【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及str鉴定。具体地说是一种人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
1、str是亲缘关系分析、犯罪学和人类种群遗传学研究中常用的工具。进行str鉴定时，通常需要同时对多个str位点进行扩增(使用多重荧光pcr)，将每个str位点的引物用不同的荧光染料进行标记，并使用毛细管电泳法对扩增产物进行分离或使用测序仪对扩增产物进行测序，以实现多路并行分型。目前，已有一些str试剂盒，如专利cn 109439765 a中提供的试剂盒，其使用了8色荧光标记，能够实现对60个str位点的同时扩增。但是，对于str鉴定而言，其同时扩增的str位点越多，准确性就越高，故而仍有必要对现有技术进行进一步改良，以实现对更多的str位点同时扩增。
2、然而，同时进行多个str的pcr鉴定也会面临一些技术和实验上的挑战，其中包括以下几个方面：
3、引物设计复杂性：随着str数量的增加，引物的设计变得更加复杂，需要确保引物之间不会相互干扰，同时还需要考虑引物的特异性和扩增效率。
4、pcr优化困难：同时进行多个基因座的pcr反应需要仔细优化反应条件，以确保每个基因座都能够得到足够的扩增，否则会导致最终荧光信号强度产生差异，影响对结果的判读。
5、信号叠加问题：在使用多个荧光染料标记不同基因座时，可能会出现信号叠加的问题。如果两个基因座在电泳过程中产生相似大小的片段，它们的荧光信号可能会重叠，使得结果解读变得困难。
技术实现思路>
1、为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，对str引物及pcr反应条件进行筛选与优化，以实现对更多的str基因座进行同时扩增。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，能够用于聚合酶链式反应，对70个基因座进行复合扩增，扩增产物用于毛细管电泳分型。
4、上述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，70个基因座包括29个常染色体str基因座、40个y染色体str基因座和1个性别基因座amel；
5、29个常染色体str基因座分别为：d5s818、d21s11、d7s820、cs1fpo、d2s1338、d19s433、d8s1132、d2s441、vwa、d8s1179、d16s539、d10s1435、pentad、d3s3045、tpox、th01、d22s1045、d18s51、fga、d19s253、d10s1248、d6s477、d6s1043、d13s317、d12s391、d15s659、pentae、d1s1656和d3s1358；
6、40个y染色体str基因座分别为：dys460、dys389ⅰ/ⅱ、dys390、dys533、dys392、dys518、dys557、dys570、dys458、dys437、dys385a/b、gata-h4、dys627、dys643、dys508、dys576、dys456、dys391、dyf404s1、dys438、dys448、dyf387s1、dys596、dys549、dyf399s1、dys393、dys635、dys439、dys19、dys444、dys449、dys481、dys527a/b和dys447，其中dys385a/b、dys389ⅰ/ⅱ、dyf404s1、dyf399s1和dys527a/b均为多拷贝基因座，dys385a/b、dys389ⅰ/ⅱ、dyf404s1和dys527a/b各含有2个等位基因，dyf399s含有3个等位基因。这些str基因座的组合具有较高的种属特异性，且在人群中具有高度的遗传多态性，且完全符合公安部dna数据库和打拐数据库基因座入库要求，与现有数据库兼容性高，可满足多种案件检验需求，测试结果准确。
7、上述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，包括64对用于聚合酶链式反应的荧光引物对，每对引物中上游引物的5’端的第一个核苷酸被荧光染料标记，每对荧光引物对只带有一种荧光染料标记，64对荧光引物对混合形成荧光引物混合物。
8、上述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，聚合酶链式反应时，一个多拷贝基因座的所有等位基因被相同的荧光引物对扩增，70个基因座对应的荧光引物对的序号及各荧光引物在聚合酶链式反应体系中的浓度依次如下：
9、
10、
11、
12、以上引物能够与各自对应的基因座特异性结合，此外，各种引物的浓度经过了优化，使浓度与其各自的扩增效率相匹配，以防止在荧光分析中某些扩增效率高的引物信号过强，导致鉴定灵敏度降低。
13、上述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，64对荧光引物对共带有8种荧光染料标记，并按照带有荧光染料的种类划分为8组，amel、d5s818、d21s11、d7s820、cs1fpo、d2s1338、d19s433和d8s1132对应的荧光引物对为第一组；d2s441、vwa、d8s1179、d16s539、d10s1435、pentad和d3s3045对应的荧光引物对为第二组；tpox、th01、d22s1045、d18s51、fga、d19s253、d10s1248和d6s477对应的荧光引物对为第三组；d6s1043、d13s317、d12s391、d15s659、pentae、d1s1656和d3s1358对应的荧光引物对为第四组；dys460、dys389ⅰ、dys390、dys533、dys389ⅱ、dys392、dys518、dys557和dys570对应的荧光引物对为第五组；dys458、dys437、dys385a/b、gata-h4、dys627、dys643、dys508和dys576对应的荧光引物对为第六组；dys456、dys391、dyf404s1、dys438、dys448、dyf387s1、dys596、dys549和dyf399s1对应的荧光引物对为第七组，dys393、dys635、dys439、dys19、dys444、dys447、dys481、dys527a/b和dys449对应的荧光引物对为第八组。使扩增得到的产物长度接近的荧光引物对被分在不同的组，能够容易地将这些长度相近的扩增产物区分开。
14、上述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，64对荧光引物带有的8种荧光染料分别为fam、tet、hex、ned、nh598l、nh618、nh635b和nh650a；试剂盒中的分子量内标带有荧光染料nh680。进行毛细管电泳时，通过分子量内标来判断pcr产物的片段长度。
15、上述的人常染色体和y染色体str基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，能够用于聚合酶链式反应，对70个基因座进行复合扩增，扩增产物用于毛细管电泳分型。
2.根据权利要求1所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，70个基因座包括29个常染色体STR基因座、40个Y染色体STR基因座和1个性别基因座Amel；
3.根据权利要求2所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，包括64对用于聚合酶链式反应的荧光引物对，每对引物中上游引物的5’端的第一个核苷酸被荧光染料标记，每对荧光引物对只带有一种荧光染料标记，64对荧光引物对混合形成荧光引物混合物。
4.根据权利要求3所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，聚合酶链式反应时，一个多拷贝基因座的所有等位基因被相同的荧光引物对扩增，70个基因座对应的荧光引物对的序号及各荧光引物在聚合酶链式反应体系中的浓度依次如下：
5.根据权利要求4所述的人常染色体和Y染色体STR基因
6.根据权利要求5所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，64对荧光引物带有的8种荧光染料分别为FAM、TET、HEX、NED、NH598L、NH618、NH635B和NH650A；试剂盒中的分子量内标带有荧光染料NH680。
7.根据权利要求6所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，还包括反应混合物和等位基因分型标准物，反应混合物包括2×PCRBuffer，1.2-3.0mM MgCl2，200μM dNTPs和热启动Taq酶。
8.根据权利要求1-7任一所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，用于聚合酶链式反应时，按照如下反应程序对模板DNA进行扩增：95℃预变性11分钟；94℃变性30秒，60℃退火2分钟，72℃延伸1分钟，29个循环；60℃终延伸60分钟。
9.如权利要求8所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒的应用，其特征在于，通过一次检测可同时获得常染色体和Y染色体STR基因座信息，用于个体识别、亲权鉴定和男性嫌疑人家系排查。
10.根据权利要求9所述的人常染色体和Y染色体STR基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒的应用，其特征在于，个体识别、亲权鉴定和男性嫌疑人家系排查时，所用的检材包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的人类基因组DNA，或者免提取的滤纸、FTA卡、棉签或纱布中任意一种载体收集的人类血液或口腔细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，能够用于聚合酶链式反应，对70个基因座进行复合扩增，扩增产物用于毛细管电泳分型。
2.根据权利要求1所述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，70个基因座包括29个常染色体str基因座、40个y染色体str基因座和1个性别基因座amel；
3.根据权利要求2所述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，包括64对用于聚合酶链式反应的荧光引物对，每对引物中上游引物的5’端的第一个核苷酸被荧光染料标记，每对荧光引物对只带有一种荧光染料标记，64对荧光引物对混合形成荧光引物混合物。
4.根据权利要求3所述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，聚合酶链式反应时，一个多拷贝基因座的所有等位基因被相同的荧光引物对扩增，70个基因座对应的荧光引物对的序号及各荧光引物在聚合酶链式反应体系中的浓度依次如下：
5.根据权利要求4所述的人常染色体和y染色体str基因座的九色荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，64对荧光引物对共带有8种荧光染料标记，并按照带有荧光染料的种类划分为8组，amel、d5s818、d21s11、d7s820、cs1fpo、d2s1338、d19s433和d8s1132对应的荧光引物对为第一组；d2s441、vwa、d8s1179、d16s539、d10s1435、pentad和d3s3045对应的荧光引物对为第二组；tpox、th01、d22s1045、d18s51、fga、d19s253、d10s1248和d6s477对应的荧光引物对为第三组；d6s1043、d13s317、d12s391、d15s659、pentae、d1s1656和d3s1358对应的荧光引物对为第四组；dys460、dys389ⅰ、dys390、dys533、dys389ⅱ、dys392、dys518、dys557和dys570对应的荧光引物对为第五组；dys458、dys437...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。