【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测志贺氏菌的era引物探针组合物及试剂盒，属于细菌检测。
技术介绍
1、志贺氏菌(shigella)是一类革兰氏阴性短小杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，分为4个血清组，痢疾志贺氏菌(shigella.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(shigella.flexner)、鲍氏志贺氏菌(shigella.boydii)和宋内志贺氏菌(shigella.sonnei)，福氏志贺氏菌为最常见的感染病原体。志贺氏菌主要是通过摄取(粪便-口的污染)食物感染，常见的症状是腹泻、发烧、恶心、呕吐、胃抽筋、肠胃气胀和便秘。志贺氏菌引发的细菌性痢疾已发展为世界性流行趋势，我国至少在10余省、区发生了不同规模流行。
2、志贺氏菌可采用分离培养鉴定、荧光菌球法、荧光pcr法等方法进行检测。分离培养鉴定需要1-2天时间，荧光菌球法需要6-10小时，荧光pcr法需要2-3小时。
3、本专利技术提供的检测志贺氏菌核酸的era引物探针组合物，不需要昂贵的全自动荧光pcr仪，利用恒温设备即可简单快捷(20分钟以内)的检测志贺氏菌。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测志贺氏菌的era引物探针组合物，能够快速检测全部的志贺氏菌。
2、本专利技术采用的技术方案为：
3、一种检测志贺氏菌的era引物探针组合物，包括引物对，所述引物对的序列如seqid no：1及seq id no：2所示，还包括探针，所述探针的序列为：5-tag
4、探针的修饰信息解释如下：
5、/ifamdt/，5’端第30个碱基t标记有fam荧光报告基团；
6、/idsp/，3’端第16碱基替换为四氢呋喃；
7、/ibhq1dt/，3’端第15碱基t标记有bhq1荧光淬灭基团；
8、探针的3’端标记有c3 spacer基团。
9、本专利技术还公开了上述的era引物探针组合物在制备检测志贺氏菌的试剂中的应用。
10、本专利技术还公开了一种检测志贺氏菌的试剂盒，包含上述的era引物探针组合物。
11、本专利技术还公开了一种检测志贺氏菌的方法，其步骤包括：
12、(1)提取样本中的核酸；
13、(2)提取的样本核酸为模板，加入上述的引物探针组合物，以及酶促重组等温扩增试剂，进行酶促重组等温扩增反应，在反应过程中检测反应液的荧光信号，绘制成扩增曲线，根据样本扩增曲线的ct值，判断样本中是否存在志贺氏菌。如果存在特异性的扩增曲线，且样本扩增曲线的ct值小于30，则认为样本中存在志贺氏菌。，。
14、优选的，步骤(2)中的酶促重组等温扩增反应在恒温荧光检测仪中进行。
15、优选的，步骤(2)中酶促重组等温扩增反应的温度为40℃，反应时间15分钟。
16、本专利技术的有益效果是操作简便、检验耗时少，不需要复杂昂贵的设备和实验室，可应用于快速检测志贺氏菌核酸的试剂或试剂盒。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种检测志贺氏菌的ERA引物探针组合物，其特征在于包括引物对，所述引物对的序列如SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2所示，还包括探针，所述探针的序列为：5-TAGTGGTGCTGATGTATATG TTATTGGGT/iFAMdT/A/idSp//iBHQ1dT/TGGTGAG CGAGGTC-C3 Spacer-3。
2.根据权利要求1所述的ERA引物探针组合物在制备检测志贺氏菌的试剂中的应用。
3.一种检测志贺氏菌的试剂盒，其特征在于包含权利要求1所述的ERA引物探针组合物。
4.一种检测志贺氏菌的方法，其特征在于其步骤包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中的酶促重组等温扩增反应在恒温荧光检测仪中进行。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：步骤(2)中酶促重组等温扩增反应的温度为40℃，反应时间15分钟。
【技术特征摘要】
1.一种检测志贺氏菌的era引物探针组合物，其特征在于包括引物对，所述引物对的序列如seq id no：1及seq id no：2所示，还包括探针，所述探针的序列为：5-tagtggtgctgatgtatatg ttattgggt/ifamdt/a/idsp//ibhq1dt/tggtgag cgaggtc-c3 spacer-3。
2.根据权利要求1所述的era引物探针组合物在制备检测志贺氏菌的试...
【专利技术属性】
技术研发人员：张陆明，张勇，
申请(专利权)人：江苏普若维生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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