【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域。具体地，本专利技术涉及用于检测膀胱癌生物标志物甲基化水平的引物组、探针组、试剂盒及方法。
技术介绍
1、膀胱癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，在男性中尤为突出。据世界卫生组织（who）的数据显示，膀胱癌在全球的发病率呈现上升趋势，尤其在一些发展中国家和地区。据国际癌症研究机构（iarc）的统计，膀胱癌是全球第十五常见的癌症，每年有数十万新病例被诊断出来。同时，膀胱癌也是导致许多癌症相关死亡的原因之一。
2、传统诊断膀胱癌的方法包括尿液细胞学检查、膀胱镜检查和影像学检查等，然而这些方法存在一定的局限性和不足之处：尿液细胞学检查虽然是一种无创检测方法，但其准确性和灵敏度有限，易受到样本收集和操作者经验的影响，尤其对于早期膀胱癌的诊断具有挑战性。膀胱镜检查虽然具有较高的诊断准确性，但其侵入性和不适应部分患者的特点，限制了其临床应用，同时也存在着一定的并发症风险。影像学检查可以提供膀胱癌的肿瘤形态学信息，但对于早期病变的诊断准确性有限，且无法提供组织学信息。因此，为了提高膀胱癌的早期诊断率和准确性，迫切需要一种无创的、准确性高、灵敏度和特异性强的诊断方法来克服传统诊断方法的局限性和不足之处。
3、基因甲基化技术作为一种新兴的无创检测方法，通过分析体液样本中的dna甲基化模式来评估肿瘤相关基因的表达状态，为肿瘤的早期诊断和疾病监测提供了新的可能性。基因甲基化的变化在肿瘤中具有较高的特异性和稳定性，因此成为肿瘤诊断和监测的重要生物标志物。此外，基于基因甲基化技术的无创检测方法还能够提供更为便
4、目前，将基因甲基化技术应用于膀胱癌的诊断仍有待研究。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种简单快速、成本低、准确性高、无创的膀胱癌检测方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案来实现的：
3、本专利技术的专利技术人发现， znf101基因是一个与膀胱癌患病显著相关的基因，该基因甲基化位点的甲基化程度与膀胱癌的发生有较强的相关性，且目前尚未发现 znf101基因在膀胱癌检测方面的相关研究。为此，本专利技术首次将 znf101基因用作膀胱癌检测的生物标志物。进一步地，专利技术人发现，将 znf101基因与 twist1基因联合作为判断膀胱癌发生的生物标志物，可以更好地提高检测的准确性、灵敏度和特异性，对于膀胱癌的早期诊断具有重要意义。
4、在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种生物标志物。根据本专利技术的实施例，所述生物标志物包括 twist1基因和 znf101基因。
5、本专利技术的专利技术人发现， twist1基因和 znf101基因的甲基化水平与膀胱癌的发生存在显著相关性，通过对这两个基因的甲基化水平进行检测，可以准确地诊断膀胱癌，具有准确性高、灵敏度高和特异性高等优点，并且，检测方法简单快速、成本低、取样方便，可实现无创性膀胱癌早期诊断，应用前景好。
6、进一步地，专利技术人提出了另一种生物标志物，所述生物标志物包括 twist1基因目的区域的甲基化位点和 znf101基因目的区域的甲基化位点；以grch38.p14为参考基因组，所述 twist1基因目的区域选自负链chr7:19117910-19118035，所述 znf101基因目的区域选自正链chr19:19670694-19670850。
7、根据本专利技术的实施例，所述 twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr7:19117910、chr7:19117913、chr7:19117918、chr7:19117920、chr7:19117925、chr7:19117973、chr7:19117987、chr7:19118012和chr7:19118028；所述 znf101基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr19:19670699、chr19:19670714、chr19:19670729、chr19:19670833和chr19:19670843。
8、本专利技术的专利技术人发现，上述 twist1基因目的区域的甲基化位点和 znf101基因目的区域的甲基化位点的甲基化程度与膀胱癌患病存在显著相关性，通过对上述甲基化位点的甲基化水平进行检测，可以实现准确诊断膀胱癌的目的，具有准确性高、灵敏度高和特异性强等优点。
9、在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了检测前面所述生物标志物的试剂在制备检测产品中的应用。根据本专利技术的实施例，所述检测产品用于诊断膀胱癌。由此，利用本专利技术的试剂盒可以检测 twist1基因和 znf101基因甲基化水平，从而有助于诊断膀胱癌。
10、需要说明的是，本专利技术的检测试剂并不限定必须为液体形式。
11、根据本专利技术的实施例，所述检测生物标志物的试剂包括引物组和/或探针组；所述引物组包括：第一引物组，所述第一引物组中引物的核苷酸序列分别为seq id no：1和2所示；第二引物组，所述第二引物组中引物的核苷酸序列分别为seq id no：4和5所示；所述探针组包括：第一探针，所述第一探针的核苷酸序列为seq id no：3所示；第二探针，所述第二探针的核苷酸序列为seq id no：6所示。
12、gttatttcggatggggttgttatc（seq id no.1）
13、cgacgaacgcgaaacgat（seq id no.2）
14、atcgttttttgggttgcg（seq id no.3）
15、attgtcgttagttgtgattgc（seq id no.4）
16、tacaaacgtaaaccatcgc（seq id no.5）
17、ttgtattgaacgatagagtgagat（seq id no.6）
18、根据本专利技术的实施例，所述第一探针的5’端标记有fam荧光报告基团，3’端标记有mgb荧光淬灭基团；所述第二探针的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测生物标志物的试剂在制备检测产品中的应用，其特征在于，所述检测产品用于诊断膀胱癌；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：Chr7:19117910、Chr7:19117913、Chr7:19117918、Chr7:19117920、Chr7:19117925、Chr7:19117973、Chr7:19117987、Chr7:19118012和Chr7:19118028；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测生物标志物的试剂包括引物组和/或探针组；
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述第一探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有MGB荧光淬灭基团；
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测产品包括试剂盒、试纸条或芯片。
6.一种引物组，其特征在于，所述引物组用于检测生物标志物，所述生物标志物包括Twist1基因目的区域的甲基化位点和ZNF101基因目的区域的甲基化位点；
7.根据权利要求6所述的引物
8.一种探针组，其特征在于，所述探针组用于检测生物标志物，所述生物标志物包括Twist1基因目的区域的甲基化位点和ZNF101基因目的区域的甲基化位点；
9.根据权利要求8所述的探针组，其特征在于，所述Twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：Chr7:19117910、Chr7:19117913、Chr7:19117918、Chr7:19117920、Chr7:19117925、Chr7:19117973、Chr7:19117987、Chr7:19118012和Chr7:19118028；
10.根据权利要求8所述的探针组，其特征在于，所述第一探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有MGB荧光淬灭基团；
11.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测生物标志物，所述生物标志物包括Twist1基因目的区域的甲基化位点和ZNF101基因目的区域的甲基化位点；
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述Twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：Chr7:19117910、Chr7:19117913、Chr7:19117918、Chr7:19117920、Chr7:19117925、Chr7:19117973、Chr7:19117987、Chr7:19118012和Chr7:19118028；
13.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括下列至少一种：样本收集容器、核酸提取试剂、甲基化转化试剂、荧光定量PCR检测试剂、检测ACTB基因的引物和检测ACTB基因的探针。
14. 根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述样本收集容器的容量为1~10mL；
15.一种膀胱癌生物标志物甲基化水平检测的非诊断方法，其特征在于，所述非诊断方法包括：
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述Twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：Chr7:19117910、Chr7:19117913、Chr7:19117918、Chr7:19117920、Chr7:19117925、Chr7:19117973、Chr7:19117987、Chr7:19118012和Chr7:19118028；
17.一种用于诊断膀胱癌的装置，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的装置包括：
18.根据权利要求17所述的装置，其特征在于，所述Twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：Chr7:19117910、Chr7:19117913、Chr7:19117918、Chr7:19117920、Chr7:19117925、Chr7:19117973、Chr7:19117987、Chr7:19118012和Chr7:19118028；
19.根据权利要求17所述的装置，其特征在于，所述检测单元中含有检测装置；
20.一种用于诊断膀胱癌的分析系统，其特征在于，所述用于诊断膀胱癌的分析系统包括：
21.根据权利要求20...
【技术特征摘要】
1.检测生物标志物的试剂在制备检测产品中的应用，其特征在于，所述检测产品用于诊断膀胱癌；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr7:19117910、chr7:19117913、chr7:19117918、chr7:19117920、chr7:19117925、chr7:19117973、chr7:19117987、chr7:19118012和chr7:19118028；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测生物标志物的试剂包括引物组和/或探针组；
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述第一探针的5’端标记有fam荧光报告基团，3’端标记有mgb荧光淬灭基团；
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测产品包括试剂盒、试纸条或芯片。
6.一种引物组，其特征在于，所述引物组用于检测生物标志物，所述生物标志物包括twist1基因目的区域的甲基化位点和znf101基因目的区域的甲基化位点；
7.根据权利要求6所述的引物组，其特征在于，所述twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr7:19117910、chr7:19117913、chr7:19117918、chr7:19117920、chr7:19117925、chr7:19117973、chr7:19117987、chr7:19118012和chr7:19118028；
8.一种探针组，其特征在于，所述探针组用于检测生物标志物，所述生物标志物包括twist1基因目的区域的甲基化位点和znf101基因目的区域的甲基化位点；
9.根据权利要求8所述的探针组，其特征在于，所述twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr7:19117910、chr7:19117913、chr7:19117918、chr7:19117920、chr7:19117925、chr7:19117973、chr7:19117987、chr7:19118012和chr7:19118028；
10.根据权利要求8所述的探针组，其特征在于，所述第一探针的5’端标记有fam荧光报告基团，3’端标记有mgb荧光淬灭基团；
11.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测生物标志物，所述生物标志物包括twist1基因目的区域的甲基化位点和znf101基因目的区域的甲基化位点；
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述twist1基因目的区域的甲基化位点选自下列至少一种：chr7:19117910、chr7:19117913、chr7:19117918、chr7:19117920、chr7:19117925、chr7:19117973、chr7:19117987、chr7:19118012和chr7:19118028；
13.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括下列至少一种：样本收集容器、核酸提取试剂、甲基化转化试剂、荧光定量pcr检测试剂、检测actb基因的引物和检测actb基因的探针。
14. 根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述样本收集容器的容量为1~10ml；
15.一种膀胱癌生物标志物甲基化水平检测的非诊断方法，其特征在于，所述非诊断方...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘婷，朱剑梅，刘晶，王云霞，秦楠，
申请(专利权)人：上海金翌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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