【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及与一个或多个二价阳离子进行离子结合的干扰rna分子(例如，短干扰rna分子)，以及将这些分子递送至需要调节一个或多个基因的受试者的中枢神经系统的方法。
技术介绍
1、在许多物种中，双链rna的引入会诱导通过rna干扰(rnai)的方式有效且特异性的基因沉默。这种现象在植物和动物中都有发生，并且在病毒防御和转座子沉默机制中具有作用。例如，通常比靶基因短得多的短干扰rna(sirna)，已被证明在基因沉默方面有效，因此可用作使基因沉默的治疗剂，以使遗传和生物化学途径的活性从疾病状态恢复到正常的健康状态。然而，将干扰rna分子，诸如sirna递送至受试者，特别是递送至受试者的中枢神经系统，会带来毒副作用的风险，其中包括癫痫、震颤和过度活跃的运动行为等。仍然需要在施用于有需要的受试者时实现降低的毒性的干扰rna分子。
技术实现思路
1、本公开提供了干扰rna分子，其含有多个部分或完全被二价阳离子(例如，二价金属阳离子)饱和的阳离子结合位点。例如，本公开的干扰rna分子可含有一个或多个磷酸二酯核苷间键联和/或其类似物，诸如硫代磷酸酯核苷间键联，其中氧离子部分通过与二价金属阳离子(诸如ba2+、be2+、ca2+、cu2+、mg2+、mn2+、ni2+或zn2+)的离子键合得以静电中和。目前已发现，在将干扰rna分子施用于受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人)之前将一种或多种二价阳离子掺入干扰rna分子(例如，短干扰rna(sirna))强烈阻抑可能因施用干扰rna分子而引起的毒副作
2、使用本公开的组合物和方法，可以通过以离子键合的方式掺入一种或多种二价阳离子来配制治疗性寡核苷酸，诸如干扰rna分子(例如，sirna)。这可以通过用含有感兴趣的二价阳离子的水溶液或悬浮液滴定含有治疗性寡核苷酸(例如，干扰rna分子，诸如sirna)的水溶液或悬浮液来实现。然后可以将随后的具有部分或完全被二价阳离子饱和的阳离子结合位点的治疗性寡核苷酸施用于受试者，例如以水溶液或悬浮液的形式施用，以便调节期望基因的表达。有利地，与在施用相同的治疗性寡核苷酸但缺乏一种或多种二价阳离子的受试者中观察到的副作用相比，所述受试者可能经历频率和/或幅度降低的副作用。
3、在第一方面，本公开提供了一种用于将治疗性寡核苷酸(例如，sirna或反义寡核苷酸，以及本文所述的其它寡核苷酸)递送至受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人)的方法，该方法是通过以含有一种或多种二价阳离子的盐的形式将治疗性寡核苷酸施用于受试者。所述治疗性寡核苷酸可包含多个部分或完全被所述一种或多种二价阳离子饱和的阳离子结合位点。
4、在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸以水溶液的形式或以悬浮液的形式施用于受试者。所述治疗性寡核苷酸可以全身施用于受试者或者直接施用于受试者的中枢神经系统(cns)。例如，可以将治疗性寡核苷酸施用于受试者的脑脊液(csf)、脊髓、脑实质、皮质、小脑、基底神经节、尾状核、壳核、丘脑、苍白球、黑质或另一脑部结构。在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸经鞘内、脑室内、纹状体内或通过导管插入在小脑延髓池内注射施用。在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸经鞘内施用。在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸经脑室内施用。
5、在第二方面，本公开提供了一种配制为含有一种或多种二价阳离子的盐的治疗性寡核苷酸(例如，sirna)。所述治疗性寡核苷酸可含有多个部分或完全被所述一种或多种二价阳离子饱和的阳离子结合位点。
6、在本公开前述方面中任一方面的一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子对阳离子结合位点的饱和度为约10％至约100％(例如，约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％或约90％至约100％)。
7、在一些实施方案中，所述阳离子结合位点位于核苷间键联，诸如磷酸二酯键联和/或硫代磷酸酯键联内。例如，所述阳离子结合位点可以是磷酸二酯键联或硫代磷酸酯键联内的氧离子部分。
8、在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子表征为离子半径范围为约30皮米至约150皮米(例如，约30皮米至约140皮米、约40皮米至约130皮米、约50皮米至约120皮米、约60皮米至约110皮米、约60皮米至约100皮米或约60皮米至约90皮米)。
9、在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括硬路易斯酸。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括ba2+、be2+、ca2+、cu2+、mg2+、mn2+、ni2+或zn2+或其组合。
10、在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括ba2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括be2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括ca2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括cu2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括mg2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括mn2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括ni2+。在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括zn2+。
11、在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子包括ca2+和mg2+，任选地其中ca2+与mg2+的比率为1:100至100:1(例如，1:75、1:50、1:25、1:10、1:5、1:1、5:1、10:1、25:1、50:1、75:1或100:1)。在一些实施方案中，ca2+和mg2+以1:1比率存在。
12、在一些实施方案中，所述一种或多种二价阳离子置换来自治疗性寡核苷酸的阳离子结合位点的水。
13、在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸是sirna、短发夹rna(shrna)、微rna(mirna)、crispr向导rna或rna反义寡核苷酸(aso)。在一些实施方案中，所述治疗性寡核苷酸是干扰rna分子。在一些实施方案中，所述干扰rna分子是sirna。所述sirna可以是分支sirna，诸如二分支sirna分子、三分支sirna分子或四分支sirna分子。
14、在一些实施方案中，二分支sirna由式i-iii中的任一个表示：
15、
16、其中每个rna独立地是sirna分子，l是接头，并且每个x独立地表示分支点部分。
17、在一些实施方案中，二分支sirna分子由式i表示。在一些实施方案中，二分支sirna分子由式ii表示。在一些实施方案中，二分支sirna分子由式iii表示。
18、在一些实施方案中，三分支sirna由式iv-vii中的任一个表示：
19、
20、其中每个rna独立地是sirna分子，l是接头，并且每个x独立地表示分支点部分。
21、在一些实施方案中，三分支sirna分子由式iv表示。在一些实施方案本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种将短干扰RNA(siRNA)分子递送至受试者的方法，所述方法包括以包含一种或多种二价阳离子的盐的形式将所述siRNA分子施用至所述受试者的中枢神经系统。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述siRNA分子包含多个部分或完全被所述一种或多种二价阳离子饱和的阳离子结合位点。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为10％至100％，任选地其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为20％至100％、30％至100％、40％至100％、50％至100％、60％至100％、70％至100％、80％至100％或90％至100％。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述阳离子结合位点位于核苷间键联内，任选地其中所述核苷间键联选自磷酸二酯键联和硫代磷酸酯键联。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至150皮米，任选地其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至140皮米、40皮米至130皮米、50
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Ba2+、Be2+、Ca2+、Cu2+、Mg2+、Mn2+、Ni2+或Zn2+或其组合。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Ba2+。
8.如权利要求6或7所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Be2+。
9.如权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Ca2+。
10.如权利要求6-9中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Cu2+。
11.如权利要求6-10中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Mg2+。
12.如权利要求6-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Mn2+。
13.如权利要求6-12中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Ni2+。
14.如权利要求6-13中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Zn2+。
15.如权利要求6-14中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括Ca2+和Mg2+，任选地其中Ca2+与Mg2+的比率为1:100至100:1。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述Ca2+和Mg2+以1:1摩尔比存在。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包含硬路易斯酸。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子置换来自所述siRNA分子的阳离子结合位点的水。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述siRNA分子是未分支的。
20.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述siRNA分子是分支的。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述siRNA分子是二分支、三分支或四分支的。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述siRNA分子是二分支的。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述siRNA分子包含反义链和与所述反义链具有互补性的有义链。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述反义链和有义链包含交替的2’-O-甲基和2’-氟核糖核苷。
25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链按5′至3′方向具有下式：
26.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链包含式I表示的结构，其中式I按5′至3′方向是：
27.如权利要求26所述的方法，其中所述反义链包含式AI表示的结构，其中式A1按5′至3′方向是：
28.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链包含式II表示的结构，其中式II按5′至3′方向是：
29.如权利要求28所述的方法，其中所述反义链包含式A2表示的结构，其中式A2按5′至3′方向是：
30.如权利要求23-29中任一项所述的方法，其中所述有义链包含式III表示的结构，其中式III按5'至3'方向是：
31.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式S1表示的结构，其中式S1按5′至3′方向是：
32.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式S2表示的结构，其中式S2按5...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种将短干扰rna(sirna)分子递送至受试者的方法，所述方法包括以包含一种或多种二价阳离子的盐的形式将所述sirna分子施用至所述受试者的中枢神经系统。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述sirna分子包含多个部分或完全被所述一种或多种二价阳离子饱和的阳离子结合位点。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为10％至100％，任选地其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为20％至100％、30％至100％、40％至100％、50％至100％、60％至100％、70％至100％、80％至100％或90％至100％。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述阳离子结合位点位于核苷间键联内，任选地其中所述核苷间键联选自磷酸二酯键联和硫代磷酸酯键联。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至150皮米，任选地其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至140皮米、40皮米至130皮米、50皮米至120皮米、60皮米至110皮米、60皮米至100皮米或60皮米至90皮米。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括ba2+、be2+、ca2+、cu2+、mg2+、mn2+、ni2+或zn2+或其组合。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括ba2+。
8.如权利要求6或7所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括be2+。
9.如权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括ca2+。
10.如权利要求6-9中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括cu2+。
11.如权利要求6-10中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括mg2+。
12.如权利要求6-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括mn2+。
13.如权利要求6-12中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括ni2+。
14.如权利要求6-13中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括zn2+。
15.如权利要求6-14中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包括ca2+和mg2+，任选地其中ca2+与mg2+的比率为1:100至100:1。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述ca2+和mg2+以1:1摩尔比存在。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子包含硬路易斯酸。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子置换来自所述sirna分子的阳离子结合位点的水。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述sirna分子是未分支的。
20.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述sirna分子是分支的。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述sirna分子是二分支、三分支或四分支的。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述sirna分子是二分支的。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述sirna分子包含反义链和与所述反义链具有互补性的有义链。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述反义链和有义链包含交替的2’-o-甲基和2’-氟核糖核苷。
25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链按5′至3′方向具有下式：
26.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链包含式i表示的结构，其中式i按5′至3′方向是：
27.如权利要求26所述的方法，其中所述反义链包含式ai表示的结构，其中式a1按5′至3′方向是：
28.如权利要求23或24所述的方法，其中所述反义链包含式ii表示的结构，其中式ii按5′至3′方向是：
29.如权利要求28所述的方法，其中所述反义链包含式a2表示的结构，其中式a2按5′至3′方向是：
30.如权利要求23-29中任一项所述的方法，其中所述有义链包含式iii表示的结构，其中式iii按5'至3'方向是：
31.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式s1表示的结构，其中式s1按5′至3′方向是：
32.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式s2表示的结构，其中式s2按5′至3′方向是：
33.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式s3表示的结构，其中式s3按5′至3′方向是：
34.如权利要求30所述的方法，其中所述有义链包含式s4表示的结构，其中式s4按5′至3′方向是：
35.如权利要求23、24和30-34中任一项所述的方法，其中所述反义链包含式iv表示的结构，其中式iv按5'至3'方向是：
36.如权利要求35所述的方法，其中所述反义链包含式a3表示的结构，其中式a3按5′至3′方向是：
37.如权利要求23-29、35和36中任一项所述的方法，其中所述有义链包含式v表示的结构，其中式v按5'至3'方向是：
38.如权利要求37所述的方法，其中所述有义链包含式s5表示的结构，其中式s5按5′至3′方向是：
39.如权利要求37所述的方法，其中所述有义链包含式s6表示的结构，其中式s6按5′至3′方向是：
40.如权利要求37所述的方法，其中所述有义链包含式s7表示的结构，其中式s7按5′至3′方向是：
41.如权利要求37所述的方法，其中所述有义链包含式s8表示的结构，其中式s8按5′至3′方向是：
42.如权利要求23、24、30-34和37-41中任一项所述的方法，其中所述反义链包含式vi表示的结构，其中式vi按5'至3'方向是：
43.如权利要求42所述的方法，其中所述反义链包含式a4表示的结构，其中式a4按5′至3′方向是：
44.如权利要求23-29、35、36、42和43中任一项所述的方法，其中所述有义链包含式vii表示的结构，其中式vii按5'至3'方向是：
45.如权利要求44所述的方法，其中所述有义链包含式s9表示的结构，其中式s9按5′至3′方向是：
46.如权利要求23-45中任一项所述的方法，其中所述反义链还包含在所述反义链的5’末端的5’磷稳定部分。
47.如权利要求23-46中任一项所述的方法，其中所述有义链还包含在所述有义链的5’末端的5’磷稳定部分。
48.如权利要求25、46和47中任一项所述的方法，其中所述5'磷稳定部分由式ix-xvi中任一项表示：
49.如权利要求48所述的方法，其中所述5’-磷稳定部分是式xvi中表示的(e)-乙烯基膦酸酯。
50.如权利要求24-49中任一项所述的方法，其中所述核糖核苷的至少50％是2′-o-me核糖核苷，任选地其中所述核糖核苷的至少60％、70％、80％、90％或更多是2′-o-me核糖核苷。
51.如权利要求23-50中任一项所述的方法，其中所述反义链的长度为10至30个核苷酸。
52.如权利要求23-51中任一项所述的方法，其中所述有义链的长度为12至30个核苷酸。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述sirna分子以水溶液的形式或以悬浮液的形式施用。
54.如权利要求1-53中任一项所述的方法，其中所述sirna分子直接施用至所述受试者的脑脊液，直接施用至所述受试者的脊髓，和/或直接施用至所述受试者的脑实质，任选地其中(i)施用至脑部的所述sirna分子具体地施用至皮质、小脑、基底神经节或其它脑部结构和/或(ii)施用至所述基底神经节的所述sirna分子具体地施用至尾状核、壳核、丘脑、苍白球或黑质。
55.如权利要求1-54中任一项所述的方法，其中所述sirna分子经鞘内、脑室内、纹状体内或通过导管插入在小脑延髓池内注射施用。
56.如权利要求1-55中任一项所述的方法，其中所述受试者被诊断为患有亨廷顿病、帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化症(als)、路易体痴呆(dlb)、单纯性自主神经衰竭、路易体吞咽困难、偶发性路易体病(ilbd)、遗传性路易体病、橄榄体脑桥小脑萎缩(opca)、纹状体黑质变性、shy-drager综合征、癫痫或癫痫病症、朊病毒病、或疼痛病症。
57.如权利要求23-56中任一项所述的方法，其中所述反义链具有足以与对应于选自由以下各项组成的组的基因的mrna转录物的一部分杂交的互补性：abca7、abi3、adam10、apoc1、apoe、axl、bin1、c1qa、c3、c9orf72、cass4、ccl5、cd2ap、cd33、cd68、clptm1、clu、cr1、csf1、cst7、ctsb、ctsd、ctsl、cxcl10、cxcl13、dsg2、echdc3、epha1、fabp5、fermt2、fth1、gnas、grn、hbegf、hla-drb1、hla-drb5、htt、ifit1、ifit3、ifitm3、ifnar1、ifnar2、igf1、il10ra、il1a、il1b、il1rap、inpp5d、itgam、itgax、kcnt1、lilrb4、lpl、mapt、mef2c、mmp12、ms4a4a、ms4a6a、msh3、nlrp3、nme8、nos2、picalm、pilra、plcg2、prnp、ptk2b、scimp、scn9a、slc24a4、snca、sorl1、spi1、spp1、sppl2a、tbk1、tnf、trem2、treml2、tyrobp和zcwpw1。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述基因选自由htt、mapt、snca、c9orf72、apoe、scn9a、kcnt1、prnp和msh3组成的组。
59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
60.如权利要求1-59中任一项所述的方法，其中所述治疗性寡核苷酸包含一个或多个具有负电荷的原子并且所述二价阳离子包含两个正电荷，并且其中负电荷与正电荷的比率为0.75至7.5，任选地其中负电荷与正电荷的比率为1.0至2.0。
61.如权利要求60所述的方法，其中
62.如权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为1:10至1:100。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为1:10至1:50，任选地其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为1:18至1:38，任选地其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为1:20至1:25，任选地其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为约1:20，任选地其中所述sirna分子与所述一种或多种二价阳离子的摩尔比为约1:25。
64.如权利要求1-63中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子的浓度为10mm至150mm。
65.如权利要求64所述的方法，其中所述一种或多种二价阳离子的浓度为20mm至150mm，任选地其中所述一种或多种二价阳离子的浓度为20mm至100mm、25mm至150mm、25mm至100mm、30mm至90mm、35mm至85mm、35mm至75mm、40mm至70mm、40mm至65mm、40mm至60mm或40mm至50mm。
66.一种sirna分子，其配制为包含一种或多种二价阳离子的盐。
67.如权利要求66所述的sirna分子，其中所述sirna分子包含多个部分或完全被所述一种或多种二价阳离子饱和的阳离子结合位点。
68.如权利要求67所述的sirna分子，其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为10％至100％，任选地其中所述一种或多种二价阳离子对所述阳离子结合位点的饱和度为20％至100％、30％至100％、40％至100％、50％至100％、60％至100％、70％至100％、80％至100％或90％至100％。
69.如权利要求66-68中任一项所述的sirna分子，其中所述阳离子结合位点位于核苷间键联内，任选地其中所述核苷间键联选自磷酸二酯键联和硫代磷酸酯键联。
70.如权利要求66-69中任一项所述的sirna分子，其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至150皮米，任选地其中所述一种或多种二价阳离子的特征在于离子半径为30皮米至140皮米、40皮米至130皮米、50皮米至120皮米、60皮米至110皮米、60皮米至100皮米或60皮米至90皮米。
71.如权利要求66-70中任一项所述的sirna分子，其中所述一种或多种二价阳离子包括ba2+、be2+、ca2+、cu2+、mg2+、mn2+、ni2+或zn2+或其组合。
72.如权利要求66-71中任一项所述的sirna分子，其中所述一种或多种二价阳离子包含硬路易斯酸。
73.如权利要求66-72中任一项所述的sirna分子，其中所述一种或多种二价阳离子置换来自所述sirna分子的阳离子结合位点的水。
74.如权利要求66-73中任一项所述的sirna分子，其中所述sirna分子是未分支的。
75.如权利要求66-73中任一项所述的sirna分子，其中所述sirna分子是分支的。
76.如权利要求75所述的sirna分子，其中所述sirna分子是二分支、三分支或四分支的，任选地其中所述sirna分子是二分支的。
77.如权利要求66-76中任一项所述的sirna分子，其中所述sirna分子包含反义链和与所述反义链具有互补性的有义链，任选地其中所述反义链和有义链包含交替的2’-o-甲基和2’-氟核糖核苷。
78.如权利要求77所述的sirna分子，其中所述反义链按5′至3′方向具有下式：
79.如权利要求7...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈斯勒，G·A·基恩贝格尔，B·M·D·C·戈丁霍，
申请(专利权)人：阿塔兰塔治疗公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。