【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药，具体涉及一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法。
技术介绍
1、多黏菌素e甲磺酸钠是目前国际上使用最广泛、循证证据最充分的多黏菌素，可全面覆盖碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肠杆菌三类顽固耐药菌，敏感性高，联合治疗可有效降低感染患者的死亡率。
2、多黏菌素e甲磺酸钠的合成原料硫酸多黏菌素e，目前采用发酵法商业化生产，均为混合物，组分复杂，不同组分间在生物活性和毒性方面均存在差异。因此，无论是作为药物直接用于临床治疗，还是作为起始原料用于合成多黏菌素e甲磺酸钠，都需要提升其有效且毒性较低的成分含量，以保障药物的安全性。
3、多黏菌素e甲磺酸钠原料中，生物效价高且毒性较低的成分是e1与e2，发酵产生组分为混合物，保证有效成分含量、降低其它有关物质含量，是提升原料质量的关键。因e6结构与e1、e2相似，提取过程中不易去除，因此e6含量偏高，将会直接影响多黏菌素e甲磺酸钠质量。现有工艺生产出的原料，e6含量接近于药典要求的最低限度4.5％，且批次之间含量变化不稳定，其控制方法是工艺难点。其含量若过高，会造成多黏菌素e甲磺酸钠原料中的杂质含量升高，成品毒性升高、生物效价下降，直接影响成品质量。
4、以下为多黏菌素e各有关物质结构式：
5、
6、因此，生产一种杂质e6含量低的多黏菌素e甲磺酸钠原料，对提升其成品质量成为需要解决的现实问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中
2、本专利技术采用的技术方案为：一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法，包括以下步骤：
3、s1、培养成熟后的种子接入发酵培养基中进行发酵培养，接入体积v/v是发酵培养基体积的7％-9％，培养80-100h放罐；
4、s2、发酵培养过程中，发酵培养20～26小时开始至发酵培养结束，补加烟酰胺补料，每小时补入0.0003～0.0005倍发酵液体积的烟酰胺溶液。
5、进一步地，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-9.0，α-淀粉酶0.008-0.010，葡萄糖0.5-1.5，黄豆饼粉0.4-0.6，玉米浆0.2-0.4，硫酸铵0.4-0.6，磷酸氢二钾0.02-0.03，碳酸钙0.3-0.5，七水合硫酸镁0.001-0.003消泡剂0.01-0.02，其余为水。
6、进一步地，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-8.5，α-淀粉酶0.008-0.009，葡萄糖0.5-1.0，黄豆饼粉0.4-0.5，玉米浆0.2-0.3，硫酸铵0.4-0.5，磷酸氢二钾0.02-0.025，碳酸钙0.3-0.4，七水合硫酸镁0.001-0.002，消泡剂0.01-0.015，其余为水。
7、进一步地，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为单位计算由以下成分组成：淀粉8.5，α-淀粉酶0.009，葡萄糖1.0，黄豆饼粉0.5，玉米浆0.3，硫酸铵0.5，磷酸氢二钾0.025，碳酸钙0.4，七水合硫酸镁0.002，消泡剂0.015，其余为水。
8、进一步地，所述步骤s2，烟酰胺补料浓度w/v为2-5％的溶液。
9、进一步地，所述步骤s2，烟酰胺补料浓度w/v为3-4％的溶液。
10、进一步地，所述步骤s2，烟酰胺补料浓度w/v为4％的溶液。
11、进一步地，所述步骤s2：发酵培养基接种量7％-9％，培养温度32-33℃，全程氨水控制ph 5.8-6.0，通气量0.6-1.0vvm，罐压0.04mpa-0.06mpa，转速100-300rpm。
12、进一步地，所述步骤s2：发酵培养基接种量8％，培养温度32℃，全程氨水控制ph5.9，通气量0.7vvm，罐压0.05mpa，转速200rpm。
13、本专利技术获得的有益效果为：补加合适量的烟酰胺、降低供氧量，可保证主成分的合成的同时，还能降低合成过程中的e6前体的羟基化程度，从而降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量，e6含量最低降至对照工艺的48.97％，解决了多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量高且不稳定，影响成品质量的难题。
14、本专利技术机理说明：在多黏菌素e的合成过程中，以e1、e2合成为主，e6与e1结构仅在脂肪链中的c3位置发生了改变，由-h替换成了-oh；在生物合成过程中，脂肪链前体发生了羟基化，羟基化是在羟化酶作用下发生的，而羟基化酶会受到氧的影响。降低转速和供氧量，虽然能够减弱羟基化酶的活性，但因主产物在合成过程中也需要一定量的氧进行正常代谢。烟酰胺作为辅酶的组成部分，可促进细胞的正常呼吸；另外其具有一定还原性，适量补加烟酰胺，能有效避免代谢中的过度氧化，同时还能保证低氧低转速状态下的正常呼吸代谢。因此使用关键补料烟酰胺、降低搅拌转速，可保证主成分的合成的同时，还能降低合成过程中的e6前体的羟基化程度，从而降低甲磺酸钠原料中e6的最终含量。
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1.一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100mL为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-9.0，α-淀粉酶0.008-0.010，葡萄糖0.5-1.5，黄豆饼粉0.4-0.6，玉米浆0.2-0.4，硫酸铵0.4-0.6，磷酸氢二钾0.02-0.03，碳酸钙0.3-0.5，七水合硫酸镁0.001-0.003，消泡剂0.01-0.02，其余为水。
3.根据权利要求2所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100mL为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-8.5，α-淀粉酶0.008-0.009，葡萄糖0.5-1.0，黄豆饼粉0.4-0.5，玉米浆0.2-0.3，硫酸铵0.4-0.5，磷酸氢二钾0.02-0.025，碳酸钙0.3-0.4，七水合硫酸镁0.001-0.002，消泡剂0.01-0.015，其
4.根据权利要求3所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100mL为单位计算由以下成分组成：淀粉8.5，α-淀粉酶0.009，葡萄糖1.0，黄豆饼粉0.5，玉米浆0.3，硫酸铵0.5，磷酸氢二钾0.025，碳酸钙0.4，七水合硫酸镁0.002，消泡剂0.015，其余为水。
5.根据权利要求1所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S2，烟酰胺补料浓度W/V为2-5％的溶液。
6.根据权利要求5所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S2，烟酰胺补料浓度W/V为3-4％的溶液。
7.根据权利要求6所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S2，烟酰胺补料浓度W/V为4％的溶液。
8.根据权利要求1所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S2：发酵培养基接种量7％-9％，培养温度32-33℃，全程氨水控制pH 5.8-6.0，通气量0.6-1.0vvm，罐压0.04MPa-0.06MPa，转速100-300rpm。
9.根据权利要求8所述的一种降低多黏菌素E甲磺酸钠原料中E6含量的方法，其特征在于，所述步骤S2：发酵培养基接种量8％，培养温度32℃，全程氨水控制pH 5.9，通气量0.7vvm，罐压0.05MPa，转速200rpm。
...【技术特征摘要】
1.一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法，其特征在于，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-9.0，α-淀粉酶0.008-0.010，葡萄糖0.5-1.5，黄豆饼粉0.4-0.6，玉米浆0.2-0.4，硫酸铵0.4-0.6，磷酸氢二钾0.02-0.03，碳酸钙0.3-0.5，七水合硫酸镁0.001-0.003，消泡剂0.01-0.02，其余为水。
3.根据权利要求2所述的一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法，其特征在于，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为单位计算由以下成分组成：淀粉8.0-8.5，α-淀粉酶0.008-0.009，葡萄糖0.5-1.0，黄豆饼粉0.4-0.5，玉米浆0.2-0.3，硫酸铵0.4-0.5，磷酸氢二钾0.02-0.025，碳酸钙0.3-0.4，七水合硫酸镁0.001-0.002，消泡剂0.01-0.015，其余为水。
4.根据权利要求3所述的一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法，其特征在于，所述步骤s1，发酵培养基的原料配比为：所述发酵培养基以g/100ml为...
【专利技术属性】
技术研发人员：于立超，徐珍，王绘砖，郑万静，李贤哲，
申请(专利权)人：河北圣雪大成制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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