海藻糖衍生物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及具有通式（Ｉ）的海藻糖衍生物及其制备方法与应用。其中６，６’－双（２，３－二甲氧基苯甲酰基）－α，α－Ｄ－海藻糖具有优于天然产物Ｂｒａｒｔｅｍｉｃｉｎ的抗结肠癌２６－Ｌ５细胞侵袭活性，其ＩＣ５０为０．１０μｇ／ｍＬ（０．１５μＭ），而在１０μｇ／ｍＬ时没有细胞毒性，表现出高选择性的抗肿瘤侵袭活性，用于制备预防和治疗结肠癌等侵袭与转移的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一类海藻糖衍生物，其制备方法及抗肿瘤侵袭活性与应用，属于化学

技术介绍
Brartemicin是从放线菌Nonomuraea代谢产物中分离得到的海藻糖衍生物。该化 合物具有强的抗结肠癌26-L5细胞侵袭活性(IC5tl 0. 39 μ M)，而对正常细胞没有毒性，是高选择性抗肿瘤侵袭海藻糖衍生物。肿瘤侵袭是指恶性肿瘤细胞离开原发肿瘤向周围组织进攻，其标志是肿瘤细胞突 破基底膜。肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞脱离原发肿瘤，通过各种方式转移到其他组织或器 官继续生长，形成与原发肿瘤相同性质的继发性肿瘤的过程。肿瘤侵袭是肿瘤转移的前奏， 肿瘤转移是侵袭的继续和结果，二者密切相关。肿瘤侵袭与转移是恶性肿瘤的基本特征，是 临床肿瘤患者(90%以上)死亡的最主要原因。如何防止肿瘤侵袭与转移一直是肿瘤治疗 的最大难关。目前采用的大多数抗肿瘤药物主要是抑制肿瘤细胞的增殖和杀伤肿瘤细胞， 这对增殖期的肿瘤细胞特别有效，而对许多处于休眠或蛰伏期的肿瘤细胞无效；另外，肿瘤 转移细胞增殖率较低，对常规的肿瘤化学疗法也不敏感。因此，研制针对转移过程和微小转 移灶的抗肿瘤侵袭与转移药物显得尤为重要。针对现有技术的不足，本专利技术提供α，α-D-海藻糖-6，6’ _ 二芳酯衍生物及其制备方法。本专利技术还提供该类化合物的活性实验结果及其应用。基于分子设计的相似性，多样性原则，本专利技术设计合成了一系列α，α-D-海藻 糖-6，6’ _ 二芳酯衍生物，并对其抗肿瘤侵袭活性进行了研究，发现部分海藻糖衍生物具有 强的抗肿瘤侵袭活性和高选择性，具有潜在抗肿瘤侵袭与转移应用价值。术语解释光延(Mitsunobu)反应是日本科学家光延旺洋((Mitsunobu，0)专利技术的一种双分 子亲核取代反应。该反应能将醇通过与三苯基磷和偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)反应转化为
技术实现思路
多种化合物，比如酯等。DCC =N, N' - 二环己基碳二亚胺。EDC (3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。DMAP :4-N, N- 二甲基吡啶。HOBt 1-羟基-苯并三(氮)唑。本专利技术的技术方案如下海藻糖衍生物，具有通式(I)所示的结构 其中，R代表苯环上不同位置的取代基，包括单取代、双取代或三取代；R基团取代基包括甲氧基、羟基、氨基、烷基、商素、硝基或苄氧基。优选的，通式(I)中的R是2，3_ 二甲氧基，2-甲氧基，4-羟基，2，6_ 二氟或2-甲 基-6-氨基；双取代或三取代时可以相同，也可以不同。优选的，上述化合物(I)是下列之一6，6’ -双(2-甲氧基苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3a)、6，6’ -双(2-甲基苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3b)、6，6’ -双(4-甲氧基苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3c)、6，6’ -双(4-羟基苯甲酰基)_α，α-D-海藻糖(3d)、6，6’ -双(2，3_ 二甲氧基苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3e)、6，6，-双(2，6_ 二氟苯甲酰基)_α，α-D-海藻糖(3f)、6，6’ -双(2-甲基-6-氨基苯甲酰基)_ α，α-D-海藻糖(3g)、6，6’ -双(3-甲氧基-4-氟苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3h)或6，6，-双(3，4，5-三甲氧基苯甲酰基)-α，α-D-海藻糖(3i)。本专利技术的海藻糖衍生物的制备方法，合成路线如下 上述反应式中R代表的基团同前所述，(I)代表的化合物结构同前所述。该合成路线以苄基保护的海藻糖衍生物1为原料，通过与不同取代的苯甲酸缩 合，制备中间体(II)；最后催化氢化脱去苄基保护，得到海藻糖衍生物(I)。中间体(II)可采用常规酰氯与醇的反应来制备，即将不同取代的苯甲酸与氯化 亚砜、五氯化磷、三氯化磷或草酰氯反应制备成酰氯，再在碱的存在下与化合物1反应，但 收率较低(0-60% )。也可利用DCC或EDC缩合试剂，在DMAP或HOBt存在下直接缩合，但收 率较低(0-40% )。经研究发现，采用光延(Mitsimobu)反应，可高收率地制备中间体(II)。本专利技术的海藻糖衍生物的制备方法，具体步骤如下(1)将2，2’，3，3’，4，4’_六苄氧基-α，α _D_海藻糖(化合物1) 1个当量溶于适 当溶剂中，加入3. 0个当量的取代苯甲酸，4. 0当量的三苯基磷，滴加2. 0个当量的光延试 剂，搅拌反应2-12小时，分离纯化得中间体化合物(II)；(2)将中间体化合物(II)溶入一定的溶剂，加入钯/碳催化剂，氢气流下还原。纯 化后即得海藻糖衍生物(I)。优选的，步骤(1)中所述的取代苯甲酸为2_甲氧基苯甲酸、邻甲基苯甲酸、4-甲 氧基苯甲酸、4-苄氧基苯甲酸、2，3-二甲氧基苯甲酸、2，6_ 二氟苯甲酸、2-甲基-6-硝基苯 甲酸、3-甲氧基-4-氟苯甲酸或3，4，5_三甲氧基苯甲酸。优选的，步骤(1)中所述的溶剂为四氢呋喃或二氯甲烧，优选四氢呋喃。优选的，步骤(1)中所述的光延试剂为偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)或偶氮二甲酸 二乙酯(DEAD)，优选偶氮二甲酸二异丙酯。优选的，步骤(1)中的反应温度为0°C -25°C。优选的，步骤(2)中所述的溶剂为体积比为1 1的乙酸乙酯-乙醇的混合溶液； 所述的催化剂为10%钯/碳。含有本专利技术海藻糖衍生物的药物组合物一种药物组合物，包含本专利技术所述的海藻糖衍生物，和一种或多种药学上可接受 载体或赋形剂。本专利技术海藻糖衍生物的应用本专利技术所述的海藻糖衍生物的应用，用于制备抗肿瘤侵袭与转移药物，具体地，在 制备抗结肠癌26-L5细胞侵袭与转移的药物中的应用。海藻糖衍生物的抗肿瘤侵袭活性实验(1)实验原理侵袭及转移是恶性肿瘤的基本特征。在肿瘤转移过程中，肿瘤细胞侵袭基底膜是 重要环节。采用常规重组基底膜侵袭实验，以天然产物Brartemicin为阳性对照，测定海藻 糖衍生物对结肠癌26-L5细胞侵袭活性的抑制作用。(2)实验材料聚碳酸酯膜8ym(Nucleopore，Pleasanton, CA, USA) ；Transwe 11 细胞培养小室 (Costar3422, Cambridge, MA, USA)；纤维连接蛋白(FN ；Collaborative Research Inc.， Bedford,MA,USA) ；SMI^Matrigel (Collaborative Research Inc. ,Bedford,MA,USA)胎牛血清(FCS)RPMI1640 培养基(Collaborative Research Inc.，Bedford, MA, USA)； 苏木素伊红(HE)染色试剂盒(Collaborative Research Inc.，Bedford，MA，USA)。(3)实验方法Transwell细胞培养小室下层涂抹20 μ g纤维连接蛋白，上层涂抹5 μ g基质胶 Matrigel。将生长指数期的结肠癌26-L5细胞混悬于含含不同浓度的海藻糖衍生物或不 同浓度的Brartemicin的胎牛血清(FCS) RPMI1640培养基中。取100 μ 1上述混悬液 (2X104cells/chamber)加到小室上层，浸于24孔板的完全培养液中，37°C，5% CO2孵箱内 孵育6 8小时，取本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有通式（Ⅰ）的海藻糖衍生物：　　＊＊＊　（Ⅰ）　　其中，Ｒ代表苯环上不同位置的取代基，包括单取代、双取代或三取代；Ｒ基团取代基为甲氧基、羟基、氨基、烷基、卤素、硝基或苄氧基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘兆鹏，姜永莉，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]