【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鱼类基因组领域，尤其涉及一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记及其引物对。
技术介绍
1、性别决定是两性生殖生物确定性别发育方向的生物过程，是生命繁衍的关键环节，直接关系着物种的发生、续存、适应与进化。因而，性别决定机制一直是生命科学研究的热点。鱼类在脊椎动物进化系统中，处于承前启后的关键位置，又因其分布范围广，物种数量丰富，在性别决定机制上也多种多样，所以是研究性别决定机制的重要对象。许多鱼类在生长速率上存在性别差异，因此，针对这些鱼类物种开发可以准确鉴定其遗传性别的分子标记，进行这些鱼类的单性育种与遗传学研究，对于提高鱼产量、增加水产养殖收益以及促进相关的研究有着重要的意义。
2、日本白姑鱼(argyrosomus japonicus)隶属鲈形目，石首鱼科，白姑鱼属，因其具有适应性强、耐氧性低、生长速度快的特点，其鱼鳔是制作鱼胶的重要来源，其在中国海水养殖鱼类中具有较为重要的地位。日本白姑鱼遗传选育体系有准确鉴定活体雌雄种鱼的需求；此外，日本白姑鱼雌雄生长速度有差异，养殖产业中有培育全雄或全雌苗种的需求，开发其单性育种与单性养殖技术具有重要的产业意义。单性苗种还能有效防止种苗企业的优质种质外流。日本白姑鱼在性腺发育成熟之前，其雌鱼和雄鱼却很难从外部形态上加以区分，因此，开发一种可以鉴别其遗传性别的分子标记用于日本白姑鱼的遗传选育和性别控制育种具有极大的生产应用价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种能简便、快速、稳定地鉴别区分日本白姑鱼遗传
2、为实现上述目的，本专利技术提供一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记，其特征在于，其分子标记的序列如seq id no:1所示,所述分子标记存在于日本白姑鱼遗传性别x染色体上，在y染色体上缺失。
3、本专利技术还提供一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如seq id no:2和3所示。
4、本专利技术还提供一种采用所述引物对检测所述分子标记的方法，其特征在于，通过所述引物对对待测dna进行pcr扩增。
5、本专利技术还提供一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的方法，其特征在于，采用所述引物对进行pcr检测，当pcr扩增片段有两条大小不同的特异条带364bp和346bp时，则判断待测日本白姑鱼的遗传性别为雄性；当pcr扩增片段只有一条特异条带364bp时，则判断待测日本白姑鱼的遗传性别为雌性。
6、进一步，所述pcr检测的反应体系为，以反应总体积25μl计算，12.5μl 2×taqmaster mix，1μl 30ng/μl模板dna，1μl 10μm正反向引物，最后加双蒸水补齐。
7、进一步，所述pcr检测的扩增条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，30～35个循环后接着72℃延伸5min。
8、本专利技术的差异化序列即分子标记序列为seq id no:1，所示序列位于图1中。具体的，seq id no:1位于图1中的254bp-271bp处。
9、atgatcacagctttacaa seq id no:1。
10、对差异性序列即分子标记序列进行鉴定，其鉴定序列如下：
11、mf-share(雌雄共享)引物1可区分seq id no:1序列：
12、mfs1-f:5'tatgtctggaggtcactg 3' seq id no:2；
13、mfs1-r:5'gcttatttggaggattgt 3' seq id no:3。
14、本专利技术通过对37尾雌性和雄性日本白姑鱼基因组dna的序列进行比较分析，找到雌鱼与雄鱼之间存在稳定差异的dna区段，利用该区段的雌雄差异设计了1对特异引物并进行pcr扩增，用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，从而开发出1个可以准确鉴定日本白姑鱼遗传性别的分子标记。通过在不同的群体进行应用验证，证明所开发的分子标记稳定性好，鉴定准确性高。申请人开发的1个分子标记，可以方便且准确地鉴定出日本白姑鱼的胚胎、幼体及成鱼的遗传性别，为日本白姑鱼单性别苗种的培育提供了必要的分子工具，同时也为进行性别决定机制研究奠定了基础。
15、本专利技术的有益效果是：可以简便、快速、稳定地鉴别出日本白姑鱼各个群体中不同个体的遗传性别，包括日本白姑鱼的胚胎、幼体和成体。将该dna分子标记应用于生产实践可以有效地识别与鉴定各种发育阶段日本白姑鱼的遗传性别，有助于日本白姑鱼雌、雄鱼的识别，从而为顺利开发出日本白姑鱼的单性育种技术。这将进一步提高养殖效益，增加日本白姑鱼养殖的经济收益。本专利技术开发的分子标记也将有益于日本白姑鱼性别决定机制等相关的科学研究的开展。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记，其特征在于，其分子标记的序列如SEQID NO:1所示,所述分子标记存在于日本白姑鱼遗传性别X染色体上，在Y染色体上缺失。
2.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如SEQ ID NO:2和3所示。
3.一种采用权利要求2所述引物对检测权利要求1分子标记的方法，其特征在于，通过权利要求2的引物对对待测DNA进行PCR扩增。
4.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的方法，其特征在于，采用权利要求2的引物对进行PCR检测，当PCR扩增片段有两条大小不同的特异条带364bp和346bp时，则判断待测日本白姑鱼的遗传性别为雄性；当PCR扩增片段只有一条特异条带364bp时，则判断待测日本白姑鱼的遗传性别为雌性。
5.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述PCR检测的反应体系为，以反应总体积25μL计算，12.5μL 2×Taq Master Mix，1μL 30ng/μl模板DNA，1μL 10μM正反向引物，最后加双蒸水补齐。
6.如权利要求4所述方法，其
...【技术特征摘要】
1.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记，其特征在于，其分子标记的序列如seqid no:1所示,所述分子标记存在于日本白姑鱼遗传性别x染色体上，在y染色体上缺失。
2.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如seq id no:2和3所示。
3.一种采用权利要求2所述引物对检测权利要求1分子标记的方法，其特征在于，通过权利要求2的引物对对待测dna进行pcr扩增。
4.一种鉴别日本白姑鱼遗传性别的方法，其特征在于，采用权利要求2的引物对进行pcr检测，当pcr扩增片段有两条大小不同的特异条带364...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。