菌。感染沙门氏菌后，一般会出现胃肠炎症、发热、腹泻以及败血症等临床症状。动物在感染了沙门氏菌后，繁殖力会受到影响，甚至会病状加重，死亡率升高。
2、目前，治疗沙门氏菌病的方法主要使用抗生素，但是由于抗生素的不合理使用，引起了细菌多重耐药性、药物残留、食品安全、环境菌群不平衡等问题，严重威胁人类及动物的健康。
3、因此，在抗生素耐药的现实情况和政策要求的因素下，亟需寻找治疗沙门氏菌病的有效方法，以缓解甚至解决抗生素滥用导致的问题。
4、近些年，多肽类抑菌物质逐渐成为研究的重点，因为其绿色安全的特性也被广泛使用，其中噬菌体裂解酶也属于多肽类的抑菌物质。
5、噬菌体以细菌为宿主进行复制和繁殖，在宿主菌内通过合成一类蛋白水解酶来裂解细菌细胞壁释放成熟颗粒。这类水解酶叫做噬菌体裂解酶，又称裂解酶、内溶素、溶胞壁酶，裂解酶攻击的分子靶位在菌种或菌属层面是高度保守的肽聚糖结构，这种结构对细菌的生存至关重要。在噬菌体和细菌宿主几十亿年的共同进化过程中，裂解酶也同样进化并可攻击细菌不易改变的分子靶位，那些不攻击这些关键靶位的噬菌体会被自然选择淘汰。因此，细菌对裂解酶产生耐药的情况极其罕见。天然噬菌体裂解酶能破坏细菌生物被膜，而且具备绿色安全、不易产生耐药等优势
6、因此，提供一种噬菌体裂解酶及其在治疗沙门氏菌病的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、针对上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种沙门氏菌噬菌体裂解酶及其基因、基因重组表达载体与应用。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供一种沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因，所述沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、atgtcaaaccgaaacatcagtgacaacgggttacacttcaccgccgcgttcgaggggttccgaggaaccgcgtacaaggcaacgaagaacgagaagtaccttactattggttatggtcactatggtgccgatgtgaaagaaggtcagaagattaccgaaggccagggtcttctgctgctgcacaaggatatggctaaggccgtagctgcggtagacaccgttgcgcatccgtctctaaatcagtcacagttcgacgccgtgtgtgaccttgtgtataacgctggtgcaggtgtgattgccgcttctaccggtacaggtcaggcgctgcgcaaaggcgatgcatctacactgcgtaataagttaactcagttccattatcagaacggcaaatcactcctcggattacgtcgtcgtgccgccggtcgtgttgcgctgttcgatggcatgctgtggcaacaggccgaagctatcggccgtggtgcaaagtag
5、进一步的，扩增所述基因的引物如下：
6、lys-20059-f：cggaattctcaaaccgaaacatcagtg，seq id no.3；lys-20059-r：cccaagcttctttgcaccacggccgatagct，seq id no.4。
7、第二方面，本申请提供了一种重组表达载体，其包括上述的沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因。
8、第三方面，本申请提供了一种宿主细胞，其包括上述的重组表达载体。
9、第四方面，本专利技术还提供了一种沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059，所述噬菌体裂解酶lys20059由第一方面所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因编码得到，所述沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的氨基酸序列如seq id no.2所示。
10、msnrnisdnglhftaafegfrgtaykatknekyltigyghygadvkegqkitegqgllllhkdmakavaavdtvahpslnqsqfdavcdlvynagagviaastgtgqalrkgdastlrnkltqfhyqngksllglrrraagrvalfdgmlwqqaeaigrgak
11、第五方面，基于同一个专利技术创造，本专利技术还提供了如第四方面所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶在在抑制不同血清型沙氏门菌中的应用、在生物制剂中的应用。
12、本专利技术具有如下优点：
13、1、本专利技术提供了一种沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的氨基酸序列如seq idno.2所示及其编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。通过构建重组载体并在基因工程菌株大肠杆菌bl21(de3)中表达，纯化得到的噬菌体裂解酶可以很好的对沙门氏菌感染有良好的抑制作用，具有潜在的临床应用价值。
14、2、本专利技术的沙门氏菌噬菌体裂解酶蛋白对42株沙门氏菌具有抑菌圈，对沙门氏菌的裂解率为84％，显示了其对沙门氏菌很好的裂解作用，且对多种沙门氏菌血清型具有裂解作用，其裂解谱较宽。
15、3、本专利技术的沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059对沙门氏菌具有抑制生长的作用，并且高浓度作用显著。用于工业生产，以降低成本为目标，可以在较低量噬菌体和裂解酶的混合制剂的作用下，对沙门氏菌的抑菌作用具有很好的提升作用。
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1.一种沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的编码基因，其特征在于，所述沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的编码基因，其特征在于，扩增所述基因的上下游引物分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，其包括权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的编码基因。
4.一种宿主细胞，其特征在于，其包括权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059，其特征在于，所述噬菌体裂解酶Lys20059由权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的编码基因编码得到，所述沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
6.如权利要求5所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059在抑制不同血清型沙氏门菌中的应用。
7.如权利要求5所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059在生物制剂中的
8.一种生物制剂，其特征在于，所述生物制剂的活性成分包括权利要求5所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶Lys20059。
...【技术特征摘要】
1.一种沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因，其特征在于，所述沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因，其特征在于，扩增所述基因的上下游引物分别如seq id no.3、seq id no.4所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，其包括权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶lys20059的编码基因。
4.一种宿主细胞，其特征在于，其包括权利要求3所述的重组表达载体。
5.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，崔翠，腾雨晴，刘雨，
申请(专利权)人：瑞科盟青岛生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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