【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种干细胞无血清无饲养层培养基、制备方法及应用。
技术介绍
1、多能干细胞(pluripotency stem cell，psc)是一类具有自我更新、自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种apsc多能细胞。维持多能干细胞多能性和自我更新并不容易，常需要多种细胞因子和化合物才能达到一定的效果。相应地，出现了多种含有这些细胞因子和化合物的培养基。传统的多能干细胞培养基往往需要引入小鼠胚胎成纤维细胞(mef)作为滋养层细胞和血清作为多能干细胞的营养成分，然而其批间差、动物源性、各类感染源性、成分不确定性等影响实验研究的判断和进一步深入地应用研究。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的技术问题，提供以下技术方案：
2、本专利技术第一方面提供了一种干细胞培养的体系，所述体系命名为hpsm，所述hpsm由基础培养基和培养基添加物组成，所述基础培养基命名为hpsm1，所述培养基添加物命名为hpsm2；
3、所述hpsm1包括l-丙氨酸、l-精氨酸、l-精氨酸·盐酸、l-天冬氨酸、l-天冬酰胺·水、l-半胱氨酸·盐酸、l-半胱氨酸·2盐酸、l-谷氨酸、谷氨酰胺、l-组氨酸、l-羟脯氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-赖氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸、l-苏氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-缬氨酸、谷胱甘肽、d-生物素、d-泛酸、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺、维生素b12
4、所述hpsm2亚硒酸钠、维生素c、肝素钠、胰岛素、转铁蛋白、fgf2-g3、tgfβ3、nrg1中的至少一种。
5、进一步，所述hpsm1为l-丙氨酸、l-精氨酸、l-精氨酸·盐酸、l-天冬氨酸、l-天冬酰胺·水、l-半胱氨酸·盐酸、l-半胱氨酸·2盐酸、l-谷氨酸、谷氨酰胺、l-组氨酸、l-羟脯氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-赖氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸、l-苏氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-缬氨酸、谷胱甘肽、d-生物素、d-泛酸、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺、维生素b12、硫辛酸、氯化钠、氯化钾、氯化镁、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、硝酸钙、磷酸氢钠、硫酸镁、酚红、硫酸亚铁、硝酸铁、硫酸铜、硫酸锌、丙酮酸钠、葡萄糖、硫酸卡那霉素、腐胺·2盐酸、对氨基苯甲酸、亚油酸、次黄嘌呤、胸腺嘧啶的组合。
6、进一步，所述hpsm2为亚硒酸钠、维生素c、肝素钠、胰岛素、转铁蛋白、fgf2-g3、tgfβ3、nrg1的组合。
7、进一步，所述hpsm1包括l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·盐酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·盐酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2盐酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-组氨酸19.375mg/l、l-羟脯氨酸23.165mg/l、l-异亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-赖氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-丝氨酸13.625mg/l、l-苏氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-缬氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化胆碱6.24mg/l、叶酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、烟酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黄素0.2595mg/l、盐酸硫胺2.335mg/l、维生素b12 0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化钠6599.75mg/l、氯化钾355.9mg/l、氯化镁30.515mg/l、磷酸二氢钠62.5mg/l、碳酸氢钠3000mg/l、硝酸钙25mg/l、磷酸氢钠235.51mg/l、硫酸镁61.055mg/l、酚红6.56mg/l、硫酸亚铁0.2085mg/l、硝酸铁0.005mg/l、硫酸铜0.000625mg/l、硫酸锌0.216mg/l、丙酮酸钠110mg/l、葡萄糖2500mg/l、硫酸卡那霉素100mg/l、腐胺·2盐酸0.04025mg/l、对氨基苯甲酸0.25mg/l、亚油酸0.021mg/l、次黄嘌呤1.02mg/l、胸腺嘧啶0.1825mg/l中的至少一种。
8、进一步，所述hpsm2包括亚硒酸钠14μg/l、维生素c 64mg/l、肝素钠100μg/l、胰岛素19.4mg/l、转铁蛋白10.7mg/l、fgf2-g 340μg/l、tgfβ3 0.1μg/l、nrg1 0.1μg/l中的至少一种。
9、进一步，所述hpsm1为l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·盐酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·盐酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2盐酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-组氨酸19.375mg/l、l-羟脯氨酸23.165mg/l、l-异亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-赖氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-丝氨酸13.625mg/l、l-苏氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-缬氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化胆碱6.24mg/l、叶酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、烟酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黄素0.2595mg/l、盐酸硫胺2.335mg/l、维生素b12 0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化钠6599.75mg/l、氯化钾355.9mg/l、氯化镁30.515mg/l、磷酸二氢钠62.5mg/l、碳酸氢钠3000mg/l、硝酸钙25mg/l、磷酸氢钠235.51mg/l、硫酸镁61.055mg/l、酚红6.56mg/l、硫酸亚铁0.2085mg/l、硝酸铁0.005mg/l、硫酸铜0.000625mg/l、硫酸锌0.216mg/l、丙酮酸钠110mg/l、葡萄糖2500mg/l、硫酸卡那霉素1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种干细胞培养的体系，其特征在于，所述体系命名为hPSM，所述hPSM由基础培养基和培养基添加物组成，所述基础培养基命名为hPSM1，所述培养基添加物命名为hPSM2；
2.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述hPSM1包括L-丙氨酸2.225mg/L、L-精氨酸50mg/L、L-精氨酸·盐酸94.75mg/L、L-天冬氨酸8.325mg/L、L-天冬酰胺·水16.2525mg/L、L-半胱氨酸·盐酸7.88mg/L、L-半胱氨酸·2盐酸45.5725mg/L、L-谷氨酸8.675mg/L、谷氨酰胺549.65mg/L、L-组氨酸19.375mg/L、L-羟脯氨酸23.165mg/L、L-异亮氨酸5mg/L、L-亮氨酸65.935mg/L、L-赖氨酸68.225mg/L、L-蛋氨酸92.175mg/L、L-苯丙氨酸19.87mg/L、L-脯氨酸37.99mg/L、L-丝氨酸13.625mg/L、L-苏氨酸55.525mg/L、L-色氨酸9.76mg/L、L-酪氨酸42.36mg/L、L-缬氨酸54.825mg/L、谷胱甘肽0.25mg/L、D-生物素0.05
3.一种无血清无饲养层培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将权利要求1或2所述的hPSM2添加到已溶解于水的权利要求1或2所述的hPSM1中，混匀后调整pH值与渗透压，最后灭菌获得最终产物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述混匀温度为25℃；
5.一种由权利要求3或4所述的制备方法制备出的无血清无饲养层培养基。
6.权利要求1或2所述的体系、权利要求3或4所述的制备方法在制备细胞培养基中的应用；
7.权利要求1或2所述的体系、权利要求3或4所述的制备方法、权利要求5所述的无血清无饲养层培养基在培养干细胞中的应用；
8.一种体外培养干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求5所述的无血清培养基培养干细胞的步骤；
9.一种培养干细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的体系，配制说明书；
10.权利要求1或2所述的体系、权利要求3或4所述的制备方法在制备自动化生产无血清无饲养层的系统或装置中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种干细胞培养的体系，其特征在于，所述体系命名为hpsm，所述hpsm由基础培养基和培养基添加物组成，所述基础培养基命名为hpsm1，所述培养基添加物命名为hpsm2；
2.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述hpsm1包括l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·盐酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·盐酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2盐酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-组氨酸19.375mg/l、l-羟脯氨酸23.165mg/l、l-异亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-赖氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-丝氨酸13.625mg/l、l-苏氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-缬氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化胆碱6.24mg/l、叶酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、烟酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黄素0.2595mg/l、盐酸硫胺2.335mg/l、维生素b12 0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化钠6599.75mg/l、氯化钾355.9mg/l、氯化镁30.515mg/l、磷酸二氢钠62.5mg/l、碳酸氢...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘文斌，徐榕，王志荣，贾立昆，金威，
申请(专利权)人：北京同立海源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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