本发明专利技术提供一种聚核苷酸佐剂组合物以及引发免疫反应的使用方法。本发明专利技术亦提供一种免疫原组成物，包含该聚核苷酸佐剂组合物和抗原（例如此二种成份位于一疫苗内）。本发明专利技术的佐剂组合物具有特定的物理性质（例如分子量、浓度和ｐＨ），这些性质能符合所需的一种诱导增强免疫反应和改变免疫反应类型的有效且安全的佐剂。本发明专利技术更思及这些佐剂组合物的使用方法，特别是诱导对于抗原复合物的免疫反应。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要关于佐剂组合物以及使用这些佐剂组合物来促进免疫反应的方法，它特定关于用以促进抗原的免疫原性(immunogenicity)的组合物、疫苗和方法。它更特定关于聚核苷酸佐剂组合物、含有该聚核苷酸佐剂组合物的疫苗，以及利用所述聚核苷酸佐剂组合物和疫苗来促进宿主体内的免疫反应的方法。
技术介绍
1.相关技术的叙述免疫系统具有产生特异性和非特异性免疫力。一般而言，B和T淋巴细胞在他们的细胞表面上有针对特定抗原的特定受体，能产生特异性免疫。该免疫系统会对各抗原以二种方式特异免疫反应1)体液免疫反应，涉及刺激B细胞产生抗体或免疫球蛋白、抗原提呈细胞(APCs)功能及辅助性T细胞(Th1和Th2)功能，以及2)细胞免疫反应，一般涉及T细胞、包括细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)和其它涉及CTL反应的产生例如，Th1和/或Th2细胞以及APCs。非特异性免疫包含多种细胞作用机制，例如巨噬细胞(macrophages)或颗粒细胞(granulocytes)的吞噬作用(phagocytosis)以吞噬外来颗粒或抗原，以及天然杀伤细胞(NK细胞)活性等。非特异性免疫力依赖是原来的免疫机制，且不会展现出特异性和记忆性的获得性特性，该获得性特性是特异性免疫反应的典型特点。特异性和非特异性免疫之间的关键性差异是前者由淋巴细胞介导识别特异性抗原基序，具有记忆功能；而后者没有此功能。因此接种疫苗(涉及免疫特异性和记忆性)是一种保护机体以对抗有害病原体的有效机制。佐剂是增强机体对抗原的免疫反应或改变免疫反应类型的物质，当它和抗原共同给予时(与该抗原相混合，或在给予该抗原以前或后给予)会促进或改变对于该特定抗原的免疫反应及免疫反应的类型。常见促进免疫反应的典型佐剂包括铝化合物(该佐剂常被通称为铝佐剂″Alum″)、水包油乳剂(完全弗氏佐剂CFA是一种水包油乳剂，含有经干燥和热杀灭的结核杆菌)、皂甙(从皂质树QuillajaSaponoria皮分离而来，该佐剂活性成份被称为Quile A)、CpG ODN(合成寡去氧核苷酸，含有去甲基化的CpG二聚核苷酸)、MPL(从明尼苏达Re595沙氏杆菌(Salmonella minnesota Re595)的脂多醣衍生而来)、脂质体(通常由如磷脂等可生物降解性材料制成)以及可生物降解性聚合微球体(由如PLGA、聚膦腈(polyphosphazene)和聚酐等多种聚合物制成)。这些物质的佐剂性质已经过评估各有优缺点。将佐剂应用在人用疫苗，特别是儿童用常规疫苗的最大挑战在于大多数佐剂配方产生毒性和不良反应或者佐剂效果不显著。在疫苗研发所运用的新技术正朝向纯化、亚单位或合成抗原发展，这些抗原本身具有较弱的免疫原性。开发新佐剂以改善免疫原性/有效性并减低不良副作用是疫苗研发面对的一个主要挑战。聚核苷酸复合物已在试验用作佐剂等多种用途上。双链RNAs(dsRNAs)是非常有效的生物修饰因子，可在毫微摩尔浓度下对细胞引起明显作用。dsRNA的调控效应包括在分子和细胞水平上广泛的作用。在分子水平上，dsRNAs可诱导如干扰素(interferon)的合成、蛋白质激酶的产生、增进组织兼容性抗原以及抑制代谢作用等生物效应。在细胞水平上，dsRNA可激发如热原性(pyrogenicity)、细胞分裂(mitogenicity)、巨噬细胞活化、活化细胞免疫以及引发抗病毒等生物效应。dsRNAs的巨大前景在于抗微生物治疗上的免疫调控效应。美国专利第4,124,702号提出dsRNAs在活的动物细胞中诱导干扰素产生。美国专利第3,906,092号提出含有聚核苷酸或聚核苷酸复合物的佐剂型疫苗抗体产生增强。Houston等人建立PICLC(聚肌苷酸聚胞苷酸poly-L-赖氨酸-羧甲基纤维素复合物)作一种有效的佐剂，藉此增加初级抗体反应而无需其它佐剂的辅助(参见Houston et al.，Infection andImmunity，14318-9，1976C)。霉病毒型dsRNA(Mycoviral dsRNA)被发现能显著地增进凝血抗体对于绵羊红血球细胞的反应(参见Wrightand Adler-Moore，Biochemical and Biophysical Research Communications，131949-45，1985)。PIC(聚肌苷酸-聚胞苷酸)用于动物时，在一定剂量下会引起严重的毒性反应，例如，Phillips等人报导在2.0mg/kg剂量下亚慢性给予狗PIC会引起严重的毒性作用。毒性的表现为自发性活动减低、协调不良、厌食、呕吐、体重下降，血液变化反映在降低造血功能、碱性磷酸酶和转胺酶活性升高、胸腺退化、骨髓破坏、肝脏的小叶中心区窦状毛细血管扩张、肝细胞坏死、肝结构崩解以及全身性关节炎(参见Phillips et al.，Toxicology and Applied Pharmacology，18220-30，1971)。作为被研究最多的聚核苷酸复合物中的一种，PIC在用于猴和人体时并不有效，这是因为PIC在进入灵长类(包括人)体内后，会很快被灵长类以上动物体内的核酸酶降解。因此许多方式用来改进PIC的不足，例如，由PIC与poly-L-lysine hydrobromide复合物对于胰核糖核酸酶水解的抵抗性较原PIC高约5至15倍，又例如PIC与polyL-lysincarboxymethylcellulose复合物(简称PICLC)被发现是非常有效的抗病毒或抗肿瘤剂。PICLC是一种包含有聚核苷酸和聚核糖胞苷酸的合成dsRNA。虽然PICLC是一种有前景的免疫调控剂，在抗微生物与抗癌治疗有很好潜能，但在人体试验中产生严重不良副作用，特别是反复高剂量用药时。有报导的不良副作用包括发热、低血压、白血球减少(leucopenia)、肢体倦痛(myalgia)、血小板减少(thrombocytopenia)以及多关节痛(polyarthralgia)。因此该产品不能用于人体，该产品的毒性和稳定性问题必须被克服。以使得PICLC能使安全用于用人体。此外PICLC的治疗有效性受限于其在活体内的稳定性。一种包含有聚肌苷酸-聚胞苷酸(PIC)、卡那霉素(kanamycin)和钙离子(该复合物简称Av-PICKCa)的抗病毒药物被用于治疗病毒感染。已证实Av-PICKCa在机体诱导发干扰素与白介素-2的产生。单独给予Av-PICKCa作为抗病毒药物会刺激非特异性免疫反应，例如Av-PICKCa直接刺激下非针对特定抗原干扰素的产生。此种抗病毒反应非常不同于当佐剂与抗原共同给予时所产生的抗原特异性免疫反应。更重要的是本案专利技术人发现到Av-PICKCa具有佐剂的性质，也就是当与抗原共同给予时增强特异性免疫反应的能力。本案专利技术人发现当与狂犬病及出血热病毒抗原共同免疫时，Av-PICKCa是一种有效的佐剂。Lin等人叙述，Av-PICKCa可用作一种佐剂(参见Lin，et al.，A newimmunostimulatory complex(PICKCa)in experimental rabiesantiviraland adjuvant effects，Arch Virol，131307-19，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种聚核苷酸佐剂组合物，包含：聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸（ＰＩＣ）、抗生素以及阳离子，其中该组合物含有在分子量或大小中呈异质的聚核苷酸佐剂组合物分子，其中该分子量介于约６６，０００至１，２００，０００道尔顿的分子量范围内，且该大小介于约６．４Ｓ至２４．０Ｓ的分子大小范围内。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：林海祥，
申请(专利权)人：申益皮卡生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]
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