【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞生物学，尤其涉及一种增强t细胞功能和干性的培养基及其应用。
技术介绍
1、过继性细胞治疗(adoptive cell transfer，act)是指从患者体内分离得到自身免疫细胞，经体外培养、扩增和编程，最后回输患者体内用于肿瘤清除，其已成为癌症治疗的主要方式之一。act的一个里程碑是20世纪80年代开始肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocytes，tils)治疗转移性黑色素瘤的成功。虽然til治疗仍然是act的重要方式，但til产品的制造上具有挑战性。因此，act的努力在很大程度上已经转向了用赋予所需抗原特异性的受体来设计外周血t细胞的策略。这些主要包括嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptor-t cell，car-t)和t细胞受体工程t细胞(engineered tcell receptor-t cell，tcr-t)疗法。
2、car-t细胞疗法在临床试验中显示出令人振奋的结果，几种产品已被批准用于治疗血液系统恶性肿瘤。然而，与血液系统恶性肿瘤相比，tcr-t细胞免疫疗法在实体瘤中的总体疗效并不显著，car-t细胞疗法更是面临着重重困难。与血液肿瘤不同，实体瘤的微环境异常复杂，具有免疫抑制的特点，对t细胞的功能产生了不利影响，使得目前的t细胞免疫疗法存在着t细胞向实体瘤迁移和浸润的能力差、t细胞活性和持久性差的问题。
3、在实体瘤中，细胞外基质的过量沉积和组织形式的异常构成了致密的三维网状结构。这种紧密结构形成的物理屏障
4、最近的研究揭示，过继回输的肿瘤特异性cd8+t细胞在受到肿瘤抗原刺激后，虽然仍然快速增殖，但在6小时内分泌的促炎性细胞因子明显减少，而在12小时内即丧失了对肿瘤细胞的杀伤能力。有临床试验也发现，大多数无应答的患者体内回输的特异性t细胞没有表现出应有的持久性，从而降低了疗效。总的来说，t细胞体内活性不佳和持久性不足是tcr-t和car-t细胞用于实体肿瘤治疗亟需解决的难题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种能够通过提高t细胞的活性及持久性以提高t细胞的功能和干性，从而延长有效的免疫反应，使“冷”肿瘤转变为“热”肿瘤的培养基及其应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种增强t细胞功能和干性的培养基，其包括组分a和组分b；所述组分a包括完全培养基和t细胞活化因子，所述组分b为脂肪酸合酶抑制剂。
4、本专利技术通过在完全培养基中添加t细胞活化因子以及脂肪酸合酶抑制剂，减少了其他细胞因子以及化合物的使用，从而减少了细胞因子的应用所带来的毒副作用和高昂成本。
5、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述脂肪酸合酶抑制剂包括奥利司他、浅蓝菌素、木犀草素、脱水淫羊藿素、单宁酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、山奈酚、异烟肼、tvb-3664、ft113、脱氧土大黄苷、反-查耳酮、c75及其异构体、仙鹤草酚b、fasn-in-4tosylate、fasn-in-4、fasn-in-1、fasn-in-5、ucm05、白绵马素ap、ctl-06、ctl-12、hs80、hs79、fasn-in-3、fasnall、bi-99179、ft-4101、gsk837149a、gsk2194069、tvb-2640、tvb-3166、mp-ml-24-n1和ipi-9119中的至少一种。
6、在优选参数条件下，本专利技术通过实验验证多种脂肪酸合酶抑制剂均具有提高t细胞功能和干性的作用。
7、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述脂肪酸合酶抑制剂为奥利司他和/或c75。在优选参数条件下，本专利技术通过实验发现奥利司他促进t细胞功能及干性的效果优异，且奥利司他的成本低廉、安全性高，是众多脂肪酸合酶抑制剂中经济效益最高的一种。
8、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述t细胞活化因子包括细胞介素-7、白细胞介素-15、白细胞介素-21、白细胞介素-5、白细胞介素-17、伴刀豆球蛋白a、白细胞介素-2和抗cd3/cd28抗体中的至少一种。
9、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述脂肪酸合酶抑制剂的浓度为0.8-50μm；所述t细胞活化因子的浓度为50-300u/ml。在优选配比范围下，本专利技术通过实验发现当脂肪酸合酶抑制剂浓度为0.8-50μm时均具有较好地提高t细胞功能和干性的作用。此外，过高浓度的脂肪酸合酶抑制剂会产生抑制t细胞增殖的副作用，浓度越高，抑制增殖的效应和提升细胞功能、抗耗竭抗分化的作用都更显著，所以为了在抑制增殖和提升功能、抗耗竭抗分化间取得平衡，脂肪酸合酶抑制剂的浓度范围在0.8-50μm时较好。
10、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述脂肪酸合酶抑制剂的浓度为1.6-25μm；所述t细胞活化因子的浓度为100-200u/ml。在优选配比范围下，本专利技术发现当脂肪酸合酶抑制剂浓度在1.6-25μm时t细胞功能和干性的提升效果较为显著。
11、作为本专利技术所述培养基的优选实施方式，所述完全培养基中包括基础培养基、血清和抗生素；所述基础培养基为rpmi 1640培养基、imdm培养基、dmem/f-12培养基、dmem培养基和mem培养基中的至少一种；所述血清的体积占完全培养基总体积的10％。
12、第二方面，本专利技术提供了上述培养基在增强t细胞功能和干性中的应用。
13、专利技术人在实验过程中发现本专利技术的培养基能够从各方面提高t细胞的功能：提高t细胞向实体肿瘤迁移和浸润的功能，提高t细胞产生细胞因子ifn-γ的功能，最终提高t细胞对肿瘤的杀伤能力。此外，本专利技术的培养基还有利于t细胞的存本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种增强T细胞功能和干性的培养基，其特征在于，包括组分A和组分B；所述组分A包括完全培养基和T细胞活化因子，所述组分B为脂肪酸合酶抑制剂。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂包括奥利司他、浅蓝菌素、木犀草素、脱水淫羊藿素、单宁酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、山奈酚、异烟肼、TVB-3664、FT113、脱氧土大黄苷、反-查耳酮、C75及其异构体、仙鹤草酚B、FASN-IN-4tosylate、FASN-IN-4、FASN-IN-1、FASN-IN-5、UCM05、白绵马素AP、CTL-06、CTL-12、HS80、HS79、FASN-IN-3、Fasnall、BI-99179、FT-4101、GSK837149A、GSK2194069、TVB-2640、TVB-3166、MP-ML-24-N1和IPI-9119中的至少一种。
3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂为奥利司他和/或C75。
4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述T细胞活化因子包括细胞介素-7、白细胞介素-15、
5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂的浓度为0.8-50μM；所述T细胞活化因子的浓度为50-300U/mL。
6.如权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂的浓度为1.6-25μM；所述T细胞活化因子的浓度为100-200U/mL。
7.如权利要求1-6任一项所述的培养基在增强T细胞功能和干性中的应用。
8.一种增强T细胞功能和干性的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.一种T细胞，其特征在于，主要由权利要求8所述的培养方法培养得到。
10.如权利要求9所述的T细胞在制备抗肿瘤制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种增强t细胞功能和干性的培养基，其特征在于，包括组分a和组分b；所述组分a包括完全培养基和t细胞活化因子，所述组分b为脂肪酸合酶抑制剂。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂包括奥利司他、浅蓝菌素、木犀草素、脱水淫羊藿素、单宁酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、山奈酚、异烟肼、tvb-3664、ft113、脱氧土大黄苷、反-查耳酮、c75及其异构体、仙鹤草酚b、fasn-in-4tosylate、fasn-in-4、fasn-in-1、fasn-in-5、ucm05、白绵马素ap、ctl-06、ctl-12、hs80、hs79、fasn-in-3、fasnall、bi-99179、ft-4101、gsk837149a、gsk2194069、tvb-2640、tvb-3166、mp-ml-24-n1和ipi-9119中的至少一种。
3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述脂肪酸合酶抑制剂为奥利...
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