【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种人血管性血友病因子的冷沉淀预纯化方法。
技术介绍
1、人血管性血友病因子(vwf)是一种重要的血浆成分。vwf的主要作用包括作为载体具有稳定因子ⅷ的作用，以及与血小板膜gpⅰb-ⅸ复合物及内皮下胶原结合，介导血小板在血管损伤部位的黏附。临床上，纯化的vwf主要用于血管性血友病(vwd)的治疗。
2、现有的vwf制备方法主要是以冷沉淀为原料，进行分离和纯化，进而得到纯化的vwf。然而，血浆中包括众多的成分，例如：免疫球蛋白m(igm)、纤维蛋白原fn、纤维蛋白原fib等。而vwf属于含量较低的成分。
3、因此，为了提高vwf的纯度和稳定性，使其在临床应用和研究中不被其他成分干扰。本领域有必要开发一种能够有效纯化vwf，获得高纯度vwf的方法。vwf的纯化步骤中通常包括预纯化步骤。预纯化步骤主要是去除血液中的杂蛋白、大分子物质和脂类物质等，为后续的纯化步骤提供更好的条件。目前，现有技术预纯化的手段主要包括离心、过滤和透析等。然而，预纯化的方法步骤和工艺条件会对去除杂蛋白等成分的效果产生重要的影响，因此，本领域亟需对vwf的预纯化方法进行方法步骤和工艺条件的优化，实现更好的预纯化效果。
技术实现思路
1、针对现有技术的问题，本专利技术提供一种人血管性血友病因子的冷沉淀预纯化方法。
2、一种人血管性血友病因子的冷沉淀预纯化方法，包括如下步骤：
3、步骤1，将冷沉淀加入tris缓冲液，得到冷沉淀溶解液；所述冷
4、步骤2，向冷沉淀溶解液中加入氢氧化铝粉末，进行吸附；所述吸附的温度为20-35℃，时间为10～20min；
5、步骤3，加入聚乙二醇，搅拌；
6、步骤4，分离上清液，即得含有人血管性血友病因子的溶液。
7、优选的，步骤1中，所述冷沉淀和tris缓冲液的重量体积比为1:3。
8、优选的，步骤1中，所述tris缓冲液浓度为20mm，ph为6.8。
9、优选的，步骤2中，所述氢氧化铝粉末的用量为3-5％w/w。
10、优选的，步骤2中，所述吸附的温度为33℃，时间为15min。
11、优选的，步骤3中，所述聚乙二醇的终浓度为3.0～4.0％w/v。
12、优选的，步骤3中，加入所述聚乙二醇后，调节ph至6.0～6.5。
13、优选的，步骤3中，搅拌的时间为15～60min。
14、优选的，步骤4中，所述分离的步骤包括：离心10～30min，上清液经过0.45um滤芯过滤，即得。
15、本专利技术还提供按照上述冷沉淀预纯化方法制备得到的人血管性血友病因子。
16、本专利技术中，所述“预纯化”方法是指对vwf进行纯化的其中一个流程，目的是竟可能去除杂蛋白、大分子物质和脂类物质。
17、本专利技术针对vwf的冷沉淀预纯化，进行了方法流程和工艺参数的优化。按照本专利技术的方法进行预纯化，可有效去除血浆中的igm、fn、fib和凝血因子fii、vii、ix、x，有利于进一步制成高纯度的vwf。此外本专利技术操作简便，成本低，质量可控，具有很好的应用前景。
18、显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
19、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
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1.一种人血管性血友病因子的冷沉淀预纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤1中，所述冷沉淀和Tris缓冲液的重量体积比为1:3。
3.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤1中，所述Tris缓冲液浓度为20mM，pH为6.8。
4.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤2中，所述氢氧化铝粉末的用量为3-5％w/w。
5.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤2中，所述吸附的温度为33℃，时间为15min。
6.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤3中，所述聚乙二醇的终浓度为3.0～4.0％w/v。
7.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤3中，加入所述聚乙二醇后，调节pH至6.0～6.5。
8.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤3中，搅拌的时间为15～60min。
9.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特
10.按照权利要求1-9任一项所述的冷沉淀预纯化方法制备得到的人血管性血友病因子。
...【技术特征摘要】
1.一种人血管性血友病因子的冷沉淀预纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤1中，所述冷沉淀和tris缓冲液的重量体积比为1:3。
3.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤1中，所述tris缓冲液浓度为20mm，ph为6.8。
4.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤2中，所述氢氧化铝粉末的用量为3-5％w/w。
5.按照权利要求1中所述的冷沉淀预纯化方法，其特征在于：步骤2中，所述吸附的温度为33℃，时间为15min。
6.按照权...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪树青，余伟，李伟，陈川，黄琰，余鼎，梁洪，牟蕾，王焰，
申请(专利权)人：成都蓉生药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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