本发明专利技术涉及小桐子快速繁殖的方法，小桐子种子消毒后在无菌条件下剥取种胚，接种于培养基，光照培养１个月；将子叶或真叶切割成的小块，接种于诱导培养基ＭＳ＋ＴＤＺ０．１－０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０１－０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋０．６－０．８％琼脂中，培养２周产生愈伤组织，继续培养２周，分化出不定芽；将不定芽转入增殖培养基ｇｌ＋ＢＡ０．５－１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５－１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０１－０．１ｍｇ／Ｌ＋ＡｇＮＯ３１－５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２５～３５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂中，生成组培丛芽；２－３ｃｍ的芽切下，接入发根培养基进行生根培养，获组培生根苗。本发明专利技术直接诱导子叶或组培苗叶片产生愈伤分化出不定芽，愈伤组织分化不定芽的过程，不需要更换培养基配方，且分化频率达９０％，大大缩短了不定芽的诱导过程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，尤其是一种涉及以组培苗的叶片为诱导材料 的植物苗木的繁育技术。
技术介绍
小桐子(/airoMa curcas L.)又叫麻疯树，是大戟科麻疯树属植物。多年生，小 乔木或灌木。主要分布在热带和亚热带地区，我国在广东、广西、云南、贵州、福建、海南等省 广为种植，或野生成群系。其种子含油量高，可达40飞0%，是世界公认为有发展前景的生物 能源植物。其油脂经提取和变性后即能成为柴油。这种生物柴油可生物分解，对环境无害， 较矿物柴油更清洁和高效。在目前能源日趋紧缺的形势下，麻疯树作为一种可再生的生物 能源，倍受人们的关注。许多国家已经开展这方面的研究，我国政府较早就将麻疯树的发展 利用和研究列入国家的重大科研开发项目。此外，麻疯树还是一种药用植物，有多种药用成 分，也是有良好杀虫效果的农药原料。麻疯树耐干旱、土壤贫瘠，繁殖方便，可种子直播，可 扦插繁殖，种植简便，可在非耕地带大量种植，是改善生态环境、开发贫瘠地区，农民增收的 极好树种。目前，利用组织培养技术进行小桐子的快速繁殖方面的报道较多(秦虹，宋松泉， 龙春林等。小桐子的组织培养和植株再生[J].云南植物研究，2006，28 (6) =649-652.； 麻疯树茎段离体培养及快速繁殖研究[J].广西农业科学，2006，37 (3):221-223.;陆伟 达，魏琴，唐琳等。麻疯树愈伤组织的诱导及快速繁殖[J].应用与环境生物学报，2003， 9(2): 127-130.；林娟，唐琳，陈放。麻疯树的组织培养及植株再生[J].植物生理学通讯， 2002,38 (3) 252.等)，但存在如下问题1、均采用细胞分裂素6-苄基腺嘌呤(6-BA)和生长素吲哚丁酸(IBA)或萘乙酸(NAA)不 同浓度的组合诱导愈伤和不定芽的分化。从诱导愈伤到不定芽的形成所需时间长，约6 12 周；2、以上报道中，均采用不同的外植体(子叶、下胚轴、胚芽、幼龄树的嫩叶片和叶柄、茎 段等)，均能诱导愈伤组织，但愈伤组织分化成不定芽的频率差别极大，为(Γ80% ；3、芽增殖速度慢，不能满足工厂化生产的需求。采用以上方法，进行愈伤组织诱导分化成苗，个体繁殖速度不够理想，为解决这 一问题，有研究者进行了促进麻疯树腋芽分枝的办法进行快速繁殖获得成功(李化，曾妮， 贾勇炯等。麻疯树的促腋芽分枝快繁及生根诱导[J].四川大学学报，2006，43(5): 1116-1120)。这一途径，虽然使芽增殖的速度大大加快，但仍无法避免因多次继代使植物体 内细胞分裂素累积，导致组培苗生长势变弱的情况发生，还会使获得的组培苗存在生根困 难的问题，无根或根系发育不良的组培苗很难移栽成活。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种，具有理想的高3分化频率。本专利技术解决上述技术问题所采取的技术方案是一种，依 序按下述步骤进行组织培养第一步将小桐子的种子消毒后，在无菌条件下剥取种胚，接种于1/2MS+蔗糖25 35g/ L+0. 6 0. 8%琼脂的培养基中，pH5. 8 6. 2，进行光照培养28 35天，获得无菌实生苗；第二步将无菌实生苗的子叶或真叶切割成0. Γ0. 6cm2的小块，接种于诱导培养基中， 所述的诱导培养基为 MS+TDZ0. Γ0. 5mg/L+IBA0. θΓθ. lmg/L+ 蔗糖 25 35g/L+0. 6 0. 8% 琼 脂，pH5. 8飞.2，培养12 16天产生愈伤组织，继续培养12 16天分化出不定芽；第三步将不定芽转入增殖培养基进行继代增殖培养，所述的增殖培养基为 gl+BAO. 5 1. 0mg/L+KT0. 5 1. 0mg/L+IBA0. θΓθ. lmg/L+AgN03 1 5mg/L+ 蔗糖 25 35g/ L+0. 6 0· 8%琼脂，ρΗ5· 8 6· 2，生成组培丛芽；第四步将组培丛芽中2 3cm的芽切下，接入发根培养基进行生根培养，发根培养基为 MS+NAA0. 5 1. 5 mg/L+ 蔗糖 15 25g/L+0. 6 0. 8% 琼脂，ρΗ5· 8 6. 2，3 7 天后转入 MS+ 蔗糖 15 25g/L+0. 6 0. 8%琼脂的培养基中，经10 20天生根，培养28 35天获得组培生根苗，进行 移栽。在上述方案的基础上，取生长健壮的组培生根苗的叶片，重复步骤二至步骤四，以 替代经过多次继代后生长势头变弱的组培丛芽。在上述方案的基础上，所述的种子消毒方法为在7(Γ80%的酒精中浸泡2 3分钟， 在无菌条件下剥去种皮后再用70、0%的酒精消毒2 3分钟，然后用0. 05%升汞消毒15 25 分钟，完毕后用无菌水冲洗至少4遍，最后用无菌纱布吸干多余的水分。在上述方案的基础上，所述的种子消毒方法为所述光照培养的条件为培养室 温度25士2°C、光照强度150(T2000LX，光照时间每天1(Γ 4小时。本专利技术的有益效果是1、用细胞分裂素赛苯隆(TDZ)O.Γ0. 5mg/L和生长素吲哚丁酸(IBA) 0. 0广0. lmg/L组 合，直接诱导子叶或组培苗叶片产生愈伤分化出不定芽，愈伤组织分化不定芽的过程，不需 要更换培养基配方。此方法1个月即可分化出不定芽，而且分化频率达90%，大大缩短了不 定芽的诱导过程；2、采用以上相同配方，也能使组培生根苗的叶片分化出不定芽，经增殖培养后，可替代 经过多次继代后生长势变弱的组培丛芽，如此形成生产循环，源源不断的生产出高质量的 组培种苗。具体实施例方式一种，依序按下述步骤进行组织培养第一步将小桐子种子在75%的酒精中浸泡2分钟，在无菌条件下剥去种皮后再用75% 的酒精消毒2分钟，然后用0. 05%升汞消毒20分钟，完毕后用无菌水冲洗6遍，最后用无菌 纱布吸干多余的水分；在无菌条件下剥取种胚，然后接种于1/2MS+蔗糖30g/L+0. 6-0. 8%琼 脂的培养基中，PH5. 8飞.2，进行光照培养，培养室温度25士2°C、光照强度150(T2000LX，光 照时间每天1(Γ14小时，培养2周，获得无菌实生苗；第二步将无菌苗的子叶或真叶切割成0. 5cm2的小块，接种于诱导培养基中，所述的诱导培养基为 MS+TDZ0. Γ0. 5mg/L+IBA0. θΓθ. lmg/L+ 蔗糖 30g/L+0. 6 0. 8% 琼脂， PH5. 8飞.2，培养2周产生愈伤组织，出愈率100%，再培养2周，分化出不定芽，分化频率 90%，平均每块外植体可产生6. 3个不定芽；第三步将不定芽转入增殖培养基进行继代增殖培养，所述的增殖培养基为 gl+BAO. 5 1. 0mg/L+KT0. 5 1. 0mg/L+IBA0. θΓθ. lmg/L+AgN03 1 5mg/L+ 蔗糖 30g/ L+0. 6 0· 8%琼脂，ρΗ5· 8 6· 2，生成组培丛芽，继代1次，增殖比例为1:2;第四步将继代增殖培养过程获得的组培丛芽中2 3cm的芽切下，接入发根培养基，所 述的发根培养基为MS+NAA0. 5 1. 5 mg/L+蔗糖20g/L+0. 6 0. 8%琼脂，pH5. 8 6. 2，3 7天后 转入MS+蔗糖20g/L+0. 6 0. 8%琼脂的培养基中，经10 20天生根，生根率90%，1个月即可 移栽。 取生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种小桐子快速繁殖的方法，依序按下述步骤进行组织培养：第一步：将小桐子的种子消毒后，在无菌条件下剥取种胚，接种于１／２ＭＳ＋蔗糖２５～３５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂的培养基中，ｐＨ５．８～６．２，进行光照培养２８～３５天，获得无菌实生苗；第二步：将无菌实生苗的子叶或真叶切割成０．４～０．６ｃｍ２的小块，接种于诱导培养基中，所述的诱导培养基为ＭＳ＋ＴＤＺ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０１～０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２５～３５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂，ｐＨ５．８～６．２，培养１２～１６天产生愈伤组织，继续培养１２～１６天分化出不定芽；第三步：将不定芽转入增殖培养基进行继代增殖培养，所述的增殖培养基为ｇｌ＋ＢＡ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０１～０．１ｍｇ／Ｌ＋ＡｇＮＯ３１～５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２５～３５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂，ｐＨ５．８～６．２，生成组培丛芽；第四步：将组培丛芽中２～３ｃｍ的芽切下，接入发根培养基进行生根培养，发根培养基为ＭＳ＋ＮＡＡ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖１５～２５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂，ｐＨ５．８～６．２，３～７天后转入ＭＳ＋蔗糖１５～２５ｇ／Ｌ＋０．６～０．８％琼脂的培养基中，经１０～２０天生根，培养２８～３５天获得组培生根苗，进行移栽。...
【技术特征摘要】
一种小桐子快速繁殖的方法，依序按下述步骤进行组织培养第一步将小桐子的种子消毒后，在无菌条件下剥取种胚，接种于1/2MS+蔗糖25～35g/L+0.6～0.8%琼脂的培养基中，pH5.8～6.2，进行光照培养28～35天，获得无菌实生苗；第二步将无菌实生苗的子叶或真叶切割成0.4～0.6cm2的小块，接种于诱导培养基中，所述的诱导培养基为MS+TDZ0.1～0.5mg/L+IBA0.01～0.1mg/L+蔗糖25～35g/L+0.6～0.8%琼脂，pH5.8～6.2，培养12～16天产生愈伤组织，继续培养12～16天分化出不定芽；第三步将不定芽转入增殖培养基进行继代增殖培养，所述的增殖培养基为gl+BA0.5～1.0mg/L+KT0.5～1.0mg/L+IBA0.01～0.1mg/L+AgNO3 1～5mg/L+蔗糖25～35g/L+0.6～0.8%琼脂，pH5.8～6.2，生成组培丛芽；第四步将组培丛芽中2～3cm的芽切下，接入发根培养基进行生根培养，...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋学孟，苏敏，张承妹，陈权，殷玥，唐寅，
申请(专利权)人：上海世华生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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