【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，特别涉及一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法。
技术介绍
1、马克斯克鲁维酵母属于真菌子囊菌门酵母菌亚门酵母菌目酵母科克鲁维酵母属，广泛存在于植物和乳制品中，其所产生的脂类、酮类、醛类和醇类可以为乳制品、酒类等发酵产品增加特殊风味。马克斯克鲁维酵母是美国食品药品监督管理局认证的gras级别微生物，通过了欧盟食品安全监督局的安全认证，在2013年被中国卫计委批准为新食品原料，2023年7月，中国农业农村部批准其为新饲料添加剂。
2、马克斯克鲁维酵母作为一种非常规酵母，在生物燃料生产、重组蛋白合成、污水处理等领域应用广泛。除此之外，马克斯克鲁维酵母在动物饲料的固态发酵中也具有较大的发展潜力。固态发酵有发酵底物来源广泛、设备要求简单、能耗低、废液少等优点，但也存在发酵周期长、培养基很难做到完全无菌、物料堆积容易导致局部过热等问题。
3、因此，基于上述的固态发酵存在的缺陷，马克斯克鲁维酵母在动物饲料固态发酵的应用还处于起步阶段，相关研究报道较少。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，筛选得到一株耐热马克斯克鲁维酵母菌株，并将其应用于动物饲料的固态发酵中,以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，包括如下步骤：
4、s1：将1kg酒糟样品添加富集培养基，在37℃下固态发酵7
5、s2：秤取10g酒糟样品，加入90ml无菌水，磁力搅拌20min，用无菌水进行梯度稀释；
6、s3：取100μl样品稀释液在ypd培养基平板上涂布，40℃静置培养48h，挑选菌落形态符合且生长较好的酵母菌株，通过多次划线纯化菌株，得到的纯种菌株进行鉴定和保藏；
7、s4：通过18s rdna测序，序列在ncbi数据库上进行比对分析，菌株鉴定为马克斯克鲁维酵母菌株，命名为tby2。
8、进一步地，所述ypd培养基包括ypd固体培养基和ypd液体培养基。
9、进一步地，所述ypd固体培养基的制备过程包括：
10、取10g酵母膏，20g蛋白胨，20g葡萄糖，用1000ml蒸馏水溶解，再加入20g琼脂粉充分混匀，121℃高压灭菌20min，培养基冷却至45℃左右，在超净工作台中分装至培养皿中，冷却凝固后将培养基平板倒置备用。
11、进一步地，所述ypd液体培养基的制备过程包括：
12、取10g酵母膏，20g蛋白胨，20g葡萄糖，加入1000ml蒸馏水加热溶解，将培养基分装至试管中，121℃高压灭菌20min，冷却后备用。
13、进一步地，对马克斯克鲁维酵母菌株进行温度耐受性测试：
14、将马克斯克鲁维酵母tby2接种到ypd固体培养基平板上进行活化，平板划线得到单克隆菌落，挑取一个菌落接种到ypd液体培养基中，置于摇床30℃，150rpm震荡培养24h得到种子液，得到的种子液以1‰的比例转接至新的ypd液体培养基中，分别在不同温度梯度下培养24h。
15、进一步地，所述马克斯克鲁维酵母菌株的固态发酵方法包括：
16、发酵原料：取麸皮400份，棕榈粕500份，豆粕100份混合均匀，备用；
17、菌种活化：将冷冻保藏的tby2菌株接种到ypd固体培养基上，置于生化培养箱中30℃恒温培养48h，得到活化的菌种；
18、酵母种子液制备：挑取tby2菌株单菌落接种到ypd液体培养基中，置于摇床中30℃，150rpm震荡培养24h，得到tby2菌株种子液；
19、固态发酵：tby2菌株种子液以2％的接种量接种到混合好的发酵原料，再加入740份水搅拌均匀，分装至发酵袋中，置于37培养48h，即得发酵饲料；
20、酵母计数：在固态发酵开始之时，取适量酵母种子液，另外在固态发酵的0h，24h，48h分别取10g发酵样品，加入90ml无菌水，磁力搅拌20min，酵母种子液和发酵样品水溶液用无菌水进行梯度稀释，通过平板菌落计数法测定酵母活菌数。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
22、1.马克斯克鲁维酵母菌株普遍都能在40℃条件下生长，其中部分菌株可耐受50℃以上的温度，使其更方便用于高温发酵，高温发酵一方面可以大幅降低冷却成本及染菌风险，另一方面，纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶等的最适作用温度一般为45-55℃，高温发酵有助于提高这些酶的催化效率。
23、2.马克斯克鲁维酵母还具有较高的生长速率，在40℃时生长速率可达od 0.86-0.99/h，远高于其他酵母，可以迅速增殖得到大量细胞，提高生产效率。
24、3.除了葡萄糖以外，马克斯克鲁维酵母还可以利用其他糖类作为单一碳源进行生长，包括果糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、乳糖和菊糖等，因此以这些糖类为主要成分的低值农业及食品工业副产物可以作为碳源应用于马克斯克鲁维酵母的发酵。以这些副产品作为部分底物进行发酵，有助于减少环境污染，降低饲料成本，推动养殖产业可持续发展。
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1.一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述YPD培养基包括YPD固体培养基和YPD液体培养基。
3.如权利要求2所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述YPD固体培养基的制备过程包括：
4.如权利要求2所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述YPD液体培养基的制备过程包括：
5.如权利要求1所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，对马克斯克鲁维酵母菌株进行温度耐受性测试：
6.如权利要求5所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母菌株的固态发酵方法包括：
【技术特征摘要】
1.一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述ypd培养基包括ypd固体培养基和ypd液体培养基。
3.如权利要求2所述的一种耐热型马克斯克鲁维酵母菌株的筛选方法，其特征在于，所述ypd固体培养基的制备过程包括：
4.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：周少华，胡传炯，徐杰，薛兵，
申请(专利权)人：安徽天邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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