【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养领域，特别是涉及一种鸭生殖干细胞分离培养的方法。
技术介绍
1、生殖干细胞是一种能够传递遗传物质的特殊类型的干细胞，能够分化为各种类型的生殖细胞。雄性动物睾丸内已经证实有生殖系干细胞，即精原干细胞(spermatogonialstem cells，sscs)，它具有高度的自我更新和分化潜能，即可以通过分裂进行数量的增殖，也能通过分化产生精子。传统观点认为，在雌性动物出生时即存在固定数量的卵母细胞，并随着卵巢发育逐渐减少。但近年研究发现卵巢中存在有丝分裂活性的生殖干细胞，从中分离的细胞，即卵原干细胞(oogonial stem cells，oscs)可以在体外增殖，这为雌性生殖领域提供了新的研究方向。
2、目前的研究对于精原干细胞的相关研究较多，根据组织结构和细胞特性、细胞表面分子标记等特点，精原干细胞分离纯化方法主要有两步酶消化法、差速贴壁法、流式细胞分选法、percoll密度梯度离心法和免疫磁珠分选法等，上述方法除两步酶消化法与差速贴壁法外均存在成本高和操作难的问题；两步酶消化法在使用中存在两个问题，一是该方法消化时间久，对细胞损伤大；二是该方法不太适用于体积较小的睾丸组织；差速贴壁法则需要根据物种特性决定，不同物种贴壁纯化细胞的时间不同。卵原干细胞现有的分离方法主要为磁珠分选和荧光激活分选，存在成本高、操作难的问题，并且在操作过程中不可避免地会造成目的细胞的损耗。因此，现阶段需要开发一种高效便捷、低成本的分离纯化方法来快速获得大量且状态良好的鸭生殖干细胞，以用于更深入的研究和应用。
<...【技术保护点】
1.一种鸭生殖干细胞分离培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：分离雏鸭的性腺后，采用一步酶消化法消化性腺，对消化后所得生殖干细胞进行纯化培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述雏鸭为1日龄雏鸭。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述性腺包括睾丸和/或卵巢。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一步酶消化法包括以3-5对性腺为一组，与20μL消化液混合，进行消化的步骤。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述消化液为胰酶。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述消化的条件参数为37℃水浴消化6-8min后，利用细胞培养液终止消化。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纯化培养的温度为37℃，CO2的体积百分含量为5％，时间为3d。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在纯化培养过程中，每隔1.5d更换一次培养液；
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离雏鸭的性腺包括将雏鸭的性腺组织与预热的含有双抗的PBS缓冲液
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述双抗包括青霉素和链霉素。
...【技术特征摘要】
1.一种鸭生殖干细胞分离培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：分离雏鸭的性腺后，采用一步酶消化法消化性腺，对消化后所得生殖干细胞进行纯化培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述雏鸭为1日龄雏鸭。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述性腺包括睾丸和/或卵巢。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一步酶消化法包括以3-5对性腺为一组，与20μl消化液混合，进行消化的步骤。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述消化液为胰酶。
6.根据权利要求4所述的方...
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