【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种黄酮类化合物的制备方法，具体涉及一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法。
技术介绍
1、槲皮素及其衍生物为代表的黄酮类化合物是很多中草药的主要活性成分，普遍具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等多种活性(lancet，2000，356：233-241；广东微量元素科学，2014，21(11)：44—57)。如芦丁是中药槐米的主要活性成分，含量最高可达28％，广泛被用于心血管药物和保健食品。因此，槲皮素衍生物的研究始终是中药、食品和化妆品领域的热点之一。然而槲皮素及衍生物在自然界以芦丁、槲皮素和异槲皮苷等形式为主，且由于它们很差的溶解度(几乎不溶于水)，限制了其直接应用，且较低的生物利用度，难以提高实际的功效。为此开发水溶性的槲皮素衍生物，可极大方便其应用场景，并提高其生物利用度增强其功效。
2、
3、近几年，一种多葡萄糖基化的槲皮素衍生物的混合物(enzymatically modifiedisoquercitrin，emiq，式i，其中n＝1～7)进入了市场，emiq不仅着色效果好、天然无毒，而且水溶性好，并具有广泛的生物活性，在日本已经被接受为食品添加剂(jetro,specifications and standards for foods,food additives,etc.under the foodsanitation act,japan external trade organization,2011,pp.111–155)，已获得fda的批准，可用于
4、迄今为止，emiq的制备报道了两条路线：1、以异槲皮苷为原料，通过糖基转移酶一步制备emiq；2、以芦丁为原料，2步酶促反应制备emiq。
5、文献(enzyme microb technol,2019,120：84-90)披露了一种以异槲皮苷为原料的制备方法，通过淀粉蔗糖酶-蔗糖/tris-hcl缓冲溶液、或α-淀粉酶-淀粉/柠檬酸磷酸盐缓冲溶液、环糊精葡聚糖转移酶-淀粉/柠檬酸磷酸盐缓冲溶液制备emiq。但是存在诸多问题，导致难以产业化：1、异槲皮苷价格昂贵，并未提出有效的解决方案；2、异槲皮苷不溶于水，导致只能在很稀的浓度下进行(1.0毫克/毫升)，极大限制了工业化；3、大量的缓冲溶液使用，导致杂质含量很高，而emiq高度水溶，产品难以纯化。
6、为高效制备异槲皮苷，文献(食品工业科技,2018,39，107-116)报道了一种使用芦丁为原料，鼠李糖苷酶/hoac-naoac缓冲液(10mmol/l)进行反应，柱层析纯化的方法。虽然可以在125毫克/毫升浓度下制备得到异槲皮苷，但是缓冲溶液的盐分无法去除，只能采取柱层析的方法，成本和效率无法满足工业化的要求。专利(公开号cn111500661a)公布了另一种异槲皮苷的制备方法，以芦丁为原料，鼠李糖苷酶/氢键受体-氢键供体体系(浓度30～50％，des)进行反应制备，其中氢键受体优选为氯化胆碱，氢键优选为尿素。由于芦丁可以在这个体系中溶解，反应时间可以缩小到45分钟，芦丁底物浓度可达120克/升。由于氢键受体-氢键供体体系(浓度30～50％，des)使用量大、价格较高，回收的des需要使用大量磷酸二氢钾溶液(18-80％)进行双水相分液回收，操作繁琐，生产难度大，成本较高。
7、
8、专利(公开号cn 109438536a)公布了一种emiq的制备方法，以廉价的芦丁为原料，两步反应的制备路线。第一步，在磷酸氢二钠-柠檬酸钠为缓冲溶液，加入鼠李糖苷酶，制备异槲皮苷；第二步，在磷酸氢二钠-柠檬酸钠为缓冲溶液，加入糖基转移酶，制备emiq。同样存在诸多问题，几乎无法产业化：1、大量缓冲溶液的使用，而emiq高度水溶，产品难以纯化，且未提供制备合格产品的解决方案；2、更令人惊讶的是，合成emiq中，没有加入任何葡萄糖基供体，理论上不可能发生葡萄糖基的转移；3、由于芦丁不溶于水，导致反应非常难以进行，而在制备中间体异槲皮苷的过程中，也未见有效的解决方案。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是现有的制备emiq的技术中，存在成本过高，缓冲溶液作为溶剂使用时导致终产品杂质过高、提纯困难，不适合产业化应用等缺点，而提供一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法。本专利技术提供的一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法具有如下优点的一个或多个，产物易于纯化、收率高、纯度高、适合产业化生产和产物可在食品中应用等优点。
2、本专利技术提供了一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法，其包括以下步骤，在溶剂中，在酶存在下，如式ii所示的化合物和葡萄糖基供体发生如下式所示的反应，得到如式i所示的混合物，
3、
4、所述的溶剂为水和有机溶剂的混合溶剂。
5、所述的n优选为1～7。
6、所述的有机溶剂可为酯类溶剂和/或醇类溶剂。
7、所述的有机溶剂优选为酯类溶剂；所述的酯类溶剂可选自乙酸甲酯、甲酸乙酯和乙酸乙酯中的一种或多种；优选地，所述的酯类溶剂为乙酸乙酯。
8、所述的醇类溶剂可选自甲醇、乙醇和丁醇中的一种或多种；所述的丁醇优选为正丁醇；优选地，所述的醇类溶剂为乙醇，所述的乙醇优选为95％乙醇(乙醇和水混合溶液中乙醇的质量百分数为95％)。
9、在某一方案中，所述的混合溶剂为水和95％乙醇。
10、在某一方案中，所述的混合溶剂为水和乙酸乙酯。
11、所述的有机溶剂与所述的如式ii所示的化合物的质量比可为0.01:1～0.2:1，优选为0.01:1～0.09:1，例如：0.01:1～0.03:1、0.05:1～0.07:1或0.07:1～0.09:1。
12、所述的有机溶剂与所述的如式ii所示的化合物的质量比优选为0.05:1～0.09:1，例如：0.05:1～0.07:1或0.07:1～0.09:1。
13、所述的有机溶剂与所述的水的质量比可为1:500～1:6000，优选为1:1000～1:5500，例如1:1200～1:1300、1:1600～1:1700或1:4900～1:5100。
14、所述的水与所述的如式ii所示的化合物的体积质量比(ml/g)可本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤，在溶剂中，在酶存在下，如式II所示的化合物和葡萄糖基供体发生如下式所示的反应，得到如式I所示的混合物，
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种，
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种，
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其为以下方案中的一种，
5.如权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，其还包括以下的后处理步骤中的一个或多个，脱色、过滤、浓缩和干燥；
6.如权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，其还包括以下步骤，在水中，在酶和硼砂存在下，如式III所示的化合物发生如下式所示的反应，得到如式II所示的异槲皮苷，
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种，
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的异槲皮苷的制备步骤中的原料由以下物质组成，所述的水、所述的酶、所述的硼砂和所述的如式III所示的化合
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，其为以下方案中的一种，
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的异槲皮苷的制备步骤中，还包括如下的后处理步骤中的一个或多个，调pH值、抽滤、溶解、过滤、蒸干、重结晶和干燥；
11.一种异槲皮苷的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤，在水中，在酶和硼砂存在下，如式III所示的化合物发生如下式所示的反应，得到如式II所示的异槲皮苷，
...【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖基修饰的槲皮素衍生物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤，在溶剂中，在酶存在下，如式ii所示的化合物和葡萄糖基供体发生如下式所示的反应，得到如式i所示的混合物，
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种，
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种，
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其为以下方案中的一种，
5.如权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，其还包括以下的后处理步骤中的一个或多个，脱色、过滤、浓缩和干燥；
6.如权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，其还包括以下步骤，在水中，在酶和硼砂存在下，如式iii所示的化合物发生如下式所示的反应，得到如式ii所示的异...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨升平，白雪冬，赖志华，费维成，骆峰，
申请(专利权)人：上海辉文生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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