含有蛋白并在高浓度蛋白下显示可注射性的微球体制造技术

本发明专利技术涉及微粒组合物，其包含由基本上无定形的蛋白微粒的悬浮液，该组合物提供的浓度为每毫升所述组合物中至少５０毫克所述蛋白，并且所述蛋白的分子量为至少约２５，０００道尔顿。根据制备方法，将活性剂溶解在含有溶解的相分离增强试剂（ＰＳＥＡ）的水相或可与水混溶的溶剂中以形成单一液相的溶液。将该溶液进行液固相分离以使得所述活性剂形成基本上无定形的或非晶体的和可以以高浓度通过细标准针注射的小球。本发明专利技术对于较高分子量的蛋白具有特殊的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及活性剂的小颗粒的，优选基本上是球形小颗粒的组合物。所述活性剂优选为高分子量的蛋白，并且更优选为基本上无定形的高分子量蛋白，和最优选为基本上无定形的单克隆抗体。本专利技术能够提供高分子量蛋白，包括单克隆抗体，在高浓度下的可注射或通过注射器注射的组合物，并因此提供了用小体积组合物递送临床有效剂量的这种活性剂的能力，所述小体积组合物优选为10mL或更少的组合物，并且更优选为典型注射器应用的体积，包括典型用于皮下快速注射的可注射小体积的注射器。本专利技术也考虑到了这些活性剂小球颗粒的组合物的生产方法和使用方法。根据生产方法，将所述活性剂溶解在含有溶解的相分离增强试剂(PSEA)的水相或可与水混溶的溶剂中以形成单一液相的溶液。然后将溶液进行液固相分离，活性剂包含于固相中、PSEA和溶剂包含于液相中。所述液固相分离可以通过多种方式诱导，例如改变溶液的温度或施加能量。该方法最适合于形成治疗剂的小球颗粒，该颗粒可以向需要所述治疗剂的对象递送。该方法同样最适合于形成大分子，特别是热不稳定的大分子，例如蛋白、包括单克隆抗体材料的固体小球颗粒。本专利技术能够提供可注射的大分子。
技术介绍
专利
过去，已经使用了几种技术用于生产生物聚合物的纳米颗粒和微米颗粒。常规技术包括用于形成颗粒的喷雾干燥和碾磨，这些技术可用于生产大小为5微米或更小的颗粒。美国专利5,654,010和美国专利5,667,808描述了固体形式的重组人生长激素hGH的生产，通过与锌复合以生成无定形复合物，然后通过超声喷嘴微粒化，并在液氮中向下喷雾以冻结液滴。然后在-80℃的温度下将液氮蒸发，并且获得的物质被冻干了。微粒和微球体是固态或半固态的颗粒，其直径小于1毫米，更优选小于100微米，最优选小于10微米，它们可以由各种不同的材料制成，包括蛋白、合成聚合物、多糖和其组合。微球体已经使用在许多不同的应用中，主要是分离、诊断和药物递送。在分离技术中使用的最广为人知的微球体的例子是由合成的或天然来源的聚合物，例如聚丙烯酰胺、羟基磷灰石或琼脂糖形成的微球体。在可控药物递送领域，为了在随后释放，通常将分子并入或封装在小球颗粒中或并入单片基质中。从合成聚合物、天然聚合物、蛋白和多糖制造这些微球体颗使用很多不同的技术，包括相分离、溶剂蒸发、coascervation、乳化和喷雾干燥。通常所述聚合物形成这些微球体的支持结构，而目的药物被并入到聚合物结构中。用脂质封装靶药物而制备的颗粒目前是可以获得的。脂质体是由单个或多个磷脂和/或胆固醇双层构成的球形颗粒。脂质体大小为100纳米或更大，并且可以装载多种水溶性或脂溶性药物。例如，在SinilKim的美国专利5,422,120中描述的，在环绕着多种水相隔室的双层膜中排列以形成颗粒的脂质可以被用来封装水溶性的药物用于随后的递送。球状小珠作为生化学家的工具已经商业化多年了。共轭于小珠上的抗体产生特异于特定配体的相对大的颗粒。抗体通常被用来结合细胞表面上的受体以活化细胞，并被结合于固相以形成抗体包被的颗粒用于免疫亲和纯化，并且可以用于递送随时间缓慢释放的治疗剂，例用共轭于所述颗粒的组织或肿瘤特异性抗体以使所述治疗剂定位于所需的位点。对于发展新的制造颗粒的方法一直有着持续的需要，特别是被改造用于药物递送、分离和诊断领域的那些方法。从应用的观点来说最需要的颗粒是具有下列特征的小球颗粒窄的大小分布、基本上球形、基本上只含有活性剂、能够保持活性剂的生物化学完整性和生物活性。所述颗粒可以将提供一个适当的固相，允许通过包被或微囊包封对颗粒进行进一步稳定化。此外，小球颗粒的制造方法应该具有下列所需的特点制造简单、主要为水相的工艺、高产率、以及不需要后续的筛分。蛋白是连续排列的氨基酸，其链长足够产生较高水平的三级和/或四级结构。这区别于不具有这样结构的“肽”或其它小分子量药物。抗体(免疫球蛋白)是免疫系统的细胞(B淋巴细胞)对外源分子(抗原)或入侵的生物应答而产生的蛋白。抗体通常与外源分子或细胞极其紧密地结合，从而使其失活或对其进行标记以通过吞噬作用或补体诱导的裂解进行破坏。免疫球蛋白(Ig)是一个抗体分子。高等脊椎动物具有5类免疫球蛋白——IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，每种在免疫应答中都有不同的作用。单克隆抗体(mAb)是从仅仅一个免疫系统细胞(B淋巴细胞)的克隆衍生的高特异性的、纯化的抗体(免疫球蛋白分子)，并仅仅识别一种外源分子(抗原)的特异性位点。单克隆抗体可以通过实验室操作大量生产(鼠的、嵌合的、人源化的)。术语“单克隆抗体”可以广义使用，具体来说涵盖了具有免疫球蛋白Fc区域的单克隆抗体，具有多抗原决定簇(polyepitopic)特异性的抗体组合物，双特异性抗体，diabodies和单链分子，以及抗体片段(例如Fab、F(ab’)2和Fv)。多克隆抗体是对单一外源分子(抗原)的许多位点具有特异性的一系列抗体(免疫球蛋白分子)。天然的免疫应答是多克隆的。被称为圈套分子(trap molecule)的抗体由两个不同的受体元件和抗体分子被称为“Fc区域”的部分融合而构成的，导致产生的生长因子和细胞因子阻断剂具有比单一的元件试剂所能提供的亲和性明显升高的亲和性。圈套分子已经由例如Regeneron Pharmaceuticals公司开发。单克隆抗体(mAbs)可以是衍生自一个细胞克隆的抗体的实验室衍生种群，并高度特异于与一个特定的抗原位点的结合。它们是分子量约150kDa的大型蛋白，含有4条肽链两条轻链，每条大约25kDa，两条重链，每条大约50kDa。由于其大小，目前单克隆抗体通常通过静脉内注射递送。为了达到治疗效果，抗体通常需要以相对大的量进行递送。例如，许多抗体的递送剂量在大约100到800mg之间。这些大量的物质的可注射性对制剂和递送提出了实质性的挑战。小体积的这种大剂量物质典型地具有高粘度；因此，需要约10-250mL的大体积以进行静脉内递送。静脉内递送对于病人来说非常不舒服，需要临床装置，并且它既昂贵又耗时。本专利技术的微粒技术可以为该市场提供巨大的优势，因为它允许形成高度浓缩的悬浮液，在注射时可以容易地溶解。类似地，其它含有高分子量蛋白的活性剂也可以从本专利技术获益。本专利技术描述了可以以高浓度和相对小体积递送的组合物，因此组合物具有可通过注射器注射性和可注射性。在本专利技术之前，分子量在大约25kDa之上的单克隆抗体、其它抗体或其它高分子量蛋白，不能使用细规格针进行注射，例如与标准注射器连接使用的20号和更细的针。在本专利技术之前，这样的蛋白也不能以含有临床有效剂量的蛋白的小体积(10mL或以下)进行递送。与这些分子相关的微粒技术的使用解决了以前需要的这些分子的大体积注射的问题。本专利技术也可以用于帮助以高浓度在小注射体积内以及短的递送时间内递送较低分子量蛋白物质。单克隆抗体的制造过程是烦琐的过程，这解释了它的高价格。因此，将mAbs以非常有效和安全的方式精确地递送到靶位点是重要的。在微粒的制备和递送中，不论是否是mAbs，同样是重要的高产率地形成容易溶解的微粒或微球体、它们相应的化学完整性的保留，和在例如mAbs物质的情况下，具有非常好的可注射性以允许它们通过静脉内、眼部或其它给药途径递送。本专利技术的一个方面或目的是提供了基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可注射的微粒组合物，其含有基本上无定形蛋白微粒的悬浮液，所述组合物提供浓度为每毫升所述组合物至少大约５０毫克所述蛋白，所述蛋白的分子量为至少大约２５，０００道尔顿。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉里R布朗，韦雷德比斯科尔莱布，德布拉拉弗雷尼尔，约翰麦克吉亨，朱莉娅拉什巴施特普，特伦斯斯科特，
申请(专利权)人：巴克斯特国际公司，巴克斯特医疗保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]