【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及一种宫颈脱落细胞保存液、其制备方法及用途。
技术介绍
1、国际癌症研究协会(iarc)认定hpv感染是导致宫颈癌的主要原因，目前已知hpv有100多种亚型，分为低危型和高危型，只有高危型hpv的持续感染，才会进展为恶性病变。2021年7月6日，世界卫生组织(who)发布了宫颈癌预防中宫颈癌前病变的筛查和治疗指南，建议优化诊断工具与筛查选择，推荐以hpv核酸检测作为宫颈癌筛查的首选筛查方法。
2、hpv核酸检测的准确性受多种因素影响，其中之一是hpv样本(宫颈脱落细胞)的保存状态，样本中病毒及其核酸的稳定性直接影响核酸检测结果。目前，市面上销售的细胞保存液多为醇类、抗凝剂、缓冲溶液等为主的细胞保存液，而这些细胞液的目的是维持宫颈脱落细胞完整状态，用于细胞学检测(如tct检测等)，这些保存液对游离病毒核酸的保护并不理想，且保存液中存在有害物质，其中醇类物质可能会影响下游提取。
3、针对上述技术问题，中国授权专利cn112400861b公开了一种用于快速细胞免疫组化的细胞保存液，其特征在于，主要由缓冲液、红细胞裂解试剂、渗透压维持剂、细胞形态维持试剂、固定剂、防腐剂、粘液处理试剂、抗聚集试剂以及用于细胞免疫组化细胞抗原处理的试剂组成；其中，所述用于细胞免疫组化细胞抗原处理的试剂包括福尔马林和水杨酸锌；所述缓冲液的含量为50％-70％(v/v)；所述红细胞裂解试剂的含量为0.1％-1.0％(v/v)或0.5％-1.0％(w/v)；所述渗透压维持剂的含量为0.01％-1.14％(w/v)
4、此外，中国授权专利cn103271023b也公开了一种宫颈细胞保存液，其特征是，
5、包括一种三(2-羧乙基)膦盐酸盐，还含有渗透压维持剂、ph缓冲液成分的水溶液；三(2-羧乙基)膦盐酸盐的浓度为0.1％-1％；所述渗透压维持剂为0.6-0.9％氯化钠水溶液；所述ph缓冲液为tris/hcl缓冲液溶液，所述ph缓冲液缓冲范围在ph 6.8-7.4之间，缓冲液组份的浓度范围在2.5mm-10mm之间。该专利技术专利配合dna直接裂解的方法，能够较好地解决分泌较多粘性较大的宫颈脱落细胞样本，增加了宫颈脱落细胞检测的灵敏度。然而该专利技术专利并未明确长期储存后样本及核酸的稳定情况，样本及核酸降解后导致检测结果出现假阴性。
6、基于上述现有技术，如何提供一种能够长期维持细胞保存液中消除粘液成分稳定，同时不影响下游提取检测，以及可维持细胞核酸、感染细胞的hpv核酸及游离hpv核酸稳定的宫颈脱落细胞保存液，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
1、基于上述
技术介绍
，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种宫颈脱落细胞保存液、其制备方法及用途。为了实现本专利技术的专利技术目的，拟采用如下技术方案：
2、本专利技术一方面涉及一种宫颈脱落细胞保存液，每1l细胞保存液由如下组分组成：
3、
4、
5、本专利技术的细胞保存液中，氯化钾、氯化钠用于维持渗透压；磷酸氢二钠、磷酸二氢钾作为缓冲体系，有利于细胞和核酸的稳定保存；三(2-羧乙基)膦盐酸盐为消除粘液成分，减少粘液对核酸提取检测的影响；乙二胺四乙酸二钠可以有效地抑制核酸酶活性，防止核酸降解；庆大霉素、牛莎bnd-10为体外诊断试剂专用抑菌剂，主要成分是10％的5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇溶液(5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane)，通过组合使用上述抑菌剂，可有效协同地抑制杂菌生长，以延长细胞保存液储存时长；氯化铵、碳酸氢钾为抑凝血成分，便于下游核酸提取。
6、在本专利技术的一个优选实施方式中，所述细胞保存液的ph值介于7.0-8.0之间。
7、本专利技术还提供一种细胞保存液的配制方法，包括：
8、1)将氯化钾、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾溶解于水中，得到缓冲液；
9、2)将三(2-羧乙基)膦盐酸盐、乙二胺四乙酸二钠、庆大霉素、牛莎bnd-10、氯化铵、碳酸氢钾加入到上述缓冲液中，混匀，获得细胞保存液。
10、本专利技术还提供一种细胞的保存方法，利用所述的细胞保存液保存细胞。
11、本专利技术还涉及一种hpv样本的提取方法，包括本专利技术所述的细胞保存液使用。
12、本专利技术还涉及一种用于检测hpv的试剂盒。
13、本专利技术的细胞保存液，有效降低了细胞保存过程中核酸的降解。实验结果显示，室温(25℃)条件下，宫颈脱落细胞能稳定储存15天；-20±5℃条件下，宫颈脱落细胞能稳定储存12个月。本专利技术提供的保存液的制备方法操作简单且对操作人员无危害。
14、有益效果
15、本专利技术的细胞保存液能够长期保存宫颈脱落细胞，能够有效地保存细胞核酸、感染细胞的hpv核酸及游离hpv核酸。保存样本后，室温(25℃)放置15天或-20±5℃放置12个月后不发生降解。细胞保存液中含有消除粘液成分，粘稠度降低后便于核酸提取操作，减少提取时取样量对结果的影响；细胞保存液中消除粘液成分性质稳定，保存液室温(25℃)放置12个月后或55℃放置2个月后，消除粘液效果未减弱。细胞保存液中有抑菌成分，可有效抑制杂菌生长，以延长细胞保存液储存时长。细胞保存液中有抑制凝血成分，可防止血液凝固，干扰下游提取检测。并且保存液中的成分均为无害物质，配制简单且对操作人员无伤害。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种宫颈脱落细胞保存液，每1L细胞保存液由如下组分组成：
2.根据权利要求1所述的细胞保存液，所述细胞保存液的pH值介于7.0-8.0之间。
3.权利要求1或2所述的细胞保存液的配制方法，包括：
4.一种细胞的保存方法，利用权利要求1或2所述的细胞保存液保存细胞，所述细胞为宫颈脱落细胞。
5.一种HPV样本的提取方法，包括使用权利要求1或2所述的细胞保存液保存宫颈脱落细胞，从经过保存的宫颈脱落细胞种提取HPV样本。
6.一种用于检测HPV的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的细胞保存液。
【技术特征摘要】
1.一种宫颈脱落细胞保存液，每1l细胞保存液由如下组分组成：
2.根据权利要求1所述的细胞保存液，所述细胞保存液的ph值介于7.0-8.0之间。
3.权利要求1或2所述的细胞保存液的配制方法，包括：
4.一种细胞的保存方法，利用权利要求1或2所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘潇潇，王先磊，严旭霞，韦艳，
申请(专利权)人：江苏默乐生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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