【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，特别涉及一种红麻快速发根的培育方法。
技术介绍
1、红麻(hibiscus cannabinus)又名洋麻或槿麻，为锦葵科(malvaceae)木槿属(hibiscus)一年生草本韧皮纤维作物,是麻纺和造纸工业的重要原料，其纤维强力大、吸湿性好、散水快，耐腐蚀磨损,应用领域十分广阔。红麻根结线虫病(meloidogyne spp.)是一种世界性病害，据报道,20世纪七八十年代,红麻和玫瑰麻在美国作为商品生产的主要障碍是易感染根结线虫，在美国东南部,红麻栽培品种普遍高度感染数种根结线虫。据调查,在我国各红麻主产区,红麻根结线虫病也普遍发生,一般造成减产20％～30％，严重者达50％以上，甚至绝产,造成红麻生产的巨大经济损失。
2、截止到目前，对红麻根结线虫的研究仍处于感染后筛选抗病优良品种的初级阶段，现有技术的缺点是成本高、效率底、耗时间，同时还不能准确地把抗虫基因导入到红麻根系中，靶向定位直接解决根结线虫。
3、大豆是中国重要粮食作物之一，已有五千年栽培历史，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物，大豆蛋白质含量为35％～40％。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。关于大豆根结线虫的预防，已有将抗虫基因转化大豆子叶诱导根系生成的技术，具体将包含目的基因的重组质粒转入发根农杆菌k599中，进行大豆子叶的遗传转化，最后诱导毛状根生成(王玲爽.大豆gmbin2基因的克隆及功能分析[d].东北农业大学.2018)。
4、目前，发根农杆菌转化大豆技术较为成熟，由于
技术实现思路
1、为了解决红麻根结线虫病害问题，本专利技术提供了一种红麻快速发根的培育方法，该方法能够有效将红麻根结线虫抗性基因导入红麻，获得抗根结线虫的红麻植株，该方法能够节省大量的时间、人力和物力，提高工作效率。
2、本专利技术通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供一种红麻快速发根的培育方法，所述培育方法包括：
4、将hcnir基因片段连接在过表达载体上，获得hcnir基因过表达载体；
5、将所述hcnir基因过表达载体转化发根农杆菌，后制备发根农杆菌菌液；
6、红麻种子萌发后，将其子叶进行切割，获得外植体；
7、将所述外植体伤口朝下置于培养基中进行预培养；
8、预培养结束后，将所述外植体浸泡在所述发根农杆菌菌液中，后取出，伤口朝上置于恢复培养基中，进行黑暗培养；
9、黑暗培养结束后，将所述外植体伤口朝下置于根诱导培养基中培养，获得带根系的外植体；
10、其中，所述hcnir基因片段的核苷酸序列如seq id no.1所示。
11、所述hcnir基因片段编码白蛋的氨基酸序列如seq id no.2所示。
12、进一步的，所述将hcnir基因片段连接在过表达载体上，获得hcnir基因过表达载体，具体包括：
13、将hcnir基因片段连接在过表达载体phg上，获得hcnir基因过表达载体phg-hcnir。
14、进一步的，所述将所述hcnir基因过表达载体转化发根农杆菌，后制备发根农杆菌菌液，具体包括：
15、采用冻融法将所述hcnir基因过表达载体转化至发根农杆菌a4感受态细胞，获得含有hcnir基因的发根农杆菌；
16、将所述含有hcnir基因的发根农杆菌进行培养，获得发根农杆菌菌液。
17、进一步的，所述红麻种子萌发后，将其子叶进行切割，获得外植体，具体包括：
18、将灭菌后的红麻种子置于萌发培养基中，放在环境温度为25℃，光周期为16/8h(明/暗)的培养室中培养7-10d后，去掉种皮，将子叶切割成大小均一的矩形，获得外植体。
19、进一步的，所述将所述外植体伤口朝下置于培养基中进行预培养，具体包括：
20、将所述外植体伤口朝下置于恢复培养基中，在环境温度25℃，16h光照条件下，将外植体预培养1d。
21、进一步的，所述预培养结束后，将所述外植体浸泡在所述发根农杆菌菌液中，后取出，伤口朝上置于恢复培养基中，进行黑暗培养，具体包括：
22、预培养结束后，将所述外植体置于所述发根农杆菌菌液中浸泡15min，后取出吸干多余菌液，伤口朝上置于恢复培养基中，25℃黑暗条件下黑暗培养2～3d。
23、进一步的，所述黑暗培养结束后，将所述外植体伤口朝下置于根诱导培养基中培养，获得带根系的外植体，具体包括：
24、黑暗培养结束后，将所述外植体伤口朝下置于根诱导培养基中培养7-10d，获得带根系的外植体。
25、基于同一专利技术构思，本专利技术提供一种红麻植株，所述红麻植株通过上述一种红麻快速发根的培育方法制备。
26、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
27、1.本专利技术一种红麻快速发根的培育方法，该方法将红麻hcnir基因重组子转入到发根农杆菌感受态，制备出发根农杆菌菌液，切割红麻子叶作为外植体，再将带目的基因的发根农杆菌菌液转化红麻外植体，最后进行生根培养，该方法抗根结线虫基因的转化效率高，转化后经统计成功转化植株占总数的93％以上，红麻的生长周期为半年以上，本专利技术直接用红麻发根的快速培育方法，节省了大量的时间，人力，物力，还能提高工作效率，准确的将抗红麻根结线虫基因导入到根中，快速筛选得到抗根结线虫的红麻过表达植株。
28、2.本专利技术一种红麻快速发根的培育方法，该方法经过前期筛选符合红麻转化的发根农杆菌感受态，然后对红麻发根培养的组培条件的探索，培养基及抗生素的配比的研究得到适合红麻种子的生长培养，切割子叶后的恢复培养以及生根培养条件，为制备红麻抗根结线虫的转基因植株做好基础，制备出的红麻转基因植株制备优异的抗根结线虫性能。
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1.一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述培育方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述将HcNIR基因片段连接在过表达载体上，获得HcNIR基因过表达载体,具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述将所述HcNIR基因过表达载体转化发根农杆菌，后制备发根农杆菌菌液，具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述红麻种子萌发后，将其子叶进行切割，获得外植体，具体包括：
5.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述将所述外植体伤口朝下置于培养基中进行预培养，具体包括：
6.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述预培养结束后，将所述外植体浸泡在所述发根农杆菌菌液中，后取出，伤口朝上置于恢复培养基中，进行黑暗培养，具体包括：
7.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述黑暗培养结束后，将所述外植体伤口朝下置于根诱导培养基中培养，
...【技术特征摘要】
1.一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述培育方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述将hcnir基因片段连接在过表达载体上，获得hcnir基因过表达载体,具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述将所述hcnir基因过表达载体转化发根农杆菌，后制备发根农杆菌菌液，具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种红麻快速发根的培育方法，其特征在于，所述红麻种子萌发后，将其子叶进行切割，获得外植体，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张超，邓勇，张高阳，李德芳，栾明宝，戴炜，伍应保，满百膺，程刚，毛小涛，张宗良，邓接楼，陈益帆，顾锐哲，郑俊微，吕佳琪，何钰栩，
申请(专利权)人：上饶师范学院，
类型：发明
国别省市：
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