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基于荧光性化学发光底物的检测方法技术

技术编号:40749879 阅读:10 留言:0更新日期:2024-03-25 20:06
本申请属于生物医学检测领域,具体涉及一种荧光性化学发光底物及其制备方法。本申请通过在化学发光检测过程中加入耐尔蓝A,可以使无色透明的化学发光底物具备明亮的荧光,即使添加到黑色的96孔化学发光板中也能够产生明显的目视效果,降低了在发光底物的添加过程中多加,漏加发光底物的风险。本申请提供的检测方法还能有效避免绝大多数有色添加物会造成发光信号下降的问题,所选用的荧光染料耐尔蓝A不仅不会降低发光信号,还具有小幅度提升发光信号的效果,整体上显著提升了化学发光底物的使用效果。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于生物医学检测领域,具体涉及一种基于荧光性化学发光底物的检测方法


技术介绍

1、以hrp酶(辣根过氧化物酶)和alp酶(碱性磷酸酶)为代表标记物的化学发光技术近几十年来获得了巨大的发展,已经成了疾病诊断的基本检测手段。其中,hrp酶作为标记物的板式化学发光技术因其技术难度小,设备要求低,成本费用低等诸多优点,在免疫诊断领域占据着重要的地位。

2、板式化学发光脱胎于酶联免疫技术(elisa法),只需将elisa中使用的透明96孔板换成白色或黑色的不透明96孔板,再将elisa中使用的tmb显色液替换成以鲁米诺和双氧水为主的化学发光底物就可以制备出板式化学发光试剂盒。其他如抗体包被、封闭、洗板等各环节与elisa方法几乎无差异。板式化学发光技术可以显著地提升方法的灵敏度和测定范围,比elisa方法有较大优势。而在板式发光试剂盒的使用中,很重要的一步就是将化学发光底物加入到96孔板中,一般每孔的加入量为100μl左右。而96孔板由于加料孔多而密集,很容易由于疏忽或看不清造成漏加或多加(即某一孔或某一排加重复了)。一旦出现漏加或多加,检测结果就会异常,而且还很不容易发现。比较容易想到的方法是在无色的发光底物中加入有色物质,提升视觉效果。

3、但是这个方法存在一些问题,一方面是所有的有色物质对光都有吸收能力,结果就对化学发光产生的光也有一定的吸收效果,从而造成了发光信号下降。另一方面就是当使用黑色的96孔化学发光板时,即使底物液有色,在黑色的背景下肉眼仍然极难分辨,还是很容易漏加或多加发光底物。

<p>4、目前虽然白色化学发光板没有这个问题,但随着飞克级超高灵敏度化学发光底物的广泛使用,板式化学发光的光信号强度变高,而较高的发光强度虽然提升了试剂盒的灵敏度,但也容易造成光的“溢出”,即一个强阳性测试孔的超高信号造成周边的几个孔都呈现较高的信号水平,给检测带来一定的困扰和偏差。

5、而黑色的96孔化学发光板虽然本身会吸收掉部分光,但可以显著降低“溢出光”对检测的干扰,未来将逐渐获得更加广泛的应用。而黑色96孔板的这种视觉上不易观察的问题更加突出,尤其是操作人员在疲劳,眼花时非常容易出现失误。


技术实现思路

1、基于此,本申请提供一种基于荧光性化学发光底物的检测方法以减少加样偏差的风险。

2、本申请提供一种基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:在化学发光a液和/或化学发光b液中加入耐尔蓝a,混合加入耐尔蓝a后的化学发光a液与化学发光b液,得混合溶液;在板式化学发光免疫测定中,使用该化学发光底物,获得发光信号。

3、其中,所述化学发光a液包括鲁米诺和tris,所述化学发光b液包括过氧化氢。

4、在其中一个实施例中,所述耐尔蓝a在所述混合溶液中的终浓度为5ppm~100ppm。

5、在其中一个实施例中,所述多孔检测板为白色或黑色的多孔板。

6、在其中一个实施例中,所述多孔检测板为96孔板。

7、在其中一个实施例中,化学发光免疫测定中,化学发光的示踪物包括辣根过氧化物酶。

8、本申请通过提供一种基于荧光性化学发光底物的检测方法及荧光性化学发光底物的制备方法,通过在化学发光检测过程中加入耐尔蓝a,可以使无色透明的化学发光底物具备明亮的荧光,即使添加到黑色的96孔化学发光板中也能够产生明显的目视效果,解决了在发光底物的添加过程,多加,漏加发光底物的风险,有效提升了加样准确度。同时,本申请提供的检测方法还能有效避免绝大多数有色添加物会造成发光信号下降的问题,所选用的荧光染料耐尔蓝a不仅不会降低发光信号,还具有小幅度提升发光信号的效果,整体上显著提升了化学发光底物的使用效果。

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【技术保护点】

1.一种基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,所述耐尔蓝A在所述混合溶液中的终浓度为5ppm~100ppm。

3.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光的检测方法,其特征在于,所述多孔检测板为白色或黑色的多孔板。

4.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光的检测方法,其特征在于,

5.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,化学发光免疫测定中,化学发光的示踪物为辣根过氧化物酶。

【技术特征摘要】

1.一种基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光底物的检测方法,其特征在于,所述耐尔蓝a在所述混合溶液中的终浓度为5ppm~100ppm。

3.根据权利要求1所述的基于荧光性化学发光的检...

【专利技术属性】
技术研发人员:郑日记丁俊杰施启尧
申请(专利权)人:江苏三联生物工程股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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