【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，具体涉及一种甘油磷酸氧化酶突变体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、甘油三酯(tg)是脂质的重要组成部分，血清中甘油三酯增高常见于家族性脂类代谢紊乱，肾病综合征，糖尿病，甲状腺功能减退等，测定甘油三脂对了解血脂代谢、肝功能(肝脏是合成甘油三脂器官之一)以及动脉粥样硬化引起的疾病的诊断都有帮助。甘油磷酸氧化酶法检测甘油三酯具有操作简单，快速准确的特点，并且可以自动在生化分析仪上进行批量操作，是临床实验室测定甘油三酯的常规方式。甘油磷酸氧化酶(g3po，ec1.1.3.21)是酶法检测tg的关键酶，体外诊断试剂使用的甘油磷酸氧化酶主要来自于链球菌、粪球菌、酵母菌和大肠杆菌等，其制备方式主要是通过野生菌的发酵或者是将不同物种来源的甘油磷酸氧化酶在大肠杆菌中表达获得重组酶。由于菌株培养条件复杂、生产工艺繁琐等原因，现有的生产方式存在酶产量低、无法大规模生产等问题，阻碍了甘油磷酸氧化酶的应用。
技术实现思路
1、基于此，本申请有必要提供一种表达量显著提高的甘油磷酸氧化酶突变体及其制备方法和应用。
2、具体技术方案如下：
3、甘油磷酸氧化酶突变体，所述甘油磷酸氧化酶突变体与seq id no.1所示的甘油磷酸氧化酶相比，包含如下位点中一个或多个位点的氨基酸取代：第16位、第74位、第118位、第132位、第137位、第150位、第244位、第265位、第280位、第304位、第330位、第357位、第362位、第367位、第368位、第383位、第387
4、在其中一个实施例中，所述甘油磷酸氧化酶突变体包括如下氨基酸取代中的一个或多个：
5、第16位的谷氨酰胺被谷氨酸取代、第74位的苯丙氨酸被甘氨酸取代、第118位的苯丙氨酸被谷氨酸取代、第132位的天冬酰胺被甘氨酸取代、第137位的赖氨酸被脯氨酸取代、第150位的谷氨酸被赖氨酸取代、第244位的苯丙氨酸被赖氨酸取代、第265位的赖氨酸被丝氨酸取代、第280位的谷氨酰胺被甘氨酸取代、第304位的谷氨酰胺被谷氨酸取代、第330位的谷氨酸被苏氨酸取代、第357位的酪氨酸被谷氨酸取代、第362位的天冬酰胺被赖氨酸取代、第367位天冬氨酸被谷氨酸取代、第368位的赖氨酸被谷氨酸取代、第383位的天冬酰胺被甘氨酸取代、第387位的精氨酸被谷氨酰胺或赖氨酸取代、第395位的天冬酰胺被赖氨酸取代、第396位的组氨酸被天冬酰胺或赖氨酸取代、第402位的天冬氨酸被赖氨酸取代、第403位的谷氨酸被天冬酰胺取代、第442位的精氨酸被赖氨酸取代、第463位的赖氨酸被苏氨酸取代、第493位的谷氨酸被丝氨酸取代、第516位的赖氨酸被精氨酸取代、第517位的谷氨酸被精氨酸取代、第564位的谷氨酸被赖氨酸取代、第575位的谷氨酸被天冬氨酸取代、第581位的谷氨酸被脯氨酸取代、第589位的赖氨酸被丙氨酸取代和第590位的精氨酸被赖氨酸取代。
6、核酸分子，包括编码所述的甘油磷酸氧化酶突变体的核苷酸片段。
7、重组表达载体，包含所述的核酸分子。
8、重组宿主细胞，包含所述的核酸分子或所述的重组表达载体。
9、所述甘油磷酸氧化酶突变体的制备方法，包括如下步骤：
10、培养所述的重组宿主细胞，并从所得培养产物中分离甘油磷酸氧化酶突变体。
11、所述的甘油磷酸氧化酶突变体在制备甘油三酯检测试剂中的应用。
12、相对于传统技术，本申请具备如下有益效果：
13、本申请对野生型甘油磷酸氧化酶的序列进行氨基酸取代，并构建重组表达载体表达甘油磷酸氧化酶突变体，该突变体的酶活高，且酶的表达量显著提高，降低甘油磷酸氧化酶的使用成本，极大提升了甘油磷酸氧化酶的可用性，促进了甘油三酯检测试剂的开发。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体与SEQ ID NO.1所示的甘油磷酸氧化酶相比，包括如下位点中一个或多个位点的氨基酸取代：
2.根据权利要求1所述的甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体包括如下氨基酸取代中的一个或多个：
3.根据权利要求2所述的甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体包括如下氨基酸取代组中的一组：
4.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码权利要求1～3任一项所述的甘油磷酸氧化酶突变体的核苷酸片段。
5.重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求4所述的核酸分子。
6.根据权利要求5所述重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括质粒和病毒中的一种或多种。
7.重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5或6所述的重组表达载体。
8.根据权利要求7所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞，可选地，所述原核细胞包括大肠杆菌。
9.
10.权利要求1～3任一项所述的甘油磷酸氧化酶突变体在制备甘油三酯检测试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体与seq id no.1所示的甘油磷酸氧化酶相比，包括如下位点中一个或多个位点的氨基酸取代：
2.根据权利要求1所述的甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体包括如下氨基酸取代中的一个或多个：
3.根据权利要求2所述的甘油磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油磷酸氧化酶突变体包括如下氨基酸取代组中的一组：
4.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码权利要求1～3任一项所述的甘油磷酸氧化酶突变体的核苷酸片段。
5.重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜军，范文星，宋辉，王文朋，曹文刚，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。