【技术实现步骤摘要】
本申请涉及蛋白定量检测，特别是涉及一种非fc蛋白定量检测的方法。
技术介绍
1、protein a是一种由金黄色葡萄球菌菌壁上的蛋白质，可以特异性地与人和多种哺乳动物的免疫球蛋白，尤其是igg的fc部位相结合。利用该原理制备的protein a亲和色谱柱是设计用于hplc和fplc系统的高流速高压色谱柱。其固定相采用平均粒径为20μm的多孔聚苯乙烯二乙烯基苯(ps/dvb)为基质，表面键合一层亲水涂层，涂层上以化学键合的方式连接重组protein a，可结合除igg3之外的含fc片段的免疫球蛋白。该色谱柱可用于抗体和fc融合蛋白的定量分析。
2、然而，并非所有的抗体或免疫蛋白类药物都含有fc片段，这些不含fc片段的抗体或免疫蛋白类药物即非fc蛋白。由于非fc蛋白不含fc片段，使其无法采用常规的proteina色谱柱进行定量分析，这使得非fc蛋白在生产过程中难以准确、及时的获得其表达量情况。
3、因此，如何快速、有效的对非fc蛋白进行定量检测，是非fc蛋白生产过程中亟待解决的难题。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种新的非fc蛋白定量检测的方法。
2、为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
3、本申请公开了一种非fc蛋白定量检测的方法，包括采用sec色谱柱对待测非fc蛋白样本进行hplc分析，获得待测非fc蛋白样本的总峰面积，将待测非fc蛋白样本的总峰面积带入标准曲线中，获得待测非fc蛋白样本的浓度；其中，标准曲线由若干个已
4、需要说明的是，本申请研究发现，非fc蛋白sec-hplc获得的总峰的峰面积与其浓度呈很好的线性关系，本申请的一种实现方式中，scfv+pepe蛋白的总峰面积与浓度的线性相关系数r2可以达到0.9998。因此，本申请创造性的提出，将sec-hplc检测与titer方法组合，形成sec-titer检测方法，用于非fc蛋白的定量检测。本申请的非fc蛋白定量检测方法，能够简单、快速、有效的获得非fc蛋白的定量检测结果，解决了非fc蛋白无法采用常规的proteina色谱柱进行定量分析的问题，为非fc蛋白的定量检测提供了一种新的方法和思路。
5、本申请的一种实现方式中，标准曲线的制备方法包括，采用sec色谱柱对若干个已知浓度的非fc蛋白的样本进行hplc分析，获得各已知浓度蛋白样本的总峰面积，以总峰面积为y轴，浓度为x轴拟合曲线，即获得标准曲线。
6、本申请的一种实现方式中，非fc蛋白为scfv+pepe蛋白。
7、需要说明的是，scfv+pepe蛋白只是本申请的一种实现方式中具体检测的非fc蛋白；可以理解，原则上，只要非fc蛋白的总峰面积与其浓度具有很好的线性关系，都可以采用本申请的定量检测方法，不仅限于scfv+pepe蛋白的定量检测。
8、本申请的一种实现方式中，若干个已知浓度的非fc蛋白的样本包括浓度为4.0mg/ml、3.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.2mg/ml的样本。
9、本申请的一种实现方式中，标准曲线为y＝622.47x-25.704，r2＝0.9998。
10、需要说明的是，以上具体浓度及其获得的具体的标准曲线只是本申请的一种实现方式中具体采用scfv+pepe蛋白进行试验采用的具体浓度和拟合曲线；可以理解，在本申请专利技术构思下，本领域技术人员完全可以采用其他浓度的非fc蛋白，从而获得其它的拟合曲线。
11、本申请的一种实现方式中，sec色谱柱hplc分析的洗脱条件为，流速0.8ml/min，柱温25℃，洗脱时间20min。
12、由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
13、本申请的非fc蛋白定量检测方法，直接通过待测非fc蛋白样本sec色谱柱hplc分析的总峰面积即可获得待测非fc蛋白样本的浓度，解决了非fc蛋白无法采用常规的proteina色谱柱进行定量分析的问题，为非fc蛋白的定量检测提供了一种简单、快速、有效的新方法。
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1.一种非Fc蛋白定量检测的方法，其特征在于：包括采用SEC色谱柱对待测非Fc蛋白样本进行HPLC分析，获得待测非Fc蛋白样本的总峰面积，将待测非Fc蛋白样本的总峰面积带入标准曲线中，获得待测非Fc蛋白样本的浓度；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标准曲线的制备方法包括，采用SEC色谱柱对若干个已知浓度的所述非Fc蛋白的样本进行HPLC分析，获得各已知浓度蛋白样本的总峰面积，以总峰面积为Y轴，浓度为X轴拟合曲线，即获得所述标准曲线。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述非Fc蛋白为ScFV+PepE蛋白。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：若干个已知浓度的所述非Fc蛋白的样本包括浓度为4.0 mg/mL，3.0 mg/mL，2.0 mg/mL，1.0 mg/mL，0.5 mg/mL，0.2mg/mL的样本。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述标准曲线为Y=622.47X-25.704，R2=0.9998。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：所述SEC色谱柱HP
...【技术特征摘要】
1.一种非fc蛋白定量检测的方法，其特征在于：包括采用sec色谱柱对待测非fc蛋白样本进行hplc分析，获得待测非fc蛋白样本的总峰面积，将待测非fc蛋白样本的总峰面积带入标准曲线中，获得待测非fc蛋白样本的浓度；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标准曲线的制备方法包括，采用sec色谱柱对若干个已知浓度的所述非fc蛋白的样本进行hplc分析，获得各已知浓度蛋白样本的总峰面积，以总峰面积为y轴，浓度为x轴拟合曲线，即获得所述标准曲线。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述非fc蛋白为s...
【专利技术属性】
技术研发人员：向正卿，王晨，邓剑锋，梁伟玲，
申请(专利权)人：深圳市乐土生命科技投资有限公司，
类型：发明
国别省市：
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