【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及多核苷酸及包含所述多核苷酸的医药组合物。
技术介绍
1、细胞中的遗传信息通过下述方式传递：以dna为模板，利用rna合成酶来转录信使rna(以下，称为“mrna”)；核糖体与经转录的单链mrna结合，通过翻译而合成蛋白质。该传递形式在分子生物学中被称为“中心法则”，是原核生物及真核生物两者共通的基本原理。
2、作为遗传信息传递的中间物质的mrna具有用于被核糖体直接识别且翻译成蛋白质的碱基序列信息和结构。
3、近年来，对核酸医药作为下一代医药的期待高涨。作为mrna的人工多核苷酸(以下，在
技术介绍
一栏中，称为“人工mrna”)通过表达增强或表达亢进而产生所期望的肽及蛋白质，能够用作蛋白质补充疗法型核酸医药或疫苗疗法型核酸医药。
4、然而，已知若将仅由天然碱基构成的人工mrna从外部导入细胞内，则因与细胞内的toll样受体(tlr3、tlr7、tlr8、rig-i等)结合而迅速引起免疫响应，导致炎症反应及蛋白质翻译量的下降(非专利文献1)。为了在细胞内表达蛋白质，需要设法以某种形式降低人工mrna自身的免疫反应性、并且不使翻译量下降。另外，仅由天然碱基构成的rna对于核酸分解酶脆弱，因此从赋予稳定性的观点考虑，也需要导入修饰核苷酸(非专利文献2)。修饰核苷酸中，包含2’-o-甲基修饰rna、2’-f化rna、2’-o-甲氧基乙基修饰rna、lna等交联型核酸等糖修饰核苷酸的多核苷酸显示在降低核酸医药的免疫反应性、赋予对核酸分解酶的耐受性方面均有效(非专利文献3)。
5、
6、在将人工mrna作为药品的方面的也持续报道了一定的成果，例如，非专利文献5中报道在以黑色素瘤患者为对象的人工mrna癌症疫苗的临床试验中，从开始施予癌症疫苗起转移发病率大幅减少。
7、然而，这些临床应用的人工mrna通过ivt来制作。由ivt制作的人工mrna存在以下2个问题。第一，出于降低免疫反应性、赋予对核酸分解酶的稳定性的目的而导入的修饰核苷酸的导入位置无法控制。专利文献1中公开了下述事例：就通过ivt而导入有2’-f化rna的人工mrna而言，肽翻译能力减弱·消失。第二，除了被ivt中使用的rna合成酶识别为底物的修饰核苷酸以外，无法导入。另外，专利文献1中公开了包含2’-o-甲基修饰rna的人工mrna难以通过使用了通常rna聚合酶的ivt反应来制备。
8、因此，就通过ivt导入修饰核苷酸而制作的人工mrna而言，难以说对于修饰核苷酸的位置及种类进行了充分的研究。
9、报道了利用将多个rna化学连结的技术来人工合成mrna的方法(非专利文献6、7)。使用该方法时，能够将糖修饰核苷酸导入至包含翻译区及非翻译区的人工mrna的任意位置。另外，专利文献2及3中公开了下述概念：通过使用将多个rna化学连结的技术来合成人工mrna的方法，在mrna的非翻译区导入糖修饰核苷酸而稳定化。非专利文献6及7中公开了确认到在mrna的翻译区中的一处导入了2’-o-甲基修饰rna的人工mrna的肽翻译能力。其另一方面，还公开了肽翻译能力由于糖修饰核苷酸的导入位置而显著减弱(非专利文献6及7)。
10、由此，为了作为人工mrna核酸医药实现充分低的免疫反应性、高的稳定性和优异的翻译能力，与修饰核苷酸的修饰率、位置及种类相关的进一步知识是必要的。
11、现有技术文献
12、专利文献
13、专利文献1：国际公开第2014/093574号
14、专利文献2：国际公开第1999/014346号
15、专利文献3：国际公开第2016/022914号
16、非专利文献
17、非专利文献1：nature reviews drug discovery、第13卷、759-780页(2014)
18、非专利文献2：nature biotechnology、第35卷、第3号、238-248页(2017)
19、非专利文献3：drug discovery today、第13卷、第19/20号、842-855页(2008)
20、非专利文献4：nature biotechnology、第35卷、第3号、193-197页(2017)
21、非专利文献5：nature、第547卷、第7662号、222-226页(2017)
22、非专利文献6：nucleic acids research、第44卷、第2号、852-862页(2015)
23、非专利文献7：genes、第10卷、第2号、84页(2019)
技术实现思路
1、专利技术所要解决的课题
2、本专利技术的目的在于提供具有优异的翻译能力的多核苷酸。
3、用于解决课题的手段
4、本申请的专利技术人进行了深入研究，结果发现构成3’-非翻译区中的多聚a链的核苷酸的65％以上为糖修饰核苷酸时，显示出优异的翻译能力。
5、本专利技术包含以下的实施方式。
6、[1]多核苷酸，其包含：
7、从起始密码子至终止密码子的翻译区；
8、5’侧非翻译区；及
9、多聚a链，
10、构成上述多聚a链的核苷酸的65％以上为糖修饰核苷酸。
11、[2]如[1]所述的多核苷酸，其中，构成上述多聚a链的核苷酸全部为糖修饰核苷酸。
12、[3]如[1]或[2]所述的多核苷酸，其中，上述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
13、[化学式1]
14、
15、[4]如[1]～[3]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
16、[化学式2]
17、
18、[5]如[1]～[4]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述多聚a链包含至少一个磷酸修饰核苷酸。
19、[6]如[1]～[5]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述多聚a链的自3’末端起第1～2个核苷酸、第1～3个核苷酸、第1～4个核苷酸、或第1～5个核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
20、[7]如[1]～[6]中任一项所述的多核苷酸，其中，构成上述多聚a链的全部核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
21、[8]如[1]～[7]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述多聚a链为2～40个碱基长度。
22、[9]如[1]～[8]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述5’侧非翻译区的核苷酸各自独立地选自2’-脱氧核糖核苷酸、间隔子(spacer)修饰或糖修饰核苷酸。
23、[10]如[1]～[9]中任一项所述的多核本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.多核苷酸，其包含：
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中，构成所述多聚A链的核苷酸全部为糖修饰核苷酸。
3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其中，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
4.如权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸，其中，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
5.如权利要求1～4中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚A链包含至少一个磷酸修饰核苷酸。
6.如权利要求1～5中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚A链的自3’末端起第1～2个核苷酸、第1～3个核苷酸、第1～4个核苷酸、或第1～5个核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
7.如权利要求1～6中任一项所述的多核苷酸，其中，构成所述多聚A链的全部核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
8.如权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚A链为2～40个碱基长度。
9.如权利要求1～8中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的核苷酸各自独立地选自2’-脱氧核糖核苷酸、间隔子修饰
10.如权利要求1～9中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的自5’末端起第1～6个核苷酸为糖修饰核苷酸，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部为以下的结构，
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中，在所述5’侧非翻译区的5’末端的5’侧还包含由1～10个糖非修饰核苷酸形成的部分。
12.如权利要求1～11中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的除了自5’末端起第1～6个核苷酸外的核苷酸包含2’-脱氧核糖核苷酸及/或间隔子修饰。
13.如权利要求9或12所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区包含间隔子修饰，所述间隔子修饰各自独立地选自以下的结构中的任一者，
14.如权利要求1～13中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的自5’末端起第1～2个核苷酸、第1～3个核苷酸、第1～4个核苷酸、或第1～5个核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
15.如权利要求1～14中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区包含碱基修饰核苷酸，所述碱基修饰核苷酸的修饰碱基部为以下的结构，
16.如权利要求1～15中任一项所述的多核苷酸，其中，所述翻译区包含至少两个第1个核苷酸为糖修饰核苷酸的密码子。
17.如权利要求1～16中任一项所述的多核苷酸，其中，所述翻译区包含4个以上的密码子，全部密码子的第1个核苷酸为糖修饰核苷酸。
18.如权利要求1～16中任一项所述的多核苷酸，其中，所述翻译区中，除了终止密码子外的全部密码子的第1个核苷酸为糖修饰核苷酸，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部为以下的结构，
19.如权利要求1～18中任一项所述的多核苷酸，其中，所述翻译区包含2000个以下的密码子。
20.如权利要求1～19中任一项所述的多核苷酸，其中，所述终止密码子的全部核苷酸为糖修饰核苷酸。
21.如权利要求1～20中任一项所述的多核苷酸，其包含以下的结构，
22.医药组合物，其包含权利要求1～21中任一项所述的多核苷酸。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.多核苷酸，其包含：
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中，构成所述多聚a链的核苷酸全部为糖修饰核苷酸。
3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其中，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
4.如权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸，其中，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部各自独立地选自以下的结构中的任一者，
5.如权利要求1～4中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚a链包含至少一个磷酸修饰核苷酸。
6.如权利要求1～5中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚a链的自3’末端起第1～2个核苷酸、第1～3个核苷酸、第1～4个核苷酸、或第1～5个核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
7.如权利要求1～6中任一项所述的多核苷酸，其中，构成所述多聚a链的全部核苷酸通过硫代磷酸酯连结。
8.如权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多聚a链为2～40个碱基长度。
9.如权利要求1～8中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的核苷酸各自独立地选自2’-脱氧核糖核苷酸、间隔子修饰或糖修饰核苷酸。
10.如权利要求1～9中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非翻译区的自5’末端起第1～6个核苷酸为糖修饰核苷酸，所述糖修饰核苷酸的修饰糖部为以下的结构，
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中，在所述5’侧非翻译区的5’末端的5’侧还包含由1～10个糖非修饰核苷酸形成的部分。
12.如权利要求1～11中任一项所述的多核苷酸，其中，所述5’侧非...
【专利技术属性】
技术研发人员：岩井宏徒，本间正一，爱宕孝之，山本润一郎，阿部洋，木村康明，
申请(专利权)人：协和麒麟株式会社，
类型：发明
国别省市：
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