【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及epo浓度的定量检测方法，尤其涉及人血清中epo浓度的电化学发光定量检测方法，属于人血清中epo浓度的定量检测领域。
技术介绍
1、epo是促红细胞生成素(erythropoietin)的英文简称，是第一个被发现并应用于临床的造血生长因子。其体外浓度在0·05～0·1u/ml时即具有剂量依赖效应，是一种强有力的造血因子(郭葆玉.基因工程药学.上海：第二军医大学出版社 2000.181－182)。
2、临床上epo不仅用于治疗肾性贫血而且已经被应用于各种慢性贫血、恶性肿瘤、免疫疾病及aids等伴随的贫血的治疗。尽管输血由于起效快、价格低等有利因素在临床治疗中被广泛应用但是它也存在诸多潜在危险如感染、输血反应严重时甚至引起死亡。
3、为了提高运动成绩人们将重组人红细胞生成素(rhuepo)应用到竞技体育中，然而大剂量使用rhuepo给运动员的健康带来了严重损害。从采用间接法测定5个血液学的参数指标后代入公式计算 结果再与标准值对照进行判定(卢庄 蔡耘 钱小红.肽类兴奋剂检测技术进展.中国运动医学杂志2004 23(5)：537－545.)到直接运用电泳方法区分外源性和内源性epo该物质的检测方法日趋成熟。但是目前应用于常规的检测方法仍存在很大的改善空间，如提高检测效率、缩短检测时间等。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种采用电化学发光方法定量检测人血清中epo浓度的方法；
2、本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的
3、一种人血清中epo浓度的电化学发光定量检测方法，包括：
4、(1)将biotin-anti(hu)epo抗体用稀释液稀释后包被在msd small spotstreptavidin板上，孵育；
5、(2)用洗板缓冲液清洗msd small spot streptavidin板，甩干拍板除去残留洗液；
6、(3)将稀释后的待测样品加入msd small spot streptavidin板中，孵育；
7、(4)洗板后，稀释后的sulfo tag-anti(hu)-epo加入msd small spotstreptavidin板中，孵育；
8、(5)用洗板缓冲液清洗msd small spot streptavidin板，甩干拍板除去残留洗液；
9、(6)将2×read buffer加至msd small spot streptavidin板中，10min内在msd读板机上读板；通过拟合的标准曲线回算样品中epo的浓度。
10、本专利技术的一种优选的实施方案，步骤(1)中将biotin-anti(hu)epo抗体用稀释液稀释后按25μl/孔加入msd small spot streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
11、本专利技术的一种优选的实施方案，步骤(3)中将稀释后的待测样品按照50μl/孔加入msd small spot streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
12、本专利技术的一种优选的实施方案，步骤(4)中洗板后将稀释后的sulfo tag-anti(hu)-epo按照50μl/孔加至msd small spot streptavidin板，25℃孵育60mins±5mins。
13、本专利技术的一种优选的实施方案，步骤(6)中msd读板机上用仪器响应值获取软件discovery worbcnchv4.0.12.1获取数据；用数据处理软件walson lims 7.6对数据进行处理并拟合得到标准曲线回算样品中epo的浓度，其中，标准曲线回归方程的参数为五参数，权重因子为：1/y2；
14、每条标准曲线至少7个校正标样的复孔回算浓度的变异系数(％cv)要求小于等于20.0％，回算浓度的相对误差(％re)要求在±20.0％以内；
15、其中回算浓度的变异系数(％cv)和回算浓度的相对误差(％re)的计算公式分别如下：
16、变异系数(％cv)＝复孔回算浓度标准偏差/平均实测浓度×100％；
17、相对误差(％re)＝(回算浓度-理论浓度)/理论浓度×100％。
18、本专利技术提供的人血清中epo浓度的电化学发光定量检测方法，其准确度和精密度评价满足方案中规定的接受标准，该方法具有耐用性，在健康人血清中没有基质效应，溶血和高脂对该定量检测方法没有干扰，人血清样品中已验证的最高稀释倍数为243，没有观察到钩状效应的存在，室温以及2-8℃稳定性好，具有良好的冻融稳定性和长期稳定性。
19、表1本申请中涉及的缩略术语
20、 英文缩写 英文全称 中文含义 alq above the limit of quantitation 超过定量上限 blq below the limit of quantitation 低于定量下限 coa certificate of analysis 检验报告书 cv coefficient of variation 变异系数 gcp good clinical practice 药物临床试验质量管理规范 glp good laboratory practice 药物非临床研究质量管理规范 hqc high qc 高浓度质控样品 lloq lower limit of quantitation 定量下限 lqc low qc 低浓度本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人血清中EPO浓度的电化学发光定量检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中将Biotin-anti(hu)EPO抗体用稀释液稀释后按25μl/孔加入MSD Small Spot Streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
3.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(3)中将稀释后的待测样品按照50μl/孔加入MSD Small Spot Streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
4.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(4)中洗板后将稀释后的Sulfo tag-anti(hu)-EPO按照50μl/孔加至MSD Small Spot Streptavidin板，25℃孵育60mins±5mins。
5.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(6)中MSD读板机上用仪器响应值获取软件Discovery WorbcnchV4.0.12.1获取数据；用数
6.根据权利要求5所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，每条标准曲线至少7个校正标样的复孔回算浓度的变异系数要求小于等于20.0％，回算浓度的相对误差要求在±20.0％以内。
7.根据权利要求6所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，所述回算浓度的变异系数或回算浓度的相对误差的计算公式分别如下：
...【技术特征摘要】
1.一种人血清中epo浓度的电化学发光定量检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中将biotin-anti(hu)epo抗体用稀释液稀释后按25μl/孔加入msd small spot streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
3.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(3)中将稀释后的待测样品按照50μl/孔加入msd small spot streptavidin板中，25℃孵育60mins±5mins。
4.根据权利要求1所述的电化学发光定量检测方法，其特征在于，步骤(4)中洗板后将稀释后的sulfo tag-anti(hu)-epo按照50μl/孔加至msd small spot...
【专利技术属性】
技术研发人员：解福生，胥永标，王菲，徐丽，刘海峰，庞甲佩，张志栋，史雪松，杨延茹，
申请(专利权)人：华润昂德生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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