【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及激活试剂、显色试剂、纤溶酶原活性检测试剂和/或试剂盒及其应用。
技术介绍
1、纤维蛋白溶解系统是凝血系统的重要组成部分，对于维持血液的流动性和血管的完整性起着至关重要的作用。纤溶酶原(以下简称plg)是溶解纤维蛋白和溶解血栓过程中关键的酶原前体之一，通过纤溶酶原激活剂激活而形成纤溶酶，进而发挥纤溶和栓溶作用。生理状态下，纤溶酶原是由肝脏合成的，以两种形式存在于人体内，即以谷氨酸为启始氨基酸的谷氨酸型纤溶酶原(glu-plg)和以赖氨酸为启始氨基酸的赖氨酸型纤溶酶原(lys-plg)，是由791个氨基酸组成的单链丝氨酸蛋白酶，相对分子量为84000～92000，包括7个结构域：n-端多肽区、5个环状结构域、丝氨酸蛋白酶结构域。plg激活因子分为两种，一种是内源性激活因子，包括组织型纤溶酶原激活剂(t-pa)、尿激酶型纤溶酶原激活剂，是存在于血液中并切割plg的arg561～val562肽键生成由二硫键连接的一条重链和一条轻链的蛋白酶，即双链形式的具有活性的纤溶酶，这种激活因子极易被纤维蛋白凝块所吸附，不利于血栓的溶解。另一种是外源性激活因子，如链激酶、葡激酶等，是有细菌产生的，它们的激活机理与t-pa不同。外源性激活因子本身不是蛋白酶，不裂解切割纤溶酶原肽链，而是必须与plg以1:1分子比结合成复合物，两者结合速度迅速且稳定，进而将plg活性位点暴露出来，转化为具有活性的纤溶酶。纤溶酶在溶解纤维蛋白和溶栓等方面发挥着重要作用。
2、研究表明，纤溶酶原缺乏包括遗传性缺乏和获得性缺乏。遗
3、目前检测纤溶酶原的方法有两种，一种为定量检测plg抗原的含量，如免疫分析法，此法方法比较特异和灵敏，但是操作繁琐、耗时，而且无法测定ii型plg缺乏；另一种为定量检测plg的活性，如发色底物法。目前，市场销售的同类产品试剂盒均采用发色底物法测定血浆plg活性，此法具有灵敏度高、准确性好、检测时间短等特点，且能够适用于多种自动化分析仪器，被医院认可为检测纤溶酶原活性的首选筛查实验。此外，此类产品试剂盒均为进口产品，且价格昂贵，限制了此项目在临床的广泛应用。
4、发色底物法的原理：纤溶酶原以无活性的酶原形式循环于血浆，在纤溶酶原激活剂激活下，血浆中纤溶酶原被激活，转化为具有活性的纤溶酶，纤溶酶作用于特异的发色底物，将底物裂解产生4-硝基苯胺(4-nitroaniline，pna)显色基团，4-硝基苯胺量和405nm处吸光度的变化呈正相关，所以产生的4-硝基苯胺的量和纤溶酶原活性成正相关。因此，利用测量405nm处吸光度的变化，可计算出血浆中纤溶酶原的活性水平。
5、为了解决此项目难以在医院推广应用的问题，基于发色底物法，开发一种纤溶酶原活性测定试剂盒及其制备方法尤为重要。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了激活试剂、显色试剂、纤溶酶原活性检测试剂和/或试剂盒及其应用。本专利技术试剂盒组成简单，易于制备，生产成本较低。本专利技术试剂盒针对链激酶和发色底物在水溶液中通常不稳定，不能长时间保存的问题，采用特定的稳定剂，能够有效地提高链激酶和发色底物在水溶液中的稳定性，并且以干粉型外观形态存在，将更有利于增强其稳定性。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了激活试剂，包括：
4、
5、
6、在本专利技术的一些实施方案中，上述激活试剂，包括：
7、
8、在本专利技术的一些实施方案中，上述激活试剂中，浓度为终浓度。
9、本专利技术还提供了显色试剂，包括：
10、发色底物 1.0～3.0mg/ml
11、甘露醇 5.0～9.0w/v％。
12、在本专利技术的一些实施方案中，上述显色试剂，包括：
13、发色底物 2.0mg/ml或3.0mg/ml
14、甘露醇 5.0w/v％、7.0w/v％或9.0w/v％。
15、在本专利技术的一些实施方案中，上述显色试剂中，浓度为终浓度。
16、本专利技术还提供了纤溶酶原的活性的检测试剂，包括：上述激活试剂和/或上述显色试剂。
17、在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂，还包括：50～100mmol/lhepes-naoh的缓冲液。
18、在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂，还包括：30mmol/l、50mmol/l、80mmol/l或100mmol/l hepes-naoh的缓冲液。
19、在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述缓冲液的ph值为7.2～8.0。
20、在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述缓冲液的ph值为7.2。
21、在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂，包括：
22、
23、
24、和/或
25、发色底物 1.0～3.0mg/ml
26、甘露醇 5.0～9.0w/v％
27、30mmol/l缓冲液 余量。
28、本专利技术还提供了上述检测试剂的制备方法，取所述激活试剂和所述显色试剂分别与所述缓冲液混合后，冷冻干燥，获得所述检测试剂。
29、本专利技术还提供了上述激活试剂、上述显色试剂、上述检测试剂和/或上述制备方法获得的检测试剂在制备检测纤溶酶原活性的试剂盒中的应用。
30、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测包括如下步骤：取预处理的样本与所述激活试剂混合后，再与所述显色试剂混合，显色反应后，根据od值，获得所述纤溶酶原的活性。
31、在本专利技术的一些实施方案中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.激活试剂，其特征在于，包括：
2.显色试剂，其特征在于，包括：
3.纤溶酶原活性的检测试剂，其特征在于，包括：如权利要求1所述的激活试剂和/或如权利要求2所述的显色试剂。
4.如权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，还包括：30～100mmol/L HEPES-NaOH的缓冲液。
5.如权利要求4所述的检测试剂的制备方法，其特征在于，取所述激活试剂和所述显色试剂分别与所述缓冲液混合后，冷冻干燥，获得所述检测试剂。
6.如权利要求1所述的激活试剂、如权利要求2所述的显色试剂、如权利要求3或4所述的检测试剂和/或如权利要求5所述制备方法获得的检测试剂在制备检测纤溶酶原活性的试剂盒中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测包括如下步骤：取预处理的样本与所述激活试剂混合后，再与所述显色试剂混合，显色反应后，根据OD值，获得所述纤溶酶原的活性。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述激活试剂与所述显色试剂的体积比为：1:1。
9.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于
10.纤溶酶原活性检测试剂盒，其特征在于，包括：如权利要求1所述的激活试剂、如权利要求2所述的显色试剂、如权利要求3或4所述的检测试剂和/或如权利要求5所述制备方法获得的检测试剂以及可接受的助剂或载体。
...【技术特征摘要】
1.激活试剂，其特征在于，包括：
2.显色试剂，其特征在于，包括：
3.纤溶酶原活性的检测试剂，其特征在于，包括：如权利要求1所述的激活试剂和/或如权利要求2所述的显色试剂。
4.如权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，还包括：30～100mmol/l hepes-naoh的缓冲液。
5.如权利要求4所述的检测试剂的制备方法，其特征在于，取所述激活试剂和所述显色试剂分别与所述缓冲液混合后，冷冻干燥，获得所述检测试剂。
6.如权利要求1所述的激活试剂、如权利要求2所述的显色试剂、如权利要求3或4所述的检测试剂和/或如权利要求5所述制备方法获得的检测试剂在制备检测纤溶酶原活性的试剂盒中的应用。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：张潇镱，徐丽秀，刘鹏，穆文超，
申请(专利权)人：创凝生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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