【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了通过测量共定位的新型生物标志物来对患有癌症的受试者进行分类、诊断和监测的方法。还提供了试剂盒和阵列，其用于：诊断癌症，特别是侵袭性癌症；鉴别诊断；以及监测癌症的进展。
技术介绍
1、转化生长因子β(tgfβ)在多种晚期癌症中过度表达并促进肿瘤进展。癌细胞如何逃避tgfβ诱导的生长抑制并逃避正常的体内平衡尚不清楚。在经典的tgfβ-smad信号通路中，细胞反应取决于tgfβ受体i(tβri)的激酶活性，从而导致形成smad2、smad3和smad4复合物，这些复合物调节某些基因的转录，包括serpine1、snail1和金属蛋白酶蛋白2。tβri在其细胞外结构域被tnf-α转换酶(tace/adam17)裂解，导致smad蛋白介导的tgfβ介导的生长抑制作用丧失(liu c等人.mol cell 2009；35(1):26-36)。
2、相反，在非经典的tgfβ诱导的信号通路中，细胞反应通常由e3连接酶肿瘤坏死因子受体相关因子6(traf6)调节。该蛋白质与tβri结合，并在配体与受体结合时被激活，从而促进map激酶激酶激酶tgfβ激活的激酶1(tak1)的激活。响应于胰岛素刺激通过内体蛋白与ph结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(appl1)在k160 11,13-15上的k63连接的多泛素化，并且响应于tgfβ刺激通过pi3k复合物中调节亚基p85α的k63连接的多泛素化，traf6促进磷脂酰肌醇-3'-激酶(pi3k)-akt通路的激活(hamidi a等人.sci signal20
3、本专利技术人最近已经表明，内体衔接蛋白appl1和appl2与tβri-icd结合，并响应于细胞的tgfβ刺激增强tβri-icd的核积累，从而体外促进前列腺癌细胞的侵袭性，并示出与人类前列腺癌的侵袭性的强相关性(song j、mu y、li c、bergh a、miaczynska m、heldinc-h等人.appl proteins promote tgfβ-induced nuclear transport of the tgfβtypei receptor intracellular domain.oncotarget.2016；7:279–92)。
4、wo 2012/125623公开了tβri的裂解抑制剂的用途及其在癌症疗法中的用途，以及诊断方法，其中tβri-icd的核定位指示样品中癌细胞的存在和受试者中癌症侵袭性/转移的可能性。
5、tgfβ信号通路在肿瘤进展中具有双重且关键的作用。在正常细胞中和在肿瘤发生的早期阶段，它通过抑制增殖并诱导分化和细胞凋亡来充当肿瘤抑制因子。tgfβ抑制多种细胞类型的增殖，包括上皮细胞和内皮细胞、角质形成细胞和白细胞。在大多数正常细胞类型中，tgfβ刺激通过下调myc的表达和上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(包括p15ink4b和p21)的表达，将细胞周期进展阻滞在g1(sintich sm、lamm ml、sensibar j a、leec.transforming growth factor-β1-induced proliferation of the prostate cancercell line,tsu-pr1:the role of platelet-derived growthfactor.endocrinology.1999；140:3411–5)。然而，在晚期癌症中，当癌细胞逃避tgfβ的抑制反应时，细胞因子通过诱导上皮间质转化、促进肿瘤侵袭和转移并抑制免疫系统来成为肿瘤启动子(即tgfβ促进肿瘤发生)(batlle e、massague j.transforming growthfactor-βsignaling in immunity and cancer.immunity 2019；50:924-940)。
6、尽管有这些发现，但对tgfβ在有丝分裂中的作用知之甚少。tgfβ可以促进某些间质细胞和癌细胞的增殖，但其在生长刺激机制中的作用尚不清楚。作为增殖刺激剂，tgfβ诱导人肾成纤维细胞中成纤维细胞生长因子2的表达，以及神经胶质瘤和骨肉瘤细胞中血小板衍生生长因子的表达。在正常前列腺上皮细胞中，tgfβ通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来充当生长抑制剂，而在对tgfβ诱导的生长停滞失去敏感性的前列腺癌细胞中，tgfβ可能促进肿瘤细胞生长。例如，tgfβ刺激前列腺癌细胞系tsu-pr1(sintichsm、lamm ml、sensibarj a、lee c.transforming growth factor-β1-induced proliferation of the prostatecancer cell line,tsu-pr1:the role of platelet-derived growthfactor.endocrinology.1999；140:3411–5)中的细胞增殖，并且仅引起du145和pc-3细胞系中的短暂增殖抑制，而对lncap前列腺癌细胞的增殖没有影响(wilding g、zugmeier g、knabbe c、flanders k、gelmann e.differential effects of transforming growthfactorβon human prostate cancer cells in vitro.mol cell endocrinol.1989；62:79–87)。
7、极光激酶是细胞增殖所必需的丝氨酸/苏氨酸激酶。它们是磷酸转移酶，其帮助分裂细胞将其遗传物质分配给其子细胞。更具体地，极光激酶通过控制染色单体分离在细胞分裂中发挥关键作用。极光激酶(诸如极光激酶a(aurka)和极光激酶b(aurkb))在许多肿瘤(包括乳腺癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺肿瘤)中过度表达。极光激酶b(aurkb)是染色体乘客复合物(cpc)的组成部分，其包含三个调节成分，即内着丝粒蛋白(incenp)、生存素和borealin。aurkb与incenp的保守c末端in-box区域结合(adams rr等人.curr biol2000；10(17):1075-8)，其中定位thr-ser-ser基序，该基序被aurkb磷酸化(bishop jd、schumacher jm.j biol chem 2002；277(31):27577-80)，有助于复合物的aurkb激活和稳定。aurkb:incenp复合物也已经被认为有利于aurkb的反式自磷酸化，因为在对其晶体结构的研究中发现aurkb形成二聚体(elkins jm等人.j med chem 2012；55(17):7841-8)。
8、在间期中，c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于诊断受试者的癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：确定第四生物标志物在所述生物测试样品中的存在或不存在，其中所述生物标志物是TNF受体相关因子6(TRAF6)，其中所有四种生物标志物在所述生物样品中的共定位指示所述受试者的癌症。
3.一种用于诊断和/或预测受试者的侵袭性癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括：确定第四生物标志物在所述生物测试样品中的存在或不存在，其中所述生物标志物是TNF受体相关因子6(TRAF6)，其中所有四种生物标志物在所述生物测试样品中的共定位指示所述受试者的侵袭性癌症。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中极光激酶B(AURKB)被泛素化。
6.根据权利要求4所述的方法，其中AURKB在对应于人AURKB(SEQ ID NO:1)的赖氨酸85(K85)和/或赖氨酸87(K87)的一个或两个赖氨酸残基处被泛素化。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症与转化生长因子βI型受
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述实体瘤选自由前列腺癌、肾细胞癌、肺癌、肾癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和结直肠癌组成的组。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述前列腺癌是去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试样品是组织样品，诸如来自肿瘤的活检切片。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中极光激酶B(AURKB)、与PH结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(APPL1)、TGFβ1型受体(TβR1)和/或TNF受体相关因子6(TRAF6)的存在或不存在通过以下来确定：检测生物标志物蛋白；且/或检测所述生物标志物蛋白的生物活性。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用选自由免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀(IP)、ELISA技术(单一或多重)、放射免疫测定(RIA)、包括使用单克隆和/或多克隆抗体的夹心测定的免疫放射测定(IRMA)和免疫酶测定(IEMA)、原位邻近连接测定(PLA)、酶法、图像分析、质谱法、适体、生物层干涉测量(BLI)、表面等离子共振(SPR)、多重测定(MSD，Mesoscalediscovery)组成的组的方法或通过与极光激酶B(AURKB)、与PH结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(APPL1)、TGFβ1型受体(TβR1)、任选的TGFβ1型受体细胞内结构域(TβR1-ICD)和TNF受体相关因子6(TRAF6)结合的指示物质来执行在步骤(b)中确定所述生物标志物的所述存在和/或不存在。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如果所述受试者被诊断患有癌症和/或侵袭性癌症，则所述方法进一步包括以下步骤：
15.一种用于确定患有或疑似患有前列腺癌的受试者的格里森评分(GS)为(i)GS≤6或7(3+4)；或(ii)GS 7(4+3)或≥8的方法，所述方法包括以下步骤：
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述复合物进一步包含与PH结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(APPL1)。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述复合物进一步包含TNF受体相关因子6(TRAF6)。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中所述复合物定位于细胞结构，诸如胞质分裂结构。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中AURKB在对应于人AURKB(SEQ IDNO:1)的赖氨酸85(K85)和赖氨酸87(K87)的一个或两个赖氨酸残基处被泛素化。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述TGFβ1型受体(TβR1)是细胞内结构域(TβR1-ICD)。
21.一种用于确定个体的癌症的存在的阵列，其包括：
22.一种用于对受试者的癌症进行诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒包括：
23.极光激酶B(AURKB)、与PH结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(APPL1)和TGFβ1型受体(TβR1)用作生物标志物对涉及TGFβ1型受体的蛋白水解裂解的疾病或病症进行诊断和/或预后，其中所有三种生物标志物在细胞中共定位于胞质分裂结构指示所述疾病或病症。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于诊断受试者的癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：确定第四生物标志物在所述生物测试样品中的存在或不存在，其中所述生物标志物是tnf受体相关因子6(traf6)，其中所有四种生物标志物在所述生物样品中的共定位指示所述受试者的癌症。
3.一种用于诊断和/或预测受试者的侵袭性癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括：确定第四生物标志物在所述生物测试样品中的存在或不存在，其中所述生物标志物是tnf受体相关因子6(traf6)，其中所有四种生物标志物在所述生物测试样品中的共定位指示所述受试者的侵袭性癌症。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中极光激酶b(aurkb)被泛素化。
6.根据权利要求4所述的方法，其中aurkb在对应于人aurkb(seq id no:1)的赖氨酸85(k85)和/或赖氨酸87(k87)的一个或两个赖氨酸残基处被泛素化。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症与转化生长因子βi型受体(tβri)的蛋白水解裂解相关和/或由其介导。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述实体瘤选自由前列腺癌、肾细胞癌、肺癌、肾癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和结直肠癌组成的组。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述前列腺癌是去势抵抗性前列腺癌(crpc)。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试样品是组织样品，诸如来自肿瘤的活检切片。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中极光激酶b(aurkb)、与ph结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(appl1)、tgfβ1型受体(tβr1)和/或tnf受体相关因子6(traf6)的存在或不存在通过以下来确定：检测生物标志物蛋白；且/或检测所述生物标志物蛋白的生物活性。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用选自由免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀(ip)、elisa技术(单一或多重)、放射免疫测定(ria)、包括使用单克隆和/或多克隆抗体的夹心测定的免疫放射测定(irma)和免疫酶测定(iema)、原位邻近连接测定(pla)、酶法、图像分析、质谱法、适体、生物层干涉测量(bli)、表面等离子共振(spr)、多重测定(msd，mesoscalediscovery)组成的组的方法或通过与极光激酶b(aurkb)、与ph结构域和亮氨酸拉链1相互作用的磷酸酪氨酸衔接蛋白(appl1)、tgfβ1型受体(tβr1)、任选的tgfβ1型受体细胞内结构域(tβr1-icd)和tnf受体相关因子6(traf6)结合的指示物质来执行在步骤(b)中确定所述生物标志物的所述存在和/或不存在。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如果所述受试者被诊断患有癌症和/或侵...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·兰斯特伦，宋洁，
申请(专利权)人：米塔克鲁姆生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
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