【技术实现步骤摘要】
专利
本公开涉及生物，具体涉及sars-cov-2或其变异株抗原性多肽及其重组腺相关病毒和在制备疫苗中的应用。
技术介绍
0、专利技术背景
1、与sars-cov-2新冠病毒一样，变异株omicron的主要结构蛋白包括刺突(spike)蛋白(s)、包膜(envelope)蛋白(e)、基质(matrix)蛋白(m)和核衣壳(nucleocapsid)蛋白(n)；其中刺突蛋白(s蛋白)上的突变位点最多，也最关键。刺突蛋白通过结合人体内细胞人血管紧张素转化酶2(ace2)受体入侵机体，因此刺突蛋白成为大多数新冠疫苗发挥保护效力的靶标蛋白。
2、omicron变异株在刺突蛋白50％流行率的异常突变的位点有32个，相比之下，具有破坏性的delta变异株的50％流行率突变位点只有9个，因此omicron变异株比delta变异株更容易逃脱中和抗体。相关的体外研究(vikram thakur，radha kanta ratho.omicron(b.1.1.529)：anewsars-cov-2 variant of concern mounting worldwide fear.j medvirol.2022；94：1821-1824)表明，从接种疫苗bnt162b2和mrna1273的个体获得的血清，对omicron的中和能力分别降低了11.4倍和20倍；在chadox1疫苗接种个体的血清中未观察到中和效果。此外，针对sars-cov-2野生型毒性的rbd制备的疫苗诱导的血清对omicron的中和效果降低，预防和
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本公开提供了一种重组腺相关病毒(raav)载体以及包含raav载体的组合物。本公开还提供了产生此类raav载体的方法。此外本公开还提供了包含raav载体的疫苗组合物，以及使用raav载体诱导受试者中针对sars-cov-2或其变异株的免疫反应的方法，和预防和/或治疗受试者中由sars-cov-2或其变异株感染引起的疾病的方法。
2、本公开的目的在于克服现有技术的不足，提供针对sars-cov-2或其变异株的重组腺相关病毒(raav)载体疫苗及其制备方法与应用，可以有效地用于包括omicron变异株在内的各种sars-cov-2病毒的防治。
3、相应地，在一方面，本公开提供了重组腺相关病毒(raav)载体，其包含编码sars-cov-2变异株omicron的s蛋白或其抗原性片段的核苷酸序列。在一些实施方案中，raav载体可以包含编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列，其中所述多肽包含选自seq id no.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列，或在seq id no.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和插入一个或多个(例如1-30个，1-25个，1-20个，1-15个，1-10个或1-5个)氨基酸残基的氨基酸序列，或与seq id no.2-3、16-17和23中任一个的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
4、在本公开raav载体的一些实施方案中，多肽包含一个或多个选自以下的突变：r682s、r685g、k986p和v987p，其中根据新冠病毒株nc 045512的s蛋白的氨基酸序列(seqid no.27)进行编号。
5、在一些实施方案中，多肽包含以下突变：r682s、r685g、k986p和v987p，其中根据新冠病毒株nc 045512的s蛋白的氨基酸序列(seq id no.27)进行编号。
6、在一些实施方案中，多肽包含seq id no.2-3、16-17或23所示的氨基酸序列。
7、在本公开raav载体的一些实施方案中，多肽还包含n端信号肽序列。在一些实施方案中，信号肽衍生于选自下组的蛋白质的信号肽：组织纤溶酶原激活物(tpa)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、催乳素前体、生长激素和免疫球蛋白(例如ige)。在一些实施方案中，信号肽具有seq id no.4或seq id no.5所示的氨基酸序列。
8、在本公开raav载体的一些实施方案中，在编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列的5’端和3’端包含腺相关病毒反向末端重复(itr)序列。在一些实施方案中，itr序列衍生于选自下组的腺相关病毒血清型的itr序列：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9和aav10。在一些实施方案中，itr序列衍生于aav2血清型的itr序列。在一些实施方案中，itr序列具有seq id no.6所示的核苷酸序列。在一些实施方案中，itr序列具有seqid no.28所示的核苷酸序列。
9、在本公开raav载体的一些实施方案中，raav载体进一步包含表达调控元件，例如启动子序列、上游调节区域、转录调控元件和终止子中的一种或多种。
10、在本公开raav载体的一些实施方案中，编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列经人源密码子优化。
11、在本公开raav载体的一些实施方案中，编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列具有seq id no.7-9、18-20、24或25所示的核苷酸序列。
12、在一些实施方案中，raav载体具有seq id no.10-11、21-22或26所示的核苷酸序列。
13、在另一方面，本公开提供了组合物，其包含本公开的raav载体和aav血清型质粒。在本公开组合物的一些实施方案中，血清型质粒包含编码aav的rep蛋白和cap蛋白的核苷酸序列。
14、在一些实施方案中，rep蛋白为选自下组的腺相关病毒血清型的rep蛋白：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9和aav10。在一些实施方案中，rep蛋白来自aav2血清型。
15、在一些实施方案中，cap蛋白为选自下组的腺相关病毒血清型的cap蛋白：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9和aav10。在一些实施方案中，cap蛋白来自aav5血清型。
16、在本公开组合物的一些实施方案中，血清型质粒在编码aav的rep蛋白和cap蛋白的核苷酸序列的5’端和/或3’端包含seq id no.12或seq id no.13所示的核苷酸序列。
17、在一些实施方案中，组合物进一步包含辅助质粒。
18、在又一方面，本公开提供了产生重组腺相关病毒(raav)的方法，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.重组腺相关病毒(rAAV)载体，其包含编码SARS-CoV-2变异株Omicron的S蛋白或其抗原性片段的核苷酸序列。
2.权利要求1的rAAV载体，其包含编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列，其中所述多肽包含选自SEQ ID NO.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列，或在SEQ ID NO.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和插入一个或多个(例如1-30个，1-25个，1-20个，1-15个，1-10个或1-5个)氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.2-3、16-17和23中任一个的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
3.权利要求1或2的rAAV载体，其中所述多肽包含一个或多个选自以下的突变：R682S、R685G、K986P和V987P，其中根据新冠病毒株NC 045512的S蛋白的氨基酸序列(SEQ IDNO.27)进行编号。
4.权利要求1-3中任一项的rAAV载体，其中所述多肽包
5.权利要求1或2的rAAV载体，其中所述多肽包含SEQ ID NO.2-3、16-17或23所示的氨基酸序列。
6.权利要求1-5中任一项的rAAV载体，其中所述多肽还包含N端信号肽序列。
7.权利要求6的rAAV载体，其中所述信号肽衍生于选自下组的蛋白质的信号肽：组织纤溶酶原激活物(tPA)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、催乳素前体、生长激素和免疫球蛋白(例如IgE)。
8.权利要求6的rAAV载体，其中所述信号肽具有SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。
9.权利要求1-8中任一项的rAAV载体，其在所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列的5’端和3’端包含腺相关病毒反向末端重复(ITR)序列。
10.权利要求9的rAAV载体，其中所述ITR序列衍生于选自下组的腺相关病毒血清型的ITR序列：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAV10。
11.权利要求10的rAAV载体，其中所述ITR序列衍生于AAV2血清型的ITR序列。
12.权利要求11的rAAV载体，其中所述ITR序列具有SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。
13.权利要求11的rAAV载体，其中所述ITR序列具有SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列。
14.权利要求1-13中任一项的rAAV载体，其进一步包含表达调控元件，例如启动子序列、上游调节区域、转录调控元件和终止子中的一种或多种。
15.权利要求1-14中任一项的rAAV载体，其中所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列经人源密码子优化。
16.权利要求15的rAAV载体，其中所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列具有SEQID NO.7-9、18-20、24或25所示的核苷酸序列。
17.权利要求1-16中任一项的rAAV载体，其中所述rAAV载体具有SEQ ID NO.10-11、21-22或26所示的核苷酸序列。
18.组合物，其包含权利要求1-17中任一项的rAAV载体和AAV血清型质粒。
19.权利要求18的组合物，其中所述血清型质粒包含编码AAV的Rep蛋白和Cap蛋白的核苷酸序列。
20.权利要求19的组合物，其中所述Rep蛋白为选自下组的腺相关病毒血清型的Rep蛋白：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAV10。
21.权利要求20的组合物，其中所述Rep蛋白来自AAV2血清型。
22.权利要求19-21中任一项的组合物，其中所述Cap蛋白为选自下组的腺相关病毒血清型的Cap蛋白：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAV10。
23.权利要求22的组合物，其中所述Cap蛋白来自AAV5血清型。
24.权利要求19-23中任一项的组合物，其中所述血清型质粒在所述编码AAV的Rep蛋白和Cap蛋白的核苷酸序列的5’端和/或3’端包含SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列。
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【技术特征摘要】
1.重组腺相关病毒(raav)载体，其包含编码sars-cov-2变异株omicron的s蛋白或其抗原性片段的核苷酸序列。
2.权利要求1的raav载体，其包含编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列，其中所述多肽包含选自seq id no.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列，或在seq id no.2-3、16-17和23中任一个所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和插入一个或多个(例如1-30个，1-25个，1-20个，1-15个，1-10个或1-5个)氨基酸残基的氨基酸序列，或与seq id no.2-3、16-17和23中任一个的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
3.权利要求1或2的raav载体，其中所述多肽包含一个或多个选自以下的突变：r682s、r685g、k986p和v987p，其中根据新冠病毒株nc 045512的s蛋白的氨基酸序列(seq idno.27)进行编号。
4.权利要求1-3中任一项的raav载体，其中所述多肽包含以下突变：r682s、r685g、k986p和v987p，其中根据新冠病毒株nc 045512的s蛋白的氨基酸序列(seq id no.27)进行编号。
5.权利要求1或2的raav载体，其中所述多肽包含seq id no.2-3、16-17或23所示的氨基酸序列。
6.权利要求1-5中任一项的raav载体，其中所述多肽还包含n端信号肽序列。
7.权利要求6的raav载体，其中所述信号肽衍生于选自下组的蛋白质的信号肽：组织纤溶酶原激活物(tpa)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、催乳素前体、生长激素和免疫球蛋白(例如ige)。
8.权利要求6的raav载体，其中所述信号肽具有seq id no.4或seq id no.5所示的氨基酸序列。
9.权利要求1-8中任一项的raav载体，其在所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列的5’端和3’端包含腺相关病毒反向末端重复(itr)序列。
10.权利要求9的raav载体，其中所述itr序列衍生于选自下组的腺相关病毒血清型的itr序列：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9和aav10。
11.权利要求10的raav载体，其中所述itr序列衍生于aav2血清型的itr序列。
12.权利要求11的raav载体，其中所述itr序列具有seq id no.6所示的核苷酸序列。
13.权利要求11的raav载体，其中所述itr序列具有seq id no.28所示的核苷酸序列。
14.权利要求1-13中任一项的raav载体，其进一步包含表达调控元件，例如启动子序列、上游调节区域、转录调控元件和终止子中的一种或多种。
15.权利要求1-14中任一项的raav载体，其中所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列经人源密码子优化。
16.权利要求15的raav载体，其中所述编码多肽或其抗原性片段的核苷酸序列具有seqid no.7-9、18-20、24或25所示的核苷酸序列。
17.权利要求1-16中任一项的raav载体，其中所述raav载体具有seq id no.10-11、21-22或26所示的核苷酸序列。
18.组合物，其包含权利要求1-17中任一项的raav载体和aav血清型质粒。
19.权利要求18的组合物，其中所述血清型质粒包含编码aav的...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪恩，李展如，
申请(专利权)人：广东克冠达医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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