【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物医药领域，具体是涉及用于抑制cideb基因表达的sirna、药物及其应用。
技术介绍
1、当前全球健康问题的相当一部分来自于脂肪肝导致的疾病，例如肝硬化。脂质稳态的失调是导致肝硬化和代谢综合征(包括肥胖、糖尿病、心血管疾病和癌症)的发生和发展的重要因素。肝脏脂质平衡，包括脂质储存和极低密度脂蛋白的组装和分泌。游离脂肪酸通过脂肪生成作用被重塑和酯化为中性脂类，并储存在脂滴中。脂滴的储脂能力受其生长控制，可通过局部脂质合成或脂滴融合控制。脂滴是一种动态的亚细胞细胞器，由磷脂单层包膜、中性脂核和一系列特定的脂滴相关蛋白组成，通过协调脂合成、脂储存、脂分泌和脂解来维持脂类的动态平衡。细胞摄取的脂肪、胆固醇和神经酰胺通过内质网上的脂肪合成途径被重塑和酯化为中性脂质，并被隔离到脂滴核心。这些中性脂质包括三酰甘油、甾醇酯和酰化神经酰胺以及其他酯化脂质。研究表明，中性脂在细胞内的功能失调或过度储存与代谢疾病的发展密切相关，如肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病和动脉粥样硬化。
2、到目前为止，已经报道了一些与脂滴相关的蛋白质。其中cideb基因在人类肝脏中表达最高，是一种肝脏特异性蛋白，定位于内质网和脂滴，是脂肪细胞中脂质储存和脂质代谢的重要调节因子。cideb在脂滴-脂滴接触部位富含，介导从小脂滴到大脂滴的定向脂转移，控制非典型脂滴的融合和生长。ld的生长增强了脂肪的储存能力和细胞内的脂肪积累。然而，由于过度摄取脂肪，脂肪组织或肝脏中不受控制的脂滴生长(肥大)可能导致代谢性疾病的发展，如肥胖和脂肪肝疾病。在数十万
3、有研究表明cideb的突变可以防止脂肪在肝细胞中聚集，并且产生的脂滴更小，与肝病风险下降33％有关。针对保护性的遗传变异开发相关药物是一个较为常见的思路，此前，已有针对pcsk9的sirna药物inclisiran获fda批准上市。inclisiran作为长效降脂药，仅需每年皮下注射给药两次即可有效地降低血液循环中低密度脂蛋白的水平，达到降低血脂的效果。开发靶向cideb相关sirna药物的优势在于其保护效果的广泛性，不局限于某一种类型的肝病。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的目的是提供一种用于抑制cideb表达的sirna及其应用，其具有体外、体内试验效果好、非靶点活性弱的优势。
2、本专利技术的第一个方面，提供了一种用于降低人体细胞中诱导细胞死亡的dffa样效应因子b(cell death-inducing dffa-like effector b，cideb)表达的sirna，其包括正义链及反义链，所述正义链和所述反义链能够互补，其序列选自表1所示中的任意一组双链体或与其组成相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸序列，包括bbd-4102，bbd-4101和bbd-4005所示序列，其中bbd-4102，bbd-4101所示序列由bbd-4005经碱基优化而得。
3、在其中的一些实施例中，所述用于抑制cideb表达的sirna，包括正义链及反义链，其序列选自序列如下至少一对或其修饰序列:
4、a)bbd-4101,其正义链如seq id no.201所示，反义链如seq id no.202所示；
5、b)bbd-4102,其正义链如seq id no.203所示，反义链如seq id no.204所示；
6、c)bbd-4005，其正义链如seq id no.9所示，反义链如seq id no.10所示；
7、d)bbd-4012，其正义链如seq id no.23所示，反义链如seq id no.24所示；
8、e)bbd-4013，其正义链如seq id no.25所示，反义链如seq id no.26所示；
9、f)bbd-4015，其正义链如seq id no.29所示，反义链如seq id no.30所示；
10、g)bbd-4016，其正义链如seq id no.31所示，反义链如seq id no.32所示；
11、h)bbd-4018，其正义链如seq id no.35所示，反义链如seq id no.36所示；
12、i)bbd-4020，其正义链如seq id no.39所示，反义链如seq id no.40所示；
13、j)bbd-4021，其正义链如seq id no.41所示，反义链如seq id no.42所示；
14、k)bbd-4022，其正义链如seq id no.43所示，反义链如seq id no.44所示；
15、l)bbd-4023，其正义链如seq id no.45所示，反义链如seq id no.46所示；
16、m)bbd-4026，其正义链如seq id no.51所示，反义链如seq id no.52所示；
17、n)bbd-4027，其正义链如seq id no.53所示，反义链如seq id no.54所示；
18、o)bbd-4039，其正义链如seq id no.77所示，反义链如seq id no.78所示；
19、p)bbd-4040，其正义链如seq id no.79所示，反义链如seq id no.80所示；
20、q)bbd-4045，其正义链如seq id no.89所示，反义链如seq id no.90所示；
21、r)bbd-4052，其正义链如seq id no.103所示，反义链如seq id no.104所示；
22、s)bbd-4057，其正义链如seq id no.113所示，反义链如seq id no.114所示；
23、t)bbd-4061，其正义链如seq id no.121所示，反义链如seq id no.122所示；
24、u)bbd-4064，其正义链如seq id no.127所示，反义链如seq id no.128所示；
25、v)bbd-4066，其正义链如seq id no.131所示，反义链如seq id no.132所示；
26、w)bbd-4074，其正义链如seq id no.147所示，反义链如seq id no.148所示；
27、x)bbd-4078，其正义链如seq id no.155所示，反义链如seq id no.156所示；
28、y)bbd-4097，其正义链如seq id no.193所示，反义链如seq id no.194所示；
29、z)bbd-4100，其正义链如seq id 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于抑制细胞中诱导细胞死亡的DFFA样效应因子B(Cell death-inducingDFFA-like effector b，CIDEB)表达的siRNA，其包括正义链及反义链，所述正义链和所述反义链能够互补，其序列选自表1所示中的任意一组双链体或与其组成相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸序列，包括BBD-4102，BBD-4101和BBD-4005所示序列。
2.根据权利要求1所述的siRNA，其中，所述siRNA选自如下至少一对或其修饰序列:
3.根据权利要求2所述的siRNA，其中，所述siRNA选自BBD-4101、BBD-4102或其经修饰序列。
4.根据权利要求1-3所述的siRNA，其中，所述正义链包括不多于3、2、1或0个未修饰的核苷酸，所述正义链中的修饰核苷酸包含分别选自2'-O-甲基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、末端反向无碱基残基、锁核酸，所述正义链在5'-末端含有1，或2，或3个硫代磷酸酯键；
5.根据权利要求4所述的siRNA，其中，所述5’-(E)-乙烯基膦酸酯核
6.权利要求3所述的siRNA，其中，所述尿苷-5’-(E)-乙烯基膦酸酯及其类似物为2’-S-甲基尿苷-5’-(E)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯或2’-O-甲基尿苷-5’-(E)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯。
7.权利要求4所述的siRNA，其中，所述异甘油核苷酸修饰如式(I)所示：
8.权利要求7所述的siRNA，其中，式(I)的修饰核苷酸为如下中的至少一种：
9.根据权利要求1-8任一所述的siRNA，其中，siRNA正义链为21个核苷酸，反义链为23个核苷酸时，
10.根据权利要求9所述的siRNA，其中，所述siRNA是表12中的经修饰的双链体，优选地，所述siRNA是表12中裸序列为所述BBD-4101或BBD-4102的经过修饰的双链体。
11.根据权利要求9所述的siRNA，其中，所述siRNA是BBD-4101.11、BBD-4102.11、BBD-4101.21、BBD-4101.24、BBD-4101.31、BBD-4101.41、BBD-4101.33、BBD-4101.43、BBD-4101.34、BBD-4101.44、BBD-4101.45、BBD-4101.46、BBD-4101.48、BBD-4101.49、BBD-4101.410、BBD-4102.21、BBD-4102.24、BBD-4102.25、BBD-4102.26、BBD-4102.41、BBD-4102.42、BBD-4102.43、BBD-4102.44、BBD-4102.45、BBD-4102.46、BBD-4102.47、BBD-4102.48。
12.根据权利要求1-11任一项所述的siRNA在制备用于抑制CIDEB表达的生物制剂或者药物制剂中的应用。
13.一种用于抑制CIDEB表达的生物制剂或者药物制剂，其中，包括权利要求1-11任一项所述的siRNA，以及与所述siRNA连接或包裹的靶向性递送配体或递送载体。
14.根据权利要求13所述的生物制剂或者药物制剂，其中，所述配体为N-乙酰基半乳糖胺衍生物；或任意特异性递送到肝脏细胞的脂质体或其他递送载体。
15.根据权利要求14所述的生物制剂或者药物制剂，其中，所述N-乙酰基半乳糖胺衍生物的结构如下：
16.根据权利要求13-15述的生物制剂或者药物制剂，其中，所述N-乙酰基半乳糖胺衍生物与siRNA的正义链的3’端连接方式如下：
17.根据权利要求13-16任一项所述的生物制剂或者药物制剂在制备预防或治疗与CIDEB相关疾病的产品中的应用。
18.根据权利要求17所述应用，其中，所述与CIDEB相关的疾病为肝炎、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝硬化、酒精性脂肪性肝炎、酒精性脂肪肝病、HCV-相关的硬化、药物引起的肝损伤及肝细胞坏死；或所述与CIDEB相关的疾病为肥胖、糖尿病、胰岛素抵抗、高血糖症、以及糖尿病引起的多种感染、肥胖症、代谢综合征、血脂异常。
19.一种抑制CIDEB表达的方法，其中，包括给予有效剂量的权利要求1-11任一项所述的siRNA或权利要求13-16任一项所述的用于抑制CIDEB表达的生物制剂或者药物制剂。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于抑制细胞中诱导细胞死亡的dffa样效应因子b(cell death-inducingdffa-like effector b，cideb)表达的sirna，其包括正义链及反义链，所述正义链和所述反义链能够互补，其序列选自表1所示中的任意一组双链体或与其组成相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸序列，包括bbd-4102，bbd-4101和bbd-4005所示序列。
2.根据权利要求1所述的sirna，其中，所述sirna选自如下至少一对或其修饰序列:
3.根据权利要求2所述的sirna，其中，所述sirna选自bbd-4101、bbd-4102或其经修饰序列。
4.根据权利要求1-3所述的sirna，其中，所述正义链包括不多于3、2、1或0个未修饰的核苷酸，所述正义链中的修饰核苷酸包含分别选自2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、末端反向无碱基残基、锁核酸，所述正义链在5'-末端含有1，或2，或3个硫代磷酸酯键；
5.根据权利要求4所述的sirna，其中，所述5’-(e)-乙烯基膦酸酯核苷酸及其类似物是尿苷-5’-(e)-乙烯基膦酸酯及其类似物，其选自如下结构的一种：
6.权利要求3所述的sirna，其中，所述尿苷-5’-(e)-乙烯基膦酸酯及其类似物为2’-s-甲基尿苷-5’-(e)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯或2’-o-甲基尿苷-5’-(e)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯。
7.权利要求4所述的sirna，其中，所述异甘油核苷酸修饰如式(i)所示：
8.权利要求7所述的sirna，其中，式(i)的修饰核苷酸为如下中的至少一种：
9.根据权利要求1-8任一所述的sirna，其中，sirna正义链为21个核苷酸，反义链为23个核苷酸时，
10.根据权利要求9所述的sirna，其中，所述sirna是表12中的经修饰的双链体，优选地，所述sirna是表12中裸序列为所述bbd-4101或bbd-4102的经过修饰的双链体。
11.根据权利要求9所述的sirna，其中，所述sirna是bbd-4101.11、bbd-4102.11、bbd-4101.21、bbd-...
【专利技术属性】
技术研发人员：范福顺，刘新建，林莹莹，钱长庚，
申请(专利权)人：广州必贝特医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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