【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫检测，特别是涉及一种抗原-多肽偶联物及其应用。
技术介绍
1、免疫检测的原理是利用抗体、抗原在体外特异性结合后出现肉眼可见或借助仪器可检测的各种反应现象，实现对待测样本中的抗原、抗体进行定性或定量检测。待测样本中的抗原可以是人体中产生的激素、甲状腺功能、癌症等生物标志物，也可以是环境、样本中含有的分子，如黄曲霉素、苯并芘、辣椒素、各种残留的农药等。抗原分为大分子抗原和小分子抗原，大分子抗原既有反应原性，又有免疫原性，而小分子抗原只有反应原性，没有免疫原性。
2、小分子抗原由于没有免疫原性，在制备其抗体时需要将小分子抗原连接到载体蛋白或多肽上。小分子抗原-多肽的免疫原性由于多肽的分子量比较小，通常比小分子抗原-载体蛋白的免疫原性差。常用的载体蛋白包括牛血清白蛋白（bsa）、卵清蛋白（ova）、钥孔血蓝蛋白（klh）、人血清白蛋白（hsa）等。
3、另外，免疫检测中常用竞争法来检测待测样本中的小分子抗原，待测样本中的小分子抗原和小分子抗原-载体蛋白竞争性地结合抗体，根据结合量的变化来测定待测样本中小分子抗原的量。小分子抗原偶联载体蛋白时，由于载体蛋白上的反应基团（如氨基、羧基）众多，偶联数量和偶联位置都无法精准控制，使得其和待测样本中小分子抗原的竞争能力不能保持稳定，免疫检测的特异性有差异，小分子抗原-载体蛋白的批次间差异难以控制是免疫检测中常见的问题。同时，使用小分子抗原-载体蛋白，如载体蛋白上连接提供信号的物质，也会面临偶联数量和偶联位置不确定的问题，导致即使使用同一批次的小分子抗原-载体蛋
4、有方法使用单独的小分子抗原，并且在小分子抗原上连接了吖啶来提供信号。由于小分子和吖啶是按照1:1的比例来连接，不能像小分子抗原-载体蛋白那样通过载体蛋白偶联很多吖啶，提供丰富的信号。使用单独的小分子抗原，提供的信号有限，测试灵敏度不高。
5、还有方法将小分子抗原连接到含有多个氨基的peg链或者多臂peg上，但是小分子抗原连接到peg链上的数量和位置仍然不能固定，仍不可避免的产生批次间差异。
技术实现思路
1、基于此，本申请提供一种能够兼顾较高的测试灵敏度以及重复性的小分子抗原-多肽偶联物及其应用。
2、本申请的第一方面，提供一种抗原-多肽偶联物，具有如下式(i)所示结构特征：
3、第一肽链-环[第一氨基酸-包含peg和抗原的第二肽链-第二氨基酸]-第三肽链 (i)；
4、其中，环[第一氨基酸-包含peg和抗原的第二肽链-第二氨基酸]表示结构单元第一氨基酸、包含peg和抗原的第二肽链和第二氨基酸按照任意顺序连接成环；peg表示聚氧乙烯醚；
5、所述第一肽链经所述第一氨基酸连接至所述环；
6、所述第三肽链经所述第二氨基酸连接至所述环；
7、所述抗原经化学键连接于所述第二肽链的侧链。
8、在其中一个实施例中，所述抗原经羧基与氨基的组合、巯基与马来酰亚胺基的组合或炔基与叠氮的组合连接于所述第二肽链的侧链。
9、在其中一个实施例中，所述第一氨基酸和第二氨基酸分别独立地为lys、asp、glu或cys，且满足如下条件：
10、（1）当所述第一氨基酸为cys时，所述第二氨基酸为cys；
11、（2）当所述第一氨基酸为lys时，所述第二氨基酸为asp或glu；
12、（3）当所述第二氨基酸为lys时，所述第一氨基酸为asp或glu。
13、在其中一个实施例中，所述第一肽链中含有2~10个选自如下组1的氨基酸，组1中的氨基酸包括lys、ala、phe、gly、his、leu、met、gln、asn、pro、arg、ser、thr、val、trp和tyr。
14、在其中一个实施例中，所述第二肽链中含有10~50个选自如下组2的氨基酸，组2中的氨基酸包括lys、cys、ala、phe、gly、his、leu、met、gln、asn、pro、arg、ser、thr、val、trp和tyr。
15、在其中一个实施例中，所述第三肽链中含有2~10个选自如下组3的氨基酸，组3中的氨基酸包括glu、asp、ala、phe、gly、his、leu、met、gln、asn、pro、arg、ser、thr、val、trp和tyr。
16、在其中一个实施例中，peg的聚合度为2~50。
17、在其中一个实施例中，所述第二肽链包含的peg的个数为1~5个。
18、在其中一个实施例中，所述第二肽链包含的抗原的个数为2~10个。
19、在其中一个实施例中，所述抗原为分子量小于1000da的抗原；可选地，所述抗原为雌二醇、孕酮、皮质醇、睾酮、雄烯二酮、叶酸、黄曲霉素、苯并芘或辣椒素。
20、本申请的第二方面，提供一种免疫检测试剂盒，包括负载有抗原偶联物的固相载体以及标记信号物质的抗体，或者负载有抗体的固相载体以及标记信号物质的抗原偶联物；所述抗原偶联物为第一方面所述的抗原-多肽偶联物；
21、可选地，所述固相载体为纳米磁珠、乳胶微球、酶免板和硝酸纤维素膜中的一种或多种。
22、本申请的第三方面，提供第一方面所述的抗原-多肽偶联物或第二方面所述的免疫检测试剂盒在免疫检测中的应用。
23、上述抗原-多肽偶联物通过将第一氨基酸、包含peg和抗原的第二肽链、第二肽链与第二氨基酸连接成环，并将抗原连接于所述第二肽链，相比于线性肽，环肽上的抗原分布在不同的空间中，可以结合更多的抗体，从而增强检测信号，peg链的存在可以降低偶联物的非特异性吸附。
24、同时，相比较单纯的抗原，由于多肽上偶联的抗原数量增多，可以增加结合的抗体量，使信号增加，肽链上还可以结合如吖啶、碱性磷酸酶、荧光素等产生信号的物质，使信号比单独连接信号物质的抗原进一步增强。
25、相比较抗原-载体蛋白偶联物，抗原-多肽偶联物采用环肽结构能够弥补多肽负载的抗原数量较蛋白较少的缺陷，同时减少了抗原在载体蛋白上的连接数量和连接的位置不固定导致的重复性差的问题。且多肽的分子量较小，且上面可反应的基团少，小分子抗原或信号物质更容易反应完全，从而进一步提升了检测的可重复性，批次间差异更加可控，有效提升了检测的精密度。
26、特别地，上述抗原-多肽偶联物中的抗原可以起到免疫作用，多肽可以起到载体的作用，但不和血清中的各种抗体发生免疫作用，进而使该抗原-多肽偶联物能够用于免疫检测。同时，该抗原-多肽偶联物还可以通过调整肽链的序列改变抗原连接的数量和位置，从而调整抗原和抗体的免疫结合力，有针对性地调整免疫检测试剂的性能。
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1.一种抗原-多肽偶联物，其特征在于，具有如下式(I)所示结构特征：
2.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述抗原经羧基与氨基的组合、巯基与马来酰亚胺基的组合或炔基与叠氮的组合连接于所述第二肽链的侧链。
3.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第一氨基酸和第二氨基酸分别独立地为Lys、Asp、Glu或Cys，且满足如下条件：
4.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第一肽链中含有2~10个选自如下组1的氨基酸，组1中的氨基酸包括Lys、Ala、Phe、Gly、His、Leu、Met、Gln、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp和Tyr。
5.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第二肽链中含有10~50个选自如下组2的氨基酸，组2中的氨基酸包括Lys、Cys、Ala、Phe、Gly、His、Leu、Met、Gln、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp和Tyr。
6.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所
7.根据权利要求1~6任一项所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，PEG的聚合度为2~50；和/或，
8.根据权利要求1~6任一项所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第二肽链包含的抗原的个数为2~10个；和/或，
9.一种免疫检测试剂盒，其特征在于，包括负载有抗原偶联物的固相载体以及标记信号物质的抗体，或者负载有抗体的固相载体以及标记信号物质的抗原偶联物；所述抗原偶联物为权利要求1~8任一项所述的抗原-多肽偶联物；
10.权利要求1~8任一项所述的抗原-多肽偶联物或权利要求9所述的免疫检测试剂盒在免疫检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抗原-多肽偶联物，其特征在于，具有如下式(i)所示结构特征：
2.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述抗原经羧基与氨基的组合、巯基与马来酰亚胺基的组合或炔基与叠氮的组合连接于所述第二肽链的侧链。
3.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第一氨基酸和第二氨基酸分别独立地为lys、asp、glu或cys，且满足如下条件：
4.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第一肽链中含有2~10个选自如下组1的氨基酸，组1中的氨基酸包括lys、ala、phe、gly、his、leu、met、gln、asn、pro、arg、ser、thr、val、trp和tyr。
5.根据权利要求1所述的抗原-多肽偶联物，其特征在于，所述第二肽链中含有10~50个选自如下组2的氨基酸，组2中的氨基酸包括lys、cys、ala、phe、gly、his、leu、met、gln、asn、pro、arg、...
【专利技术属性】
技术研发人员：祝亮，谭松暖，刘陶旭，何凡，
申请(专利权)人：深圳市卓润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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